27.8%噻呋酰胺·己唑醇悬浮剂的分析方法研究

张世芹，吴新文，魏 杰，陈迎丽，王 睿

(贵州省检测技术研究应用中心，贵州 贵阳 550014)

噻呋酰胺是噻唑酰胺类杀菌剂，在叶面喷雾或土壤浇灌时，能迅速被植物根和叶吸收，并在整个植物体的木质部和质外体传导，常用于水稻、马铃薯、玉米和市容草，主要防治担子菌纲真菌引起的纹枯病[1-3]。己唑醇是三唑类杀菌剂，具有保护和治疗活性，用于防治子囊菌和担子菌引起的病害，能有效防治纹枯病、白粉病和黑星病、葡萄黑腐病和白粉病、咖啡锈病、花生叶斑病等[4-5]。二者复配对水稻纹枯病的有效防治以及缓解单一药剂长期使用可能导致的病原菌抗药性风险具有非常明显的特效作用[6-7]。

目前，噻呋酰胺和己唑醇分别已经报道了液相色谱、气相色谱以及GC-MS的分析方法[8-15]，而二者复配制剂没有相关国家标准、行业标准以及地方标准，关于有效成分同时分析也鲜有公开报道[16-17]。本试验建立了一种对27.8%噻呋酰胺·己唑醇悬浮剂中的有效成分同时进行定量分析的高效液相色谱方法，该方法操作更为简便、快速，分离效果好，线性关系、准确度和精密度均满足要求，检测机构间验证结果亦符合性良好，适用于生产和监管环节中的质量控制。

1 实验部分

1.1 试剂和溶液 甲醇(HPLC级)，超纯水(电阻率，18.2 MΩ·cm，25℃)，噻呋酰胺标准品(ω=99.0%)，己唑醇标准品(ω=99.0%)，27.8%噻呋酰胺·己唑醇悬浮剂。

1.2 仪器 高效液相色谱仪：Agilent 1260，具有DAD检测器；Agilent色谱数据处理工作站；梅特勒-托利多电子天平XSE205DU型；明澈超纯水制备系统；色谱柱：Thermo Scientific AcclaimTM120 C18(250mm×4.6mm，5μm)。

1.3 高效液相色谱操作条件 流动相：体积比Ψ(甲醇﹕水)=75：25，流速：1.0mL/min，柱温：35℃，进样体积：5μL，检测波长：230nm。在上述色谱操作条件下噻呋酰胺保留时间约为8.2min，己唑醇保留时间约为13.2min。标样及27.8%噻呋酰胺·己唑醇悬浮剂的高效液相色谱(图1、图2)。

图1 噻呋酰胺、己唑醇标样色谱图

图2 27.8%噻呋酰胺·己唑醇悬浮剂色谱图

1.4 测定步骤

1.4.1 标样溶液的配制 准确称取噻呋酰胺标准品0.025g、己唑醇标准品0.025g，置于50mL容量瓶中，用甲醇溶解，超声波振荡5min，冷却至室温，用甲醇稀释至刻度，摇匀，得到噻呋酰胺、己唑醇的混合标样储备液。

1.4.2 试样溶液的配制 称取含0.025g噻呋酰胺的试样，置于50mL容量瓶中，先加入5mL水使试样分散，再加入甲醇溶解，超声波振荡5min，冷却至室温，用甲醇稀释至刻度，摇匀，过滤。

1.5 测定 在上述操作条件下，待仪器稳定后，连续注入数针标样溶液，直至相邻2针噻呋酰胺和己唑醇峰面积相对变化<1.2%后，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。

1.6 计算 将测得的2针试样溶液以及试样前后2针标样溶液中噻呋酰胺和己唑醇峰面积分别进行平均。试样中噻呋酰胺(己唑醇)质量分数按式(1)计算：

(1)

式中：

ω1——试样中噻呋酰胺(己唑醇)的质量分数，%；

A2——试样溶液中噻呋酰胺(己唑醇)峰面积的平均值；

m1——标样的质量，g；

ω——标样中噻呋酰胺(己唑醇)的质量分数，%；

A1——标样溶液中噻呋酰胺(己唑醇)峰面积的平均值；

m2——试样的质量，g。

2 结果与讨论

2.1 色谱条件的选择 使用Agilent 1260的DAD检测器将检测波长调整为波长扫描范围为190～400nm对噻呋酰胺、己唑醇标样进行3D谱图扫描，得到噻呋酰胺、己唑醇的紫外吸收曲线图及光谱图，从图中可以看到噻呋酰胺(204nm)和己唑醇(202nm)在205nm附近出现最大吸收，甲醇溶剂的截止波长和背景吸收可能会对目标峰产生一定分析干扰，且选择在230nm波长处，标样及试样中噻呋酰胺与己唑醇上行峰光谱图与下行峰光谱图一致，且噻呋酰胺和己唑醇标样、27.8%噻呋酰胺·己唑醇悬浮剂中有效成分峰纯度值均>990，确认有效成分处无其它物质干扰，符合定量分析要求(图3、图4)。

图3 噻呋酰胺、己唑醇紫外吸收曲线

图4 噻呋酰胺、己唑醇HPLC-DAD峰纯度色谱图

根据企业标准信息公共服务平台中同类产品的企业标准和2012版《农药分析手册》。经过反复测试的结果显示：选择250mm×4.6mm(i.d.)不锈钢柱，内装C18、5μm填充物的反相色谱柱，当流速控制在1.0mL/min，流动相甲醇+水=75+25(V/V)时，分析时间适宜，分离度及峰型较好。

2.2 线性相关性测定 在一定质量范围内，按照浓度递增的顺序配制数个噻呋酰胺(己唑醇)混合标样样品，在1.3的色谱条件下，测定噻呋酰胺(己唑醇)的峰面积，取2次测定的平均结果。以噻呋酰胺(己唑醇)质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，分别得到噻呋酰胺的线性方程为y=8.961 7x-10.038，相关系数R2为0.999 8；己唑醇的线性方程为y=6.021 7x-1.917，相关系数R2为1.000 0，结果(表1、图5)。

表1 线性范围的测定结果

图5 噻呋酰胺、己唑醇线性关系图

2.3 分析方法的精密度 准确称取6个供试物，在上述色谱操作条件下进行分析，计算噻呋酰胺、己唑醇的标准偏差和变异系数，结果显示本方法对27.8%噻呋酰胺·己唑醇悬浮剂中噻呋酰胺和己唑醇的含量测定有良好的精密度，满足NT/T 2887—2016《农药产品质量分析方法确认指南》3.3制剂中有效成分和相关杂质关于精密度(重复性)的要求，结果(表2)。

表2 分析方法的精密度测定结果

2.4 分析方法的准确度试验 称取已知质量分数的试样5份，分别加入一定量的噻呋酰胺(己唑醇)标准样品，在1.3的色谱条件下测定噻呋酰胺(己唑醇)含量并计算回收率，噻呋酰胺的回收率范围为99.25%～101.46%，己唑醇的回收率范围为99.26%～101.92%，均满足NT/T 2887—2016《农药产品质量分析方法确认指南》3.3制剂中有效成分和相关杂质关于准确度的要求，结果(表3)。

表3 准确度试验结果

2.5 实验室间验证试验 将用于建立方法的27.8%噻呋酰胺·己唑醇悬浮剂和标样，发送至其他3家检测实验室，要求按照已建立的方法进行方法验证试验。各单位在2个不同日期对样品含量进行重复测定，从统计结果看，27.8%噻呋酰胺·己唑醇悬浮剂中噻呋酰胺再现性相对标准偏差RSDR为1.622 1%；己唑醇再现性相对标准偏差RSDR为0.963 5%，都<相应的Horwitz公式2(1-0.51ogC)理论计算值，表明不同实验室间的检测结果符合性良好，该方法可以满足日常检测工作需要，数据统计结果(表4)。

表4 各单位验证试验数据统计结果

续表

3 结论

试验建立了27.8%噻呋酰胺·己唑醇悬浮剂中有效成分的液相色谱分析方法，该方法操作简便、快速，分离效果好，线性关系、准确度和精密度均满足要求，不同检测机构运用该方法检测结果符合性亦良好，适用于生产和监管环节中对噻呋酰胺和己唑醇复配制剂中有效成分的质量检测。