一起高致病性蓝耳病的综合诊断

李培勋，林淑玲，孟凡亮，沈叶盛，赵伊然，王泰龙，李宝全*，刘思当*

（1.山东农业大学，山东 泰安 271018；2.山东省栖霞市动物疫病预防与控制中心，山东 栖霞；3.华云（山东）检验检疫服务有限公司，山东 泰安）

猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引发的一种高度接触性、烈性传染病[1]。PRRS最早发现于美洲，1995年左右出现在中国。PRRSV 只感染猪，主要感染巨噬细胞尤其是肺泡巨噬细胞[2]，PRRSV感染可导致严重的间质性肺炎及免疫抑制，感染猪体可导致严重的呼吸道症状及免疫抑制[3]，怀孕母猪出现流产、早产、木乃伊胎等繁殖障碍，高致病性变异毒株致病力显著增强，易感猪感染表现以呼吸道症状为特征的急性败血症[4]，因PRRSV易变异、重组，又具有抗体依赖性增强和持续性感染的特性，严重危害世界养猪业[5]。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 样品来源 2021年7月份邹城某猪场为一自繁自养小规模猪场，60多日龄的保育猪舍个别猪只出现发烧、厌食、呼吸困难等症状。样品来自该场病猪。

1.1.2 仪器、试剂 PCR 仪（Takara）、4 ℃ 离心机（Eppendorf）、DYYnl-2型电泳仪（Biorad）、高压灭菌锅（日本三洋）、石蜡切片机（德国徕卡）、SimplyP 病毒 DNA/RNA 共提取试剂盒（杭州博日科技有限公司）、Easy Script Onestep RT-PCR Super Mix（北京全式金生物技术有限公司）、苏木素、伊红染料（索莱宝）。

1.2 方法

1.2.1 病理学诊断 （1）剖检诊断。剖检病死猪，眼观颌下淋巴结、扁桃体、腹股沟淋巴结、肺脏、心脏、脾脏、肝脏、肾脏、肠道和膀胱等器官组织病变，进行初步诊断。（2）病理组织学诊断。取病变器官组织，用 10 % 的福尔马林溶液固定，修剪病变组织至适当大小，常规石蜡切片，HE染色，在显微镜下观察组织学病变。

1.2.2 病原学检测 （1）核酸提取及扩增。选取剖检所见病变明显的器官组织，放入研磨器中，加入 20 ml生理盐水进行研磨。研磨完成后分装到离心管中，以便进行检测。选取一管研磨液提取病毒核酸，配制反应体系，进行 PCR扩增，并对扩增后的DNA进行检测。1 %琼脂糖凝胶进行电泳，并在紫外照胶仪下拍照观察。（2）序列测定。用PRRSV NSP2全长引物对阳性样品进行扩增，目的片段切胶胶回收，与 PMD18-T进行连接转化，选取PCR鉴定阳性菌落，送至生工生物工程公司测序。（3）遗传进化分析。将本研究分离毒株的序列与参考序列进行遗传进化分析，用Megline软件构建系统发育树。

2 结果与分析

2.1 剖检病变

剖检病变如图1，可见肺小叶间质增宽，全肺暗红色实变，切面结构致密，鲜红色血液溢出。颈部及肺部淋巴结充血肿大。

图1

2.2 病理组织学病变

病理组织学病变见图 2，肺泡壁间质增宽，大量淋巴细胞、巨噬细胞浸润，有的肺泡腔内见脱落的肺泡上皮细胞、巨噬细胞及淋巴细胞。

图2

2.3 病原学检测

检测结果见图 3，检测猪瘟病毒、猪蓝耳病病毒、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒，猪蓝耳病病毒阳性，其余均为阴性。

图3

2.4 遗传进化分析

本次试验样品分离出的病毒与高致病性蓝耳病病毒毒株同源性最高。

图4 病毒毒株进化树

据临床症状表现、剖检病变、病理组织学检查、病原学检测及遗传进化分析结果，该病例最后确诊为高致病性蓝耳病。

3 讨论

经调查得知该猪场应用经典毒株疫苗免疫，后备母猪配种前 2次免疫驯化，基础母猪每年普免3次，商品猪2周龄一次免疫。近年来一直使用该免疫程序，以往未曾发生过类似疫情。该猪场病猪只见于 60多日龄的保育猪，说明存在仔猪免疫失败现象，分析其原因主要是仔猪只在 2周龄是一次免疫，免疫力度不够，一旦有高致病PRRSV感染，必然会导致部分猪只发病。

建议加强仔猪免疫，在 2周龄免疫的基础上，6周龄进行二免；对发病猪群泰万菌素和抗病毒药物饮水或拌料治疗，该猪群经过治疗，病情很快得到好转；健全生物安全体系，加强饲养管理，减少应激反应，增强猪群尤其是保育猪的健康体质。