阿比特龙对老年前列腺癌病人PI3K/AKT信号通路及肿瘤标志物水平的影响

王建卫 王强 李鼎

前列腺癌是威胁中老年男性健康的常见恶性肿瘤，具有高发病率及致死率，严重影响病人生活质量，但其发病机制目前尚不完全明确[1]。近年来，越来越多的研究显示，磷脂肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路参与调节机体细胞生长、增殖、凋亡、炎症反应等多种生理过程，并在前列腺癌的发生发展中发挥重要作用[2]。前列腺癌治疗手段多样，然而对于晚期前列腺癌，大部分病人在治疗1年后应答水平逐渐降低，肿瘤进展，进入去势抵抗性前列腺癌阶段[3-4]。阿比特龙是一种新型内分泌治疗药物。有研究显示，阿比特龙联合泼尼松治疗未经化疗去势抵抗性前列腺癌病人，可延长病人影像学无进展生存期[5]。本研究采用阿比特龙治疗老年去势抵抗性前列腺癌病人，观察其对病人PI3K/AKT信号通路及肿瘤标志物水平的影响，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 纳入2018年6月至2020年6月我院收治的88例老年前列腺癌病人为研究对象，年龄60～78岁，平均(69.57±5.59)岁，按照随机数表法分为观察组和对照组，每组各44例。本研究获得我院医学伦理委员会批准，2组一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

表1 2组一般资料比较

1.2 纳入标准 (1)病人均符合前列腺癌临床诊断标准[6]，且经病理组织学检查确诊；(2)病人均符合去势抵抗性前列腺癌标准：血清睾酮浓度<1.7 nmol/L，达到去势水平；每隔2周，连续3次前列腺特异性抗原(PSA)水平升高，且2次PSA均较最低值升高50%，绝对值>2 ng/mL；抗雄激素撤退治疗无效或连续给予内分泌治疗仍然出现PSA进展[7]；(3)入院前1个月内未使用酮康唑、抗雄性激素等其他药物治疗；(4)TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期；(5)年龄≥60岁；(6)获有效随访，临床资料完整；(7)病人或其家属知情同意，签署知情同意书。

1.3 排除标准 (1)存在病毒性肝炎史、慢性肝脏疾病史或转氨酶水平异常者；(2)对试验药物过敏者；(3)垂体或肾上腺皮质功能减退者；(4)既往接受细胞毒化疗或生物疗法治疗者；(5)治疗依从性差，未完成治疗方案者；(6)中途退出或随访脱落者。

1.4 方法 对照组予以泼尼松(浙江仙琚制药股份有限公司，国药准字H33021207)口服，5 mg/次，2次/d。观察组予以醋酸阿比特龙(正大天晴药业集团股份有限公司，国药准字H20193207)口服，1000 mg/次，1次/d；联合泼尼松口服，5 mg/次，2次/d。2组均以4周为1个治疗周期，治疗2个周期后观察相关指标。为保障病人顺利完成治疗及相关随访，治疗期间加强与病人及家属沟通，缓解病人不良情绪，加强出院及用药指导，叮嘱病人及时进行复查。

1.5 观察指标 (1)观察2组治疗后2个月PI3K和AKT的表达情况。经穿刺手术取前列腺癌组织3 mg，于-80 ℃冰箱保存待检，取组织剪碎，于匀浆器中加入400μL单去污剂裂解液，4 ℃下2400 r/min离心5 min，去上清分装于Ep管中-20 ℃保存。BCA 工作液测定其中蛋白浓度。配12%分离胶和5%浓缩胶，泳道边缘加1× Loading Buffer，接好电极80 V电压浓缩胶，至分离胶时调整电压至120 V，待染料达到分离胶底部时即可停止。电泳完毕后，根据目的蛋白分子量进行切胶，使聚偏二氟乙烯膜、滤纸与胶匹配，进行130 mA稳流转膜2 h；将转好的聚偏二氟乙烯膜放入5%脱脂奶粉封闭液的小盒中，4 ℃摇床上封闭2 h；将杂交膜放入杂交袋中，加入稀释好的一抗工作液37 ℃孵育2 h或者过夜，用洗涤缓冲液(TBST)洗膜3次，每次分别洗15、10、10 min。按1∶5000稀释二抗，加入1 h后TBST洗膜3次，均5 min；显影，定影，采用Quantity One软件分析PI3K和AKT的相对表达量。(2)比较2组治疗前1 d及治疗后2个月肿瘤标志物水平。采集病人空腹外周静脉血5 mL，经3000 r/min离心10 min，血清分离后置于-20 ℃冰箱保存备测。采用罗氏Cobase 601型全自动电化学发光分析仪及配套试剂盒检测血清癌胚抗原(CEA)、肿瘤细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)及PSA水平。(3)比较2组治疗前1 d及治疗后2个月T淋巴细胞亚群分布及炎症因子水平。采用美国贝克曼库尔特公司生产的Beckman型流式细胞仪进行细胞收获，并采用Simulset软件进行结果分析，检测T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+分布情况，试剂盒均由上海康朗生物科技有限公司提供；采用酶联免疫吸附法检测IL-8、TNF-α水平，试剂盒来自郑州安塞生物科技有限公司。(4)所有病人均随访1年，前6个周期每8周行骨扫描、CT、MRI检查，6个周期后每12周行骨扫描、CT、MRI检查，通过主动复诊及电话方式对病人进行随访，调查病人1年生存情况。

2 结果

2.1 2组治疗后PI3K/AKT信号通路表达水平比较 观察组治疗后AKT、PI3K表达水平均显著低于对照组(P<0.05或P<0.01)，见表2。

表2 2组治疗后PI3K/AKT信号通路表达水平比较

2.2 2组治疗前后肿瘤标志物水平比较 2组治疗后血清PSA、CEA、CYFRA21-1、NSE水平均显著低于治疗前(P<0.05)；且观察组低于对照组(P<0.01)，见表3。

表3 2组治疗前后肿瘤标志物水平比较

2.3 2组治疗前后T淋巴细胞亚群分布及炎症因子水平比较 2组治疗后CD4+、CD4+/CD8+水平显著高于治疗前(P<0.05)，IL-8、TNF-α水平显著低于治疗前(P<0.05)；观察组治疗后CD4+、CD4+/CD8+水平显著高于对照组(P<0.05)，IL-8、TNF-α水平显著低于对照组(P<0.05或P<0.01)，见表4。

表4 2组治疗前后T淋巴细胞亚群分布及炎症因子水平比较

2.4 2组病人1年生存情况比较 1年随访期内，观察组死亡2例，死亡率为4.55%；对照组死亡9例，死亡率为20.45%，观察组1年总生存率显著高于对照组(P<0.05)。

3 讨论

前列腺癌在老年男性群体中多发，晚期前列腺癌病人的手术、传统内分泌治疗等手段可在一定程度上降低血清雄激素水平，延缓肿瘤进展，延长病人生存期，但多数病人在治疗后期会出现应答水平降低，PSA与血清睾酮水平逐渐升高，肿瘤进展，进入去势抵抗性前列腺癌阶段[8-10]。目前对于去势抵抗性前列腺癌阶段病人，常用的治疗药物有细胞毒类化疗药物和内分泌治疗药物[11]。阿比特龙是细胞色素P450 17A1酶抑制剂，作为临床新型的内分泌治疗药物，其对老年前列腺癌病人的作用效果尚不明确，故本文对此展开相关分析，观察阿比特龙对老年前列腺癌病人PI3K/AKT信号通路及肿瘤标志物水平的影响。

本研究结果显示，观察组治疗后PSA、CEA、CYFRA21-1、NSE、IL-8、TNF-α水平均显著低于治疗前及对照组，CD4+、CD4+/CD8+水平显著高于治疗前及对照组，提示在泼尼松基础上应用阿比特龙可明显改善病人的炎症反应，调节免疫功能，降低肿瘤标志物水平。血清肿瘤标志物是鉴别诊断肿瘤的有效指标，也与病人机体炎症反应和免疫功能密切相关[12]。研究显示，前列腺癌病人血清PSA、CEA、CYFRA21-1、NSE均为异常升高状态，且其水平与肿瘤恶性程度呈正相关[13]。CD4+与免疫活性细胞呈正相关，抑制性T细胞CD8+在抗肿瘤效应中发挥负调节作用，前列腺癌病人细胞免疫处于抑制状态，免疫功能低下则会促进肿瘤的发生、发展[14]。雄激素持续刺激前列腺癌细胞内的雄激素受体是前列腺癌进展的主要原因，P450 17A1酶在体内雄激素合成的途径上起到关键作用，可促进雄激素分泌，加重炎症水平[15]。阿比特龙主要通过抑制P450 17A1酶而发挥作用，P450 17A1酶活性抑制后可明显减少来源于肾上腺及前列腺癌细胞的雄激素合成，从而降低病人雄激素水平，遏制肿瘤发展，降低炎症及肿瘤标志物水平。

本研究结果显示，观察组治疗后AKT、PI3K表达水平均显著低于对照组，提示阿比特龙对老年去势抵抗性前列腺癌阶段病人的积极疗效可能与其对PI3K/AKT信号通路的调节有关。P13Ks是一种异源二聚体，由催化亚单位P110与调节亚单位P85组成，是肌醇和磷脂酰肌醇的重要激酶，具有脂类激酶活性和蛋白激酶活性[16]。AKT为P13K/AKT信号通路中的一个核心激酶，活化后可通过多种方式影响其下游的相关分子，是关键的抗凋亡调控分子[17]。雄激素和雄激素受体间的相互作用在前列腺癌的发生发展中发挥重要作用，雄激素通过与前列腺细胞内雄激素受体结合调节细胞的生长、分化、凋亡[18]。通过阻断P13K/AKT信号通路可导致激活雄激素受体的通路失活，从而降低雄激素水平，阻碍前列腺癌进展。阿比特龙联合泼尼松治疗可下调AKT、PI3K表达，调控P13K/AKT信号通路，控制前列腺癌的发展。此外，本研究显示，观察组1年总生存率显著高于对照组，表明阿比特龙对延长前列腺癌病人生存时间具有价值，李俊等[19]的研究也显示，阿比特龙联合泼尼松治疗去势抵抗性前列腺癌病人较单纯泼尼松治疗可显著延长病人影像学无进展生存期及总体生存期。

综上，阿比特龙治疗老年前列腺癌病人可显著降低肿瘤标志物水平，改善炎症及免疫功能，并调控PI3K/AKT信号通路，对延长病人生存期具有价值。