各型支气管肺炎患儿淋巴细胞亚群的变化及价值

黄晓茹，陈 杭，林 珊，张忠龙

福建医科大学附属福州儿童医院检验科，福建福州 350005

支气管肺炎是累及支气管壁和肺泡的炎症，为儿童时期最常见的呼吸系统疾病，2～3岁儿童多发[1]。引起支气管肺炎的病因主要有细菌、病毒和肺炎支原体，其中引起支气管肺炎的病毒主要有呼吸道合胞病毒、腺病毒、流感病毒和副流感病毒等；细菌主要有肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、流感嗜血杆菌等。淋巴细胞亚群是机体免疫防御体系中的重要组成部分，可反映机体细胞免疫和体液免疫水平，其变化与感染性疾病类型和程度有关[2-3]。本研究通过对不同类型支气管肺炎的外周淋巴细胞亚群、血小板压积(PCT)等的变化作回顾性分析，探讨淋巴细胞亚群、PCT变化在患儿支气管肺炎的病因诊断中的临床价值。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2019年8月至2021年8月在福建医科大学附属福州儿童医院诊断为支气管肺炎的患儿173例作为感染组，再按照其所感染病原体的种类分为细菌组30例、肺炎支原体组30例、病毒组30例、2种病原体组73例和3种病原体组10例。同时选取在本院进行健康体检的健康儿童30例作为对照组。各组研究对象的一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性，见表1。纳入标准：(1)结合临床症状及血常规、影像学等相关检查，符合《儿科学》[4]中支气管肺炎诊断标准；(2)细菌组经咽拭子或痰标本培养出致病菌，肺炎支原体及病毒相关检测均为阴性；(3)肺炎支原体组的血清肺炎支原体免疫球蛋白(Ig)M抗体阳性，细菌及病毒相关检测均为阴性；(4)病毒组血清相关特异性IgM抗体或咽拭子13种呼吸道病原体核酸检测阳性，细菌及肺炎支原体相关检测均为阴性；(5)2种病原体组同时检出2种类型病原体，包括细菌和肺炎支原体相关检测均为阳性，病毒为阴性或细菌和病毒相关检测均为阳性，肺炎支原体为阴性或肺炎支原体和病毒相关检测均为阳性，细菌为阴性这3种情况；(6)3种病原体组同时检出3种类型病原体，即细菌、肺炎支原体和病毒相关检测均为阳性。排除标准：(1)其他呼吸道感染性疾病，如急性扁桃体炎、支气管炎、肺炎等；(2)合并其他部位感染；(3)合并其他严重脏器病变；(4)自身免疫性疾病或者免疫缺陷病；(5)过敏性疾病。

表1 各组研究对象的一般资料比较

1.2仪器与试剂 VITEK 2 Compact全自动微生物鉴定及药敏分析系统，以及相关配套试剂购自中国梅里埃诊断产品(上海)有限公司；生物荧光显微镜、试剂购自西班牙比尔塞有限公司；Hema9600基因扩增仪购自珠海黑马医学仪器有限公司；3500DX基因分析仪购自美国ABI公司；FACS Calibur型流式细胞仪及相关配套试剂购自美国BD公司；全自动血液分析仪及相关配套试剂购自法国ABX公司。

1.3方法

1.3.1PCT检测 采集研究对象静脉血2 mL，采用乙二胺四乙酸二钾抗凝，通过电阻抗法检测PCT。

1.3.2间接免疫荧光法 取15 μL血清、15 μL PBS和150 μL吸附剂于离心管中，混匀，以13 000 r/min离心10 min，取上清液加入载玻片孔中，37 ℃温育90 min，洗片，每孔加入15 ℃抗人IgM FITC结合物，37 ℃温育30 min，洗片，加入封闭介质置于生物荧光显微镜下观察。

1.3.3PCR毛细电泳片段分析法 采集患儿咽拭子标本，通过PCR毛细电泳片段分析法检测病毒的核酸序列。按照13种呼吸道病原体多重检测试剂盒的使用说明书，对咽拭子标本进行标本前处理、核酸提取、实时荧光定量PCR扩增、毛细电泳仪荧光信号强度的测量、PCR产物的毛细电泳分离等步骤的处理。

1.3.4淋巴细胞亚群检测 按照淋巴细胞亚群检测试剂盒使用说明书，取12 μL荧光标记抗体于流式细胞仪专用TruCONT管中，加入50 μL全血，混匀，室温暗处放置15 min，加入450 μL 10%FACS溶血素，混匀，室温暗处放置15 min。采用美国BD公司FACS Calibur型流式细胞仪进行检测。

2 结 果

2.1各组淋巴细胞亚群比较 各组支气管肺炎患儿CD3+T细胞、CD8+T细胞、CD4+/CD8+、CD16+56+NK细胞、CD19+B细胞比较，差异有统计学意义(P<0.05)，CD4+T细胞比较差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较，感染组、细菌组、病毒组、2种病原体组、3种病原体组CD3+T细胞降低(P<0.05)；感染组、细菌组、病毒组、肺炎支原体组、2种病原体组、3种病原体组CD8+T细胞降低(P<0.05)；细菌组CD4+T细胞升高(P<0.05)；感染组、细菌组、病毒组、肺炎支原体组CD4+/CD8+升高(P<0.05)；细菌组、病毒组CD16+56+NK细胞降低(P<0.05)；感染组、细菌组、病毒组、2种病原体组、3种病原体组CD19+B细胞升高(P<0.05)。见表2。

表2 各组淋巴细胞亚群比较

2.2各组PCT比较 各组PCT比较，差异有统计学意义(P<0.05)，与对照组比较，感染组、细菌组、病毒组、2种病原体组PCT升高(P<0.05)。见表3。

表3 各组PCT比较

2.3CD4+/CD8+、PCT在支气管肺炎中的诊断价值 绘制CD4+/CD8+、PCT在支气管肺炎中的ROC曲线，CD4+/CD8+、PCT曲线下面积(AUC)分别为0.653、0.671。当CD4+/CD8+最佳临界值为1.80时，灵敏度和特异度分别为45.7%、90.0%；当PCT的最佳临界值为0.282%时，灵敏度和特异度分别为56.0%、88.9%。见表4。

表4 CD4+/CD8+、PCT在支气管肺炎中的诊断价值

3 讨 论

有研究表明，儿童的免疫系统发育尚未健全，免疫功能不完善或免疫功能低下是其重要原因[5-7]。机体的免疫平衡状态是依赖于各淋巴细胞亚群间的相互制约、协调，形成适应性免疫应答[8-10]。机体的适应性免疫应答含有细胞免疫和体液免疫两种，参与细胞免疫的主要效应细胞包括表达CD4+的辅助性T细胞(Th)和CD8+的细胞毒性T细胞(CTL)。Th通过分泌各种细胞因子活化B细胞、自然杀伤细胞等，起到对机体的免疫保护[11]。CTL可特异性直接杀伤靶细胞或杀灭靶细胞内的病原体[12]，对机体免疫功能起到抑制作用[13]。CD4+/CD8+反映机体的免疫功能状态，其比值降低提示细胞免疫功能抑制[14]。而参与体液免疫的主要效应细胞是表达CD19+的B淋巴细胞，通过产生IgG、IgA和IgM等抗体抗感染[15-17]。表达CD16+56+的自然杀伤细胞无需抗原预先致敏即可杀伤感染细胞，参与机体的固有免疫应答[18]。

本研究通过对173例支气管肺炎患儿的外周血淋巴细胞亚群的测定与分析，可以看出，与对照组比较，感染组的CD3+T细胞降低，说明支气管肺炎患儿的机体免疫功能低下，而各组CD8+T细胞均有不同程度的降低，CD4+/CD8+、CD19+B细胞均有不同程度的升高，说明支气管患儿在病原体入侵后机体处于一种应激状态，细胞免疫反应增强，是机体抵抗病原体入侵的自然反应。单一类型病原体感染，即细菌组、肺炎支原体组和病毒组的CD4+/CD8+较对照组明显升高，而2种病原体组的CD4+/CD8+却无明显变化，说明可考虑用CD4+/CD8+初步判断是单一类型病原体感染，还是同时感染2种类型病原体。对于单一类型病原体感染者，肺炎支原体组的CD3+T细胞、CD19+B细胞较对照组无明显变化，而细菌组和病毒组的CD3+T细胞较对照组降低，CD19+B细胞较对照组升高，说明可考虑用CD3+T细胞和CD19+B细胞鉴别肺炎支原体组、细菌组和病毒组；细菌组与病毒组较对照组的CD3+T细胞、CD8+T细胞和CD16+56+NK细胞均降低，CD4+/CD8+、CD19+B细胞均升高，同时细菌组的CD4+T细胞却明显升高，而病毒组无明显变化，说明可考虑用CD4+T细胞鉴别细菌组和病毒组。

PCT是由血小板计数和平均血小板体积经过计算获得[19]，反映血小板体积在单位体积全血中所占的比例，并且大血小板的活性更高，可以反映血小板活化程度[20]。本研究结果表明，2种病原体组与3种病原体组的外周血淋巴细胞亚群的变化较对照组相似，但是2种病原体组的PCT较对照组明显升高，而3种病原体组却无明显变化。由于3种病原体组的病例数不多，能否使用PCT这一指标来鉴别2种病原体组与3种病原体组，有待进一步积累完善数据。

另外，本研究探讨了CD4+/CD8+与PCT在支气管肺炎中的诊断价值。从绘制的ROC曲线中可以看出，CD4+/CD8+、PCT的AUC分别为0.653、0.671，表明二者对患儿支气管肺炎具有一定的诊断价值。当CD4+/CD8+、PCT的最佳临界值分别为1.80、0.282%时，其灵敏度均不高，但是二者的特异度较高。

支气管肺炎患儿存在一定程度的机体免疫功能失调及PCT的变化，且感染的病原体不同，其细胞免疫和PCT具有不同的特点，故可通过对外周血淋巴细胞亚群及PCT检测来鉴别和诊断支气管肺炎的病原体，在疾病早期辅助指导临床治疗，使病情发展得到控制，缩短患儿病程。