楤木叶中黄酮类化合物的分离和鉴定

黎冠兰，王知斌，吴林武，常耀丹，孙延平，杨炳友，匡海学（黑龙江中医药大学教育部北药基础与应用研究重点实验室，哈尔滨 150040）

楤木[Aralia elata（Miq.）Seem.]为五加科楤木属植物，叶为羽状复叶，小叶片较小[1]。楤木的药用价值始载于《千金方》：“又方截取檐头尖少许，烧灰，水和服，当作孔出脓血取愈”。现代药理学研究表明其具有“适应原”样，有保肝、抗癌等多种作用，具有十分广阔的开发前景[2]。但迄今为止对楤木的化学成分研究主要集中在皂苷类[3-4]，对黄酮类化学成分的研究较少，因此为进一步阐明楤木叶的化学成分，充分利用楤木这一药用资源，本文对楤木叶的黄酮类化学成分展开研究。

1 材料

Triple TOF 5600液质联用仪（美国AB SCIEX公司）；Bruker Avance Ⅲ-400核磁共振光谱仪（德国Bruker公司）；Waters 2695-2998分析型HPLC（美国Waters公司）；SHIMADZU LC-6AD制备型HPLC（岛津公司）；反相ODS（YMC公司）、柱色谱硅胶（80～100目，200～300目）和薄层色谱用硅胶板（青岛海洋化工厂）；色谱甲醇（美国默克公司）；其余试剂均为分析纯。

楤木叶于2009年7月采摘于我国安徽省，经黑龙江中医药大学樊锐锋教授鉴定为五加科楤木属植物楤木[Aralia elata（Miq.）Seem.]的干燥叶。样品标本保存于黑龙江中医药大学中药化学教研室（20091110）。

2 提取与分离

取干燥的楤木叶3.5 kg研成粉末，95%乙醇回流提取3次，每次2.5 h，滤过，合并乙醇提取液；再以70%乙醇回流提取3次，每次2.5 h；滤过，合并乙醇提取液。将两种提取液合并，减压回收溶剂得乙醇提取物。将此提取物加水悬浮后，用正丁醇萃取，萃取液减压浓缩。取正丁醇萃取部位260.2 g，经硅胶柱色谱，以二氯甲烷-甲醇溶剂系统进行梯度洗脱，洗脱液经TLC薄层检识合瓶，将成分相近者合并，得到10个组分（Fr.1～10），再经ODS、Toyopearl反相柱色谱、制备型HPLC等现代分离技术分离纯化得到9个化合物。

3 结构鉴定

化合物1：黄色无定形粉末。UVλ（nm）：209.2，276.4，314.4；（cm－1）：1480，1650，3376；ESI-MS在m/z：457.1476处给出[M＋Na]＋离子峰（计算值：457.1475）。

在1H-NMR（400 MHz，C5D5N）谱中，δH7.24（2H，d，J＝8.5 Hz，H-2，H-6）和7.34（2H，d，J＝8.5 Hz，H-3，H-5）处信号呈现一个苯环AA'BB'偶合系统，提示为对位取代苯环，而δH6.67（1H，d，J＝2.4 Hz，H-3'），6.59（1H，dd，J＝2.4，9.0 Hz，H-5'）和7.79（1H，d，J＝9.0 Hz，H-6'）处信号呈现一个苯环ABX偶合系统；δH3.23（2H，t，J＝7.6 Hz，H-α）和3.00（2H，t，J＝7.6 Hz，H-β）处存在两个亚甲基信号；δH3.70（3H，s，4'-OCH3）处存在一个甲氧基信号；此外，在δH5.62（1H，d，J＝7.3 Hz，H-1''）处存在一个糖端基质子信号，根据耦合常数推断该糖苷键为β构型。酸水解：经1 mol·L－1盐酸溶解，水液处理后，用HPLC分析，旋光检测器检测，鉴定化合物1的糖基部分为D-葡萄糖。

在13C-NMR（100 MHz，C5D5N）谱中，共呈现22个碳信号，其中δC135.0（C-1）、130.0（C-2、C-6）、117.1（C-3、C-5）、157.2（C-4）处为对位取代苯环信号；δC114.1（C-1'）、165.8（C-2'）、101.7（C-3'）、166.5（C-4'）、107.8（C-5'）、132.6（C-6'）处为1'、2'、4'-三取代苯环的碳信号；δC102.3（C-1''）、75.0（C-2''）、78.9（C-3''）、71.3（C-4''）、78.6（C-5''）、62.4（C-6''）处存在一组β-D-葡萄糖基上的碳信号；此外，还有δC40.2（H-α）、29.6（H-β）处存在两个亚甲基碳信号，δC55.7（4'-OCH3）处存在一个甲氧基碳信号，δC204.4（C＝O）处存在一个羰基碳信号，推测该化合物为二氢查尔酮类化合物。

化合物1苷元部分的核磁数据与4，2'-dihydroxy-4'-methoxydihydrochalcone基本一致，主要区别在于化合物1多出一组葡萄糖基碳氢信号[5]。通过HMBC谱确定化合物1中糖的连接位置。在HMBC谱中，δH5.62（1H，d，J＝7.3 Hz，H-1''）和δC157.2（C-4）相关，表明葡萄糖连接在对位取代苯环的C-4位上。δH7.79（1H，d，J＝9.0 Hz，H-6'）和δC165.8（C-2'）相关，δH3.70（3H，s，4'-OCH3）处甲氧基质子信号和δC166.5（C-4'）处相关，表明甲氧基和1'、2'、4'-三取代苯环的C-4'位相连；δH7.79（1H，d，J＝9.0 Hz，H-6'）和δC204.4（C＝O）相关，表明羰基连接在C-1'位上；此外，δH3.23（2H，t，J＝7.6 Hz，H-α）和δC135.0（C-1）、204.4（C＝O）相 关，δH3.00（2H，t，J＝7.6 Hz，H-β）和δC130.0（C-2、C-6）、204.4（C＝O）相关，可以推测-CH2-CH2-一端与羰基相连，另一端与对位取代苯环的C-1位相连。

综上，鉴定化合物1为4'-甲氧基-二氢查尔酮苷元-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，查阅SciFinder发现该化合物为新化合物。通过对1H-NMR谱、13C-NMR谱、1H-1H COSY谱、HMBC谱和DEPT-135谱对化合物1的碳氢数据进行了准确的归属（见表1）。化学结构见图1。

表1 化合物1的1H and 13C-NMR 谱数据(C5D5N 400/100 MHz)Tab 1 1H and 13C-NMR data of 1 (C5D5N 400/100 MHz)

图1 化合物1的关键HMBC和1H-1H COSY相关Fig 1 Key HMBC and 1H-1H COSY correlation of compound 1

化合物2：黄色无定形粉末。ESI-MSm/z：605.2 [M＋Na]＋。1H-NMR（CD3OD，400 MHz）δ：3.25（2H，t，J＝7.4 Hz，H-α），2.96（2H，t，J＝7.4 Hz，H-β），7.16（2H，d，J＝8.7 Hz，H-2，H-6），7.00（2H，d，J＝8.7 Hz，H-3，H-5），6.57（1H，d，J＝2.4 Hz，H-3'），6.61（1H，dd，J＝2.4，9.0 Hz，H-5'），7.80（1H，d，J＝9.0 Hz，H-6'），4.84（1H，d，J＝7.5 Hz，H-1''），3.24～3.90（6H，m，H-2''～6''），4.99（1H，d，J＝7.4 Hz，H-1'''），3.24～3.90（6H，m，H-2'''～6'''）；13C-NMR（CD3OD，100 MHz）δ：40.9（C-α），30.7（C-β），206.0（C＝O），136.3（C-1），130.4（C-2），117.9（C-3），157.6（C-4），117.9（C-5），130.4（C-6），116.0（C-1'），165.8（C-2'），105.0（C-3'），165.1（C-4'），109.4（C-5'），133.4（C-6'），102.5（C-1''），74.9（C-2''），78.3（C-3''），71.4（C-4''），78.0（C-5''），62.5（C-6''），101.3（C-1'''），74.7（C-2'''），78.1（C-3'''），71.2（C-4'''），77.8（C-5'''），62.3（C-6'''）。以上数据与文献[6]数据基本一致，故鉴定化合物2为4-O-β-D-吡喃葡萄糖-二氢查尔酮苷元-4'-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，经SciFinder数据库检索表明该化合物为新的天然产物。

化合物3：淡黄色粉末。ESI-MSm/z：419.1 [M＋H]＋。1H-NMR（CD3OD，400 MHz）δ：7.59（1H，d，J＝15.0 Hz，H-α），7.74（1H，d，J＝15.0 Hz，H-β），7.64（2H，d，J＝8.5 Hz，H-2，H-6），7.08（2H，d，J＝8.5 Hz，H-3，H-5），6.23（1H，d，J＝2.5 Hz，H-3'），6.34（1H，dd，J＝2.5，9.0 Hz，H-5'），7.90（1H，d，J＝9.0 Hz，H-6'），4.92（1H，d，J＝7.5 Hz，H-1''），3.30～3.85（6H，m，H-2''～H-6''）；13C-NMR（CD3OD，100 MHz）δ：119.6（C-α），144.1（C-β），193.0（C＝O），130.3（C-1）、133.0（C-2），117.6（C-3），160.6（C-4），117.6（C-5），133.0（C-6），114.5（C-1'），166.4（C-2'），103.5（C-3'），166.8（C-4'），109.0（C-5'），133.4（C-6'），101.3（C-1''），74.8（C-2''），78.0（C-3''），71.2（C-4''），77.9（C-5''），62.3（C-6''）。以上数据与文献[7]数据基本一致，故鉴定化合物3为异甘草苷。

化合物4：黄色无定形粉末。ESI-MSm/z：457.1 [M＋Na]＋。1H-NMR（CD3OD，400 MHz）δ：3.20（2H，t，J＝7.4 Hz，H-α），2.77（2H，t，J＝7.4 Hz，H-β），6.92（2H，d，J＝8.7 Hz，H-2，H-6），6.58（2H，d，J＝8.7 Hz，H-3，H-5），6.73（1H，d，J＝2.3 Hz，H-3'），6.54（1H，dd，J＝2.3，8.8 Hz，H-5'），7.50（1H，d，J＝8.8 Hz，H-6'），3.74（3H，s，4'-OCH3），4.93（1H，d，J＝7.3 Hz，H-1''），3.28（1H，m，H-2''），3.36（1H，m，H-3''），3.36（1H，m，H-4''），3.28（1H，m，H-5''），3.80（1H，dd，J＝1.9，12.0 Hz，H-6''a），3.57（1H，dd，J＝6.0，12.0 Hz，H-6''b）；13C-NMR（CD3OD，100 MHz）δ：46.0（C-α），30.4（Cβ），200.4（C＝O），132.9（C-1），130.2（C-2），116.4（C-3），157.1（C-4），116.4（C-5），130.2（C-6），122.6（C-1'），159.7（C-2'），102.3（C-3'），164.8（C-4'），108.7（C-5'），132.5（C-6'），55.8（4'-OCH3），102.7（C-1''），75.0（C-2''），79.4（C-3''），71.5（C-4''），79.1（C-5''），62.6（C-6''）。以上数据与文献[8]数据基本一致，故鉴定化合物4为4'-O-methyldavidioside。

化合物5：黄色针状结晶。ESI-MSm/z：421.1 [M＋H]＋。1H-NMR（CD3OD，400 MHz）δ：3.03（2H，t，J＝7.4 Hz，H-α），2.96（2H，t，J＝7.4 Hz，H-β），6.94（2H，d，J＝8.6 Hz，H-2，H-6），6.61（2H，d，J＝8.6 Hz，H-3，H-5），6.43（1H，d，J＝2.4 Hz，H-3'），6.61（1H，dd，J＝2.4，8.9 Hz，H-5'），7.69（1H，d，J＝8.9 Hz，H-6'），5.75（1H，d，J＝7.2 Hz，H-1''），3.21～3.86（6H，m，H-2''～H-6''）；13C-NMR（CD3OD，100 MHz）δ：40.7（C-α），29.8（C-β），204.8（C＝O），131.9（C-1），130.1（C-2），116.4（C-3），157.4（C-4），116.4（C-5），130.1（C-6），115.1（C-1'），165.3（C-2'），104.7（C-3'），164.6（C-4'），108.8（C-5'），132.7（C-6'），101.5（C-1''），74.8（C-2''），78.2（C-3''），71.1（C-4''），78.5（C-5''），62.3（C-6''）。以上数据与文献[9]数据基本一致，故鉴定化合物5为confusoside。

化合物6：淡黄色粉末。ESI-MSm/z：441.1 [M＋Na]＋。1H-NMR（C5D5N，400 MHz）δ：5.51（1H，dd，J＝3.0，13.0 Hz，H-2），2.86（1H，dd，J＝3.0，16.5 Hz，H-3a），3.14（1H，dd，J＝13.0，16.5 Hz，H-3b），8.14（1H，d，J＝8.6 Hz，H-5），6.88（1H，dd，J＝2.5，8.6 Hz，H-6），6.79（1H，d，J＝2.5 Hz，H-8），7.55（2H，d，J＝8.5 Hz，H-2'，H-6'），7.38（2H，d，J＝8.5 Hz，H-3'，H-5'），5.62（1H，d，J＝7.4 Hz，H-1''），4.07～4.48（6H，m，H-2''～H-6''）；13C-NMR（C5D5N，100 MHz）δ：79.1（C-2），44.1（C-3），190.1（C＝O），128.3（C-5），111.5（C-6），166.1（C-7），102.0（C-8），164.1（C-9），114.5（C-10），130.3（C-1'），128.2（C-2'），117.0（C-3'），158.4（C-4'），117.0（C-5'），128.2（C-6'），101.7（C-1''），74.5（C-2''），78.6（C-3''），71.1（C-4''），79.1（C-5''），62.1（C-6''）。以上数据与文献[10]数据基本一致，故鉴定化合物6为4'-羟基-二氢黄酮-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物7：黄色针状结晶。ESI-MSm/z：595.1 [M＋H]＋。1H-NMR（CD3OD，400 MHz）δ：6.19（1H，d，J＝2.0 Hz，H-6），6.38（1H，d，J＝2.0 Hz，H-8），8.05（2H，d，J＝8.0 Hz，H-2'，H-6'），6.87（2H，d，J＝8.0 Hz，H-3'，H-5'），5.11（1H，d，J＝7.4 Hz，H-1''），3.25～3.81（10H，m，H-2''～H-6''，H-2'''～H-5'''），4.51（1H，d，J＝1.4 Hz，H-1'''），1.12（3H，d，J＝6.2 Hz，H-6'''）；13C-NMR（CD3OD，100 MHz）δ：159.4（C-2），135.5（C-3），179.4（C-4），163.0（C-5），100.0（C-6），166.2（C-7），95.0（C-8），159.4（C-9），105.6（C-10），122.8（C-1'），132.4（C-2'），116.2（C-3'），161.5（C-4'），116.2（C-5'），132.4（C-6'），104.6（C-1''），75.8（C-2''），78.2（C-3''），72.3（C-4''），77.2（C-5''），68.6（C-6''），102.4（C-1'''），72.1（C-2'''），71.5（C-3'''），73.9（C-4'''），69.7（C-5'''），17.9（C-6'''）。以上数据与文献[11]数据基本一致，故鉴定化合物7为山柰酚-3-Oβ-D-芸香糖苷。

化合物8：黄色针状结晶。ESI-MSm/z：465.1 [M＋H]＋。1H-NMR（CD3OD，400 MHz）δ：6.14（1H，d，J＝2.0 Hz，H-6），6.32（1H，d，J＝2.0 Hz，H-8），7.64（1H，d，J＝2.0 Hz，H-2'），6.84（1H，d，J＝8.2 Hz，H-5'），7.62（1H，dd，J＝2.0，8.2 Hz，H-6'），5.22（1H，d，J＝7.0 Hz，H-1''），3.24～3.86（6H，m，H-2''～H-6''）；13C-NMR（CD3OD，100 MHz）δ：158.4（C-2），135.7（C-3），179.4（C-4），163.0（C-5），100.0（C-6），166.1（C-7），94.8（C-8），159.0（C-9），105.6（C-10），123.1（C-1'），116.0（C-2'），145.9（C-3'），149.9（C-4'），117.6（C-5'），123.3（C-6'），104.5（C-1''），75.8（C-2''），78.3（C-3''），71.2（C-4''），78.1（C-5''），62.6（C-6''）。以上数据与文献[12]数据基本一致，故鉴定化合物8为槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物9：黄色针状结晶。ESI-MSm/z：303.0 [M＋H]＋。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：6.18（1H，d，J＝2.0 Hz，H-6），6.40（1H，d，J＝2.0 Hz，H-8），7.67（1H，d，J＝2.4 Hz，H-2'），6.88（1H，d，J＝8.4 Hz，H-5'），7.53（1H，dd，J＝2.4，8.4 Hz，H-6'）；13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：147.6（C-2），135.6（C-3），175.7（C-4），156.0（C-5），98.0（C-6），163.7（C-7），93.2（C-8），160.6（C-9），102.9（C-10），121.8（C-1'），114.9（C-2'），144.9（C-3'），146.7（C-4'），115.5（C-5'），119.8（C-6'）。以上数据与文献[13]数据基本一致，故鉴定化合物9为槲皮素。

4 结论

本文对楤木叶的正丁醇萃取部分进行了深入的化学成分研究，共分离鉴定得到9个黄酮类化合物，其中，化合物1为未见报道的新化合物，化合物2为从植物中分离得到的新天然产物，化合物4、5为首次在楤木属中分离得到，化合物9为首次从楤木叶中分离得到。这进一步丰富了楤木的化学成分，为深入挖掘其潜在的生物活性成分和质量标志物奠定了基础。