西安市部分奶山羊养殖场羊传染性胸膜肺炎抗体检测及分析

李忠军，董 钊，张 飞，尤鹏飞，冯 苗*

(1.西安市阎良区动物疾病预防控制中心，陕西阎良 710089；2.西安市动物疫病预防控制中心，陕西西安 710061；3.西安市阎良区畜牧兽医站，陕西阎良 710089)

山羊传染性胸膜肺炎(Contagious caprine pleuropneumonia，CCPP)主要是由山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasmacapricolumsubsp.capripneumoniae，Mccp)、绵羊肺炎支原体(Mycoplasmaovipneumoniae，Mo)和丝状支原体山羊亚种(Mycoplasmamycoidessubsp.capri，Mmc)等多种支原体引起的以侵害呼吸系统为主的传染病，临床症状通常以发热、咳嗽、呼吸困难为主[1]。目前，全球已经报道发生过CCPP感染的国家和地区有40多个[2]。因支原体感染引起的CCPP不仅给非洲和地中海沿岸各养羊国家和地区造成了一定程度的损失，而且在我国也广泛流行[3-4]。根据文献报道，我国各省(市、区)的流行株也有所差异[5]，这种现象使病情发展更加复杂。CCPP仅靠临床症状和病理变化难以确诊并针对性用药，也因此导致了该病在我国长期存在。奶山羊养殖业作为陕西畜牧业中最具有优势的特色养殖业，养殖的数量和规模居全国之最[6]，因此在养殖规模日益增长的情况下，各类疫病的防控尤为重要。本研究通过对西安市临潼区、高陵区和阎良区未免疫山羊支原体肺炎疫苗的1013份奶山羊血清进行Mccp和Mo的抗体检测和分析，从而了解山羊传染性胸膜肺炎在西安地区奶山羊养殖场的流行情况，为西安市奶山羊传染性胸膜肺炎的流行传播情况提供理论基础，也为临床合理选择疫苗和科学制定免疫计划提供指导。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 被检血清样品 用一次性采血容器随机采集西安市临潼区、高陵区、阎良区均未经过山羊传染性胸膜肺炎疫苗免疫的奶山羊血清各198份、163份、652份，共计1013份，4℃冰箱倾斜静置5 h后，在室温下放置待血清析出，分装保存于-20℃备用。

1.1.2 检测试剂盒 山羊支原体山羊肺炎亚种抗体ELISA试剂盒和山羊感染绵羊肺炎支原体抗体ELISA试剂盒，广州悦洋生物技术有限公司产品。

1.1.3 主要仪器设备 恒温培养箱(GHP-9160)，上海精宏实验设备有限公司产品；恒温振荡器(THZ-C)，苏州培英实验设备有限公司产品；全波长多功能酶标仪(XSP-37XBY)，上海光学仪器有限公司产品。

1.2 方法

按照Mccp和Mo抗体ELISA试剂盒说明书进行血清抗体的检测。①从铝箔袋中取出酶标板室温平衡20 min；②设置阴、阳性对照孔和样本孔，阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照各50 μL；③每孔先加入10 μL待检测血清再依次加入样本稀释液40 μL；④在阴、阳性对照孔和样本孔中加入HRP标记的二抗100 μL，37℃恒温箱孵育60 min；⑤弃去液体，每孔加满洗涤液，静置1 min后甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次；⑥将底物液A、B每孔依次加入50 μL，37℃避光孵育15 min；⑦每孔加入终止液50 μL，在450 nm波长处测定各孔的OD值；⑧结果判定：临界值=阴性对照孔平均值+0.15。样品OD值>临界值时样品为阳性，反之则为阴性。

2 结果

2.1 山羊支原体山羊肺炎亚种抗体检测结果

山羊支原体山羊肺炎亚种抗体检测结果见表1。在检测的1013份血清样品中，阳性血清共计83份，总体阳性率为8.29%。3个区的阳性率分别为临潼7.07%，高陵16.56%，阎良6.6%。

表1山羊支原体山羊肺炎亚种抗体检测结果

2.2 山羊感染绵羊肺炎支原体抗体检测结果

山羊感染绵羊肺炎支原体抗体检测结果见表2。在检测的1013份血清中，阳性血清共计223份，总体阳性率为22.21%。3个区的阳性率分别为临潼19.19%，高陵30.06%，阎良21.17%。

表2绵羊肺炎支原体抗体检测结果

2.3 山羊支原体山羊肺炎亚种和山羊的绵羊肺炎支原体混合感染检测结果

山羊支原体山羊肺炎亚种和山羊的绵羊肺炎支原体混合感染检测结果见表3。在检测的1013份血清中，混合感染的阳性血清共计17份，总体阳性率为1.68%。3个区的混合感染阳性率分别为临潼2.53%，高陵4.91%，阎良0.61%。

3 讨论

Mo和Mccp对山羊和绵羊均具有感染性，由Mo和Mccp导致的CCPP在我国不同地区均有不同程度的流行[7]，常导致羊只大量死亡。我国部分地区绵羊Mo抗体阳性率高达46.66%～100.00%[8]，Mccp抗体阳性率高达19.05%～58.33%[9]。CCPP不分季节均可感染羊群，在冬春季节由于气候条件变化剧烈更易发生感染，同舍羊只密度过大及寒冷潮湿会加重该病传播和发生[10]。目前，病原的分离鉴定仍然是该病确诊的标准方法[11]，但是由于支原体的病原分离比较困难，且长期以来广大基层兽医人员对山羊传染性胸膜肺炎病原的认识还不太清楚，在临床上只能依靠个人经验对临床症状和病变特征做出诊断和治疗，导致由Mccp和Mo等支原体感染引起的山羊传染性胸膜肺炎在病初未能及时发现，后期又不能及时针对性治疗并采取科学合理有效的防控手段[12]，最终给养殖户造成较大损失。鉴于此，本研究对采集自西安市1013只奶山羊的血清进行Mccp和Mo抗体检测，检测结果表明西安市各地区存在不同程度山羊传染性胸膜肺炎疫病的流行，应该引起相应的重视并且加强对该疾病的防控。

表3山羊支原体山羊肺炎亚种和绵羊肺炎支原体混合感染检测结果

本次研究结果显示，由Mo引起的山羊传染性胸膜肺炎总体阳性率为22.21%，由Mccp引起的山羊传染性胸膜肺炎总体阳性率为8.92%，说明西安市山羊传染性胸膜肺炎整体自然感染率较高；而Mo的阳性率高于Mccp的阳性率，表明西安市山羊传染性胸膜肺炎感染的病原以Mo为主。经过分析，造成这种现象的原因主要是CCPP并非奶山羊强制免疫病种，且目前我国使用的山羊传染性胸膜肺炎疫苗大都以Mccp灭活疫苗为主[1]，因此即便选择了疫苗免疫，Mo和Mccp在羊群中的自然感染率仍整体偏高。为降低两种病原的自然感染率，养殖场(户)必须按要求合理进行免疫，而且在疫苗的选择上应该同时使用两种以上的疫苗以加强保护效力[13]，在进行疫苗免疫之后定期进行抗体水平的监测，同时制定更加有针对性的防控措施，便可取得更好的免疫效果。

在检测的3个行政区中，高陵区、临潼区、阎良区的Mo阳性率分别为30.06%、19.9%、21.17%；Mccp阳性率分别为16.56%、7.07%、6.6%。其中，高陵区两种病原的自然感染率明显高于临潼和阎良两地区。此外，高陵区、临潼区、阎良区Mo和Mccp混合感染阳性率分别为4.91%、2.53%、0.61%，这些数据表明山羊传染性胸膜肺炎除单一感染外还存在少数混合感染的情况。同时，羊群在感染支原体性疫病时可能会继发其他呼吸系统疾病，从而导致羊群死亡率更高[14]。根据本研究的数据，山羊支原体性疫病对于西安市奶山羊养殖业存在较大的威胁，所以养殖场(户)必须认识到该病的危害并给予足够的重视，同时要进行科学合理免疫，加强饲养管理水平，保持环境卫生，合理搭配饲喂，做到早发现早治疗[15-16]，降低山羊传染性胸膜肺炎的自然感染率，动物疫病预防控制机构加大该病防控技术培训及指导力度，从而将本病的危害程度降到最低。