老年肺癌患者外周血Gm31083和miR-450b-5p表达及其与预后的关系

李露 陈璇 钱俊峰

(丽水市人民医院呼吸内科，浙江 丽水 323000)

随着老龄化加剧，老年肺癌发病率不断上升，且病死率较高〔1，2〕。肺癌早期症状较为隐匿，通常确诊时已属中晚期，错失最佳根治时机，且我国晚期肺癌患者5年生存率低于15%〔3～5〕。因此，采取及时有效的诊治老年肺癌患者方法对改善患者预后尤为关键。近年来，分子靶向治疗肺癌成为新的突破方向和热点。多项研究证实，长链非编码RNA(lncRNA)和微小RNA(miR)在各种肿瘤中发挥重要作用，且通过与靶向mRNA3′端非翻译区结合，以此干扰靶基因表达，从而发挥功能〔6，7〕。本研究旨在探讨老年肺癌患者外周血Gm31083和miR-450b-5p表达及其与预后的关系。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择丽水市人民医院2016年3月至2020年3月收治的老年肺癌患者120例为研究组，其中男73例，女47例；年龄65～79岁，平均(72.13±4.25)岁；体重指数17～29 kg/m2，平均(23.16±1.89)kg/m2；分化程度：低分化68例，中、高分化52例；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期46例，Ⅲ～Ⅳ期74例；淋巴结转移72例。2017年3月至2020年3月老年健康体检者102例为对照组，其中男62例，女40例；年龄65～78岁，平均(71.42±4.19)岁；体重指数18～27 kg/m2，平均(23.02±1.92)kg/m2。两组一般资料无统计学差异(P>0.05)。纳入标准：(1)经病理组织学证实为肺癌，且均为非小细胞肺癌；(2)年龄≥65岁；(3)具有完整临床资料和随访资料；(4)签署知情同意书。排除标准：(1)其他类型肺癌；(2)合并其他恶性肿瘤；(3)存在其他严重脏器疾病者；(4)严重精神疾病者。

1.2方法 采用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)测定外周血Gm31083和miR-450b-5p mRNA表达，抽取受试者外周静脉血5 ml，分离提取血清，将其置于-80℃冰箱内保存备用，采用TRIzol试剂(美国Invitrogen公司)提取血清总RNA，取5 μl总RNA进行琼脂糖凝胶电泳并检测总RNA的纯度和完整度。按照逆转录试剂盒(美国Biomiga公司)使用说明书将其逆转录为cDNA，以U6作为内参基因，检测外周血Gm31083和miR-450b-5p mRNA表达。取cDNA进行qRT-PCR，总反应体系20 μl：SYBER GREEN 6.8 μl、PCR上游引物0.4 μl、DYE Ⅰ 0.4 μl、PCR下游引物0.4 μl、cDNA 2.0 μl、RNase-free H2O 10 μl，混匀，置于实时荧光定量PCR仪扩增。反应条件：95℃预变性10 min，95℃ 15 s、60℃ 1 min，共完成40个循环，每个样品设置3个复孔。采用2-ΔΔCt法分析结果，ΔCt=Ct目的基因-CTU6；ΔΔCt=ΔCt实验组-ΔCt对照组。

1.3预后评价 随访至2021年12月，记录老年肺癌患者总生存期(OS)，OS指从诊断日起至任何原因的死亡或至随访末。主要采取门诊复诊、电话、微信、上门随访等多种方式随访。

1.4观察指标 (1)比较研究组与对照组Gm31083和miR-450b-5p mRNA表达；(2)不同病理特征Gm31083和miR-450b-5p mRNA表达；(3)观察预后与Gm31083 mRNA、miR-450b-5p mRNA表达关系；(4)分析影响老年肺癌患者预后危险因素。

1.5统计学处理 采用SPSS25.0软件进行t检验、χ2检验、Kaplan-Meier法、Log-rank检验及Logistic回归分析。

2 结 果

2.1研究组与对照组Gm31083和miR-450b-5p mRNA表达比较 研究组Gm31083 mRNA表达(1.87±0.35)高于对照组(0.97±0.03)，而miR-450b-5p mRNA表达(0.46±0.13)低于对照组(1.01±0.02)，差异有统计学意义(t=36.126、42.21，均P<0.05)。

2.2不同病理特征Gm31083 mRNA、miR-4506-5p mRNA表达比较 不同性别、年龄、体重指数、肿瘤直径和分化程度Gm31083 mRNA表达比较无明显差异(P>0.05)；Ⅲ～Ⅳ期Gm31083 mRNA表达高于Ⅰ～Ⅱ期，miR-4506-5p mRNA表达低于Ⅰ～Ⅱ期；淋巴结转移Gm31083 mRNA表达高于无淋巴结转移，miR-4506-5p mRNA表达低于无淋巴结转移，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 不同病理特征Gm31083 mRNA、miR-4506-5p mRNA表达比较

2.3预后与Gm31083 mRNA、miR-4506-5p mRNA表达关系 低表达Gm31083患者OS(31个月)长于高表达Gm31083(17个月)；高表达miR-450b-5p患者OS(33个月)长于低表达miR-450b-5p(16个月)，差异有统计学意义(P<0.05)。见图1，图2。

图1 Gm31083 mRNA表达与预后关系

图2 miR-450b-5p mRNA表达与预后关系

2.4影响老年肺癌预后危险因素 TNM分期、淋巴结转移、Gm31083和miR-450b-5p为影响老年肺癌患者危险因素(P<0.05)。见表2。

表2 影响老年肺癌预后危险因素

3 讨 论

肺癌是威胁人类健康的一种重大疾病，且是全球范围发病率最高的一种恶性肿瘤，其死亡率和患病率位居恶性肿瘤第一位〔8，9〕。肺癌常见病因与职业因素(如煤焦油、石棉等)、电离辐射、家族史、大气污染、肺部慢性疾病(如肺结核、慢性阻塞性肺疾病等)及人体内在因素有关〔10，11〕。肺癌通常无自身典型临床表现，且很容易发生区域淋巴结转移及远处转移。由于肺癌早期临床表现无明显特异性，早期诊断尚有困难，大部分患者发现时已属Ⅲb～Ⅳ期，已伴区域淋巴结转移及远处转移，故而整体5年生存率较低，预后较差〔12，13〕。

LncRNA是基因表达的一种重要调控因子，现已证实，LncRNA在多种生物学过程中均发挥重要作用，成为恶性肿瘤研究的热点〔14，15〕。LncRNA在肿瘤细胞中的异常表达可作为促癌基因或抑癌基因，参与肿瘤细胞分化、增殖、凋亡、侵袭等过程中〔16,17〕。本研究表明，老年肺癌患者Gm31083高表达；Ⅲ～Ⅳ期Gm31083 mRNA表达高于Ⅰ～Ⅱ期，且淋巴结转移Gm31083 mRNA表达高于无淋巴结转移，由此可见老年肺癌患者Gm31083高表达与Ⅲ～Ⅳ期和淋巴结转移呈正相关；老年肺癌患者表达越高预后越差。

miR主要是在线粒体内发现的具有高度进化保守性的一种非编码小RNA，具有复杂的生物学功能。近年来多项研究证实，在肿瘤发生、发展中一些miRNA家族起重要作用，故而通过对miR的调控提高抗肿瘤疗效及改善预后是当前在治疗肺癌领域中新的突破方向〔17～19〕。miR-450b-5p是miRNAs中的一员，其在多种恶性肿瘤中异常表达，但在肺癌中研究较少。张雷等〔20〕研究表明，miR-450b-5p在肝细胞癌组织和细胞系中表达均明显降低，且其表达水平与肿瘤大小、静脉侵犯、TNM分期及预后相关，为影响肝细胞癌患者独立预后因素之一。本研究表明，老年肺癌患者miR-450b-5p低表达；miR-450b-5p高表达与Ⅲ～Ⅳ期和淋巴结转移呈负相关；且老年肺癌患者miR-450b-5p表达越低预后越差。

综上，老年肺癌患者外周血Gm31083高表达，而miR-450b-5p低表达，且与TNM分期、淋巴结和预后密切相关，且Gm31083和miR-450b-5p为影响老年肺癌患者危险因素。