上海地区成人网织红细胞相关参数参考区间的建立

徐倩倩， 姜王庆， 沈林杰， 陆英杰， 陈 健， 蒋浩琴

（复旦大学附属华山医院检验医学科，上海 200040）

网织红细胞（reticulocyte，RET）是晚幼红细胞脱核后但尚未完全成熟的红细胞，是反映骨髓红系造血功能以及判断贫血和相关疾病疗效的重要指标，临床上常用RET绝对计数和百分比来反映红细胞增生活性[1]。随着血细胞分析仪的不断改进，许多新参数被发现，仪器不仅可计数骨髓释放的RET数量，还可检测网织红细胞血红蛋白含量（reticulocyte hemoglobin，RETHe），并可通过校正公式计算外周血中网织红细胞生成指数（reticulocyte production index，RPI）。RET-He含量是指RET细胞质中的血红蛋白含量，与机体内贮存铁数量密切相关，可反映体内铁蛋白代谢最新状态，用于缺铁性贫血、铁利用障碍等慢性功能性贫血的诊断和鉴别诊断，其相关参数对贫血的诊断和鉴别诊断及疗效观察有重要的参考价值[2]。目前，仪器法检测RET相关参数参考区间的报道不多，临床上难以有效利用这些新的、有价值的检测参数。本研究通过采用全自动血液分析仪对2 080名体检健康者外周血RET及其相关参数进行检测，建立上海地区成人网织红细胞相关参数的参考区间，以提高RET在临床血液、肾脏等疾病中的应用价值。

1 材料和方法

1.1 研究对象

选取2019年1月—2020年5月复旦大学附属华山医院体检健康者2 237名，其中男1 095名、女1 142名，年龄18～88岁。纳入标准：无明显感染症状和贫血表现，无血液系统相关疾病，白细胞计数为（3.5～9.5）×109/L，C反应蛋白<10 mg/L，男性血红蛋白为130～175 g/L、女性血红蛋白为115～150 g/L。排除标准：空腹血糖>6.1 mmol/L或糖化血红蛋白异常，三酰甘油>3.0 mmol/L，胆固醇>8.0 mmol/L，天门冬氨酸氨基转移酶>75 U/L，肌酐>120 μmol/L，尿素>12 mmol/L，尿液红细胞计数>10个/高倍镜视野或尿液白细胞计数>5个/高倍镜视野；近期服用铁剂；3个月之内献血；处于哺乳期及妊娠期。

1.2 方法

用真空采血管（紫色盖，美国BD公司）采集所有研究对象静脉血2 mL，乙二胺四乙酸二钾抗凝，采用日本Sysmex公司XN-9000全自动血液分析仪及配套试剂、质控品检测RET及相关参数：网织红细胞百分比（the percentage of reticulocyte，RET%）、网织红细胞绝对值（the absolute value of reticulocyte，RET#）、未成熟网织红细胞百分比（immature reticulocyte fraction percentage，IRF%）、低荧光强度网织红细胞百分比（low fluorescence intensity reticulocyte percentage，LFR%）、中荧光强度网织红细胞百分比（medium fluorescence intensity reticulocyte percentage，MFR%）、高荧光强度网织红细胞百分比（high fluorescence intensity reticulocyte percentage，HFR%）、RET-He、RPI。所有样本均在采集4 h内完成检测。检测前已进行仪器校准和性能验证，确保当日质控在控。

1.3 统计学方法

采用SPSS 24.0软件进行统计分析。采用Dixon法剔除离群值。采用Kolomogrow-Smirnov正态性检验分析RET相关参数的数据分布情况。呈非正态分布的计量资料以中位数（M）[四分位数（P25，P75）]表示，2个组之间比较采用Mann-Whitney检验，多组间比较采用Kruskal-Wallis H检验，采用百分位数法（P2.5～P97.5）建立参考区间。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 RET相关参数的数据分布

共剔除157个离群值，最终纳入2 080名体检健康者，其中男1 059名，年龄（41.9±12.1）岁；女1 021名，年龄（40.4±11.8）岁。Kolomogrow-Smirnov检验结果显示，RET相关参数均呈偏态分布（P<0.05）。见表1。

表1 RET相关参数的数据分布

2.2 不同性别之间RET相关参数检测结果比较

男、女性之间各项RET参数差异均有统计学意义（P<0.05）。见表2。

表2 不同性别之间RET相关参数检测结果比较

2.3 不同年龄之间RET相关参数检测结果比较

将所有研究对象按年龄分为18～40岁组、41～60岁组和61～80岁组。RET%、RET#、RPI各年龄组之间差异均无统计学意义（P>0.05）。41～60岁组、61～80岁组IRF%、LFR%、MFR%、HFR%、RET-He与18～40岁组比较差异均有统计学意义（P<0.05），而41～60岁组与61～80岁组之间差异均无统计学意义（P>0.05）。见表3。

表3 不同年龄之间RET相关参数检测结果比较

2.4 各年龄组不同性别之间IRF%、LFR%、MFR%、HFR%、RET-He的比较

18～40岁组中，男、女性之间IRF%、LFR%、MFR%、HFR%、RET-He差异均有统计学意义（P<0.05）。见表4。

表4 18～40岁组不同性别之间IRF%、LFR%、MFR%、HFR%、RET-He比较

将4 1～6 0岁组和6 1～8 0岁组合并为41～80岁组，男、女性之间除RET-He差异有统计学意义（P<0.0 5）外，其他项目差异均无统计学意义（P>0.0 5）。见表5。

表5 41～80岁组不同性别之间RET参数比较

2.5 上海地区成人RET相关参数参考区间

对差异无统计学意义的不同年龄、性别各组进行合并，采用百分位数法建立参考区间。见表6、表7。

表6 上海地区成人RET%、RET#、RPI参考区间

表7 上海地区成人IRF%、LFR%、MFR%、HFR%、RET-He参考区间

2.6 参考区间的验证

另收集2020年6月15日—6月25日复旦大学附属华山医院体检健康者血常规检测标本40份，其中男、女性样本各20份。对建立的RET相关参数的参考区间进行验证，结果显示，40份样本的RET相关参数检测结果均在建立的参考区间内，验证通过。

3 讨论

RET是晚幼红粒细胞和成熟红细胞之间的过渡细胞，可用于精确诊断贫血，评估贫血治疗后的再生性，监测接受重组红细胞生成素治疗、化疗或骨髓移植患者愈后状况[3]。RET可分为高荧光强度网织红细胞（high fluorescence intensity reticulocyte，HFR）、中荧光强度网织红细胞（medium fluorescence intensity reticulocyte，MFR）、低荧光强度网织红细胞（low fluorescence intensity reticulocyte，LFR），HFR和MFR的总和是未成熟网织红细胞（immature reticulocyte fraction，IRF），IRF、HFR、MFR、LFR、RPI是反映造血功能的新参数。其中，HFR、MFR和LFR变化比RET#或RET%变化更敏感，因此可用来鉴别诊断慢性溶血性贫血和化疗引起的骨髓抑制性贫血，以及血液透析所致的贫血[4-6]。

RPI可客观反映RET的生成情况。RET%或RET#会受RET在外周血带网时间影响而偏高或偏低，如RET在外周血带网时间延长，RET就会偏高；带网时间减少，则会假性偏低。RPI通过RET成熟时间校正贫血造成的RET提前释放因素，可更真实地反映骨髓增生情况，因此临床上一般采用RPI来消除RET带网时间影响[7]。有研究发现，RPI水平可敏感地反映骨髓红细胞增生状态，辅助鉴别贫血类型，包括进一步鉴别溶血性贫血和非溶血性贫血[8]，这也是后续本研究拟结合更多贫血指标进行联合分析的内容。健康人群RET-He在RET完整生命周期中是恒定的，RET-He是RET细胞质中的血红蛋白含量，可反映体内铁蛋白代谢的最新状态。

本研究建立的RET相关参数参考区间与目前采用的参考区间相比，范围更宽，且相关参数数据基本呈偏态分布，其中RPI参考区间[0.90～2.40（男）、0.60～1.80（女）]与标准理论值1相比差异明显，原因可能是RPI敏感性比较高，更易受饮食、运动、应激状态等各种因素影响，而本研究未排除体检人群近期是否运动、服用补品、处于生理期前后或压力过大等影响因素，导致离散值较大。IRF和HFR均为幼稚RET，在正常人外周血中含量较少，机体大量失血或处于应激状态时才会代偿性增加，是反映造血功能最敏感的指标[9]。本研究结果显示，男性、女性RET相关参数差异均有统计学意义（P<0.001），男性RET%略高于女性，LFR%略低于女性，提示男性红细胞更新速度快于女性，与男性红细胞计数高于女性相符，与其他地区结果[10]一致。

本研究结果显示，不同年龄组之间RET#、RET%、RPI差异均无统计学意义（P>0.05），IRF%、LFR%、MFR%、HFR%、RET-He差异均有统计学意义（P<0.001）；随着年龄的增长，RET%、RET#、IRF%、RPI均先上升，再逐渐下降，而LFR%随着年龄的增长逐渐升高，提示随着年龄的增长，红细胞的生成能力会逐渐减弱，这与李小龙等[10]报道的情况类似。本研究RET-He参考区间（男30.4～35.6 pg、女27.8～34.6 pg）低于赵丽娟等[11]的研究（男30.2～36.0 pg、女29.1～35.4 pg），可能因为本研究的研究对象为上海地区人群，而后者的研究对象为长春地区人群，提示不同人群由于地理环境、生活方式以及生理结构等因素影响，机体内铁含量会不同，从而导致不同地区人群RET-He含量有所差异。因此，各临床实验室均应建立各自的参考区间。

综上所述，本研究初步建立了上海地区健康成人外周血RET相关参数的参考区间，进一步提高了RET相关参数的临床应用价值，有利于贫血类疾病、肾性贫血等疾病的诊断、鉴别诊断和疗效观察。