卵巢癌组织中SIRT-1、CD44的表达及临床意义

刘 蓉， 王德刚

（利川市人民医院妇科，湖北 利川 445400）

卵巢癌是女性常见的恶性肿瘤之一，早期无特异性症状，其发病率、病死率分别居女性恶性肿瘤的第3位、第1位，有效评估卵巢癌病情对指导治疗具有重要的临床意义[1]。有研究结果显示，沉默信息调节因子1（silence information regulator-1，SIRT-1）是一种与细胞代谢、增殖、凋亡等有关的蛋白脱乙酰化酶，在多种肿瘤中呈高表达状态[2]。CD44是一种跨膜糖蛋白，可参与细胞生长、分化、迁移等生物学行为，其表达与多种肿瘤发生有关[3]。目前，关于SIRT-1、CD44在卵巢癌组织中的表达及其与病情关系的研究较少。为此，本研究拟分析乳腺癌组织SIRT-1、CD44表达与临床病理特征的关系。

1 材料和方法

1.1 研究对象

选取2018年1月—2020年1月利川市人民医院确诊的卵巢癌患者116例，年龄（55.93±8.35）岁，肿瘤直径为（3.87±0.69）cm，其中浆液型78例、黏液型38例，组织学分级G1级68例、G2～G3级48例，国际妇产科联合会（the International Federation of Gynecology and Obstetrics，FIGO）分期Ⅰ～Ⅱ期62例、Ⅲ～Ⅳ期54例，浸润度T1～T2期70例、T3～T4期46例，有淋巴结转移者50例、无转移者66例。纳入标准：（1）病理学检查确诊为卵巢癌；（2）无胃、肝、肺等其他脏器的原发性肿瘤；（3）病理学检查前无免疫、化疗、放疗等治疗史；（4）签署知情同意书。排除标准：（1）年龄<18岁；（2）有精神病病史；（3）临床病理或随访资料缺失；（4）有心、肝、肾等脏器的严重疾病；（5）孕产妇或哺乳期女性。

1.2 方法

1.2.1 主要试剂 鼠抗人SIRT-1抗体（美国eBioscience 公司），兔抗人CD44单克隆抗体及二氨基联苯胺（diaminobenzidine，DAB）显色试剂盒（北京中杉金桥生物技术有限公司），Envision两步法免疫组化试剂盒（美国GeneTech公司），辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG二抗（北京博奥森生物技术有限公司）。

1.2.2 免疫组化检测 取卵巢癌组织及切缘阴性>1 cm的癌旁组织，以10%甲醛固定、梯度酒精脱水、石蜡包埋后，蒸馏水漂洗5 min，连续4 μm切片，行热修复后于37 ℃恒温箱中孵育30 min，封闭后滴加一抗（SIRT-1抗体、CD44抗体，1∶100稀释），4 ℃过夜（12 h），磷酸盐缓冲液（phosphate-buffered saline，PBS）洗片，加二抗，室温封闭30 min，DAB显色，苏木素复染3 min，脱水、返蓝、封固后采用BX51型光学显微镜（日本奥林巴斯公司）阅片。严格按试剂盒说明书要求进行操作。

1.3 结果评估

由2名病理科医师采用盲法阅片。CD44以细胞膜出现黄色或棕黄色颗粒为阳性，SIRT-1以细胞核及细胞质出现黄色或棕黄色颗粒为阳性。随机选取5个高倍镜视野（×400）进行评估。以阳性细胞染色强度（无色为0分、淡黄色为1分、黄色为2分、棕黄色为3分）与百分率（<5%为0分、5%～25%为1分、26%～50%为2分、51%～75%为3分、>75%为4分）积分之和≥4分为阳性表达、≤3分为阴性表达[4-5]。

1.4 统计学方法

采用SPSS 22.0软件进行统计分析。计数资料以例或率表示，组间比较采用χ2检验。采用Spearman等级相关评估SIRT-1与CD44的相关性。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 卵巢癌患者癌组织与癌旁组织中SIRT-1、CD44表达阳性率的比较

癌组织SIRT-1、CD44表达阳性率分别为62.07%（72/116）、68.97%（80/116），均显著高于癌旁组织[18.97%（22/116）、20.69%（24/116）]（P<0.05），见表1。SIRT-1、CD44阳性表达见图1、图2。

表1 卵巢癌患者组织中SIRT-1、CD44阳性表达比较

图1 癌组织及癌旁组织SIRT-1、CD44阳性表达情况（免疫组化染色，×400）

图2 癌组织及癌旁组织SIRT-1和CD44阳性表达情况（苏木精-伊红染色，×400）

2.2 卵巢癌患者癌组织SIRT-1、CD44表达与临床病理特征的关系

组织学分级G1期、FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、浸润度T3～T4期、有淋巴结转移的卵巢癌患者癌组织SIRT-1、CD44阳性率分别高于G2～G3期、Ⅰ～Ⅱ期、T1～T2期和无淋巴结转移的患者（P<0.05），不同年龄、病理类型和肿瘤直径患者SIRT-1、CD44阳性率差异均无统计学意义（P>0.05）。见表2。

表2 不同临床病理特征卵巢癌患者癌组织中SIRT-1、CD44阳性表达的比较

2.3 癌组织SIRT-1表达与CD44表达的相关性

Spearman等级相关分析结果显示，卵巢癌组织SIRT-1表达与CD44表达呈正相关（r=0.721，P<0.001）。见表3、图3。

表3 卵巢癌组织中SIRT-1与CD44表达的关系

图3 卵巢癌组织中SIRT-1表达与CD44表达的相关性

3 讨论

卵巢癌的发病机制尚不明确，普遍认为主要与遗传、环境、生活和饮食习惯等有关。尽管手术、放疗、化疗、内分泌、免疫等治疗方法不断改进，但因40%～70%的卵巢癌患者被确诊时已处于中晚期，预后较差[6-7]。有研究结果显示，卵巢癌细胞异常增殖、侵袭、转移等生物学行为是一个多步骤、多因素参与的连续过程，与多种细胞因子表达异常有关，提示检测相关因子表达对评估患者病情有重要的临床价值[8]。

本研究结果显示，卵巢癌组织中SIRT-1、CD44阳性率显著高于癌旁组织（P<0.05），表明SIRT-1、CD44与卵巢癌发生有关，与WANG等[9]和侯小满等[10]的研究结果一致。SIRT-1是Sirtuins家族成员之一，其依赖于烟碱胺腺嘌呤二核苷酸发挥调控细胞代谢、分化、增殖、凋亡、DNA损伤修复等作用[11]。有研究结果显示，SIRT-1在胃癌中呈高表达，主要通过调节肿瘤细胞的能量代谢、增殖、凋亡等方式促进胃癌的生长、侵袭和转移[12]。

肿瘤干细胞学说是一个肿瘤新理论，认为在肿瘤实质中存在极少的具有干细胞特性的肿瘤细胞，具有自我更新、高致瘤性、耐药性的特点，也是肿瘤发生与恶化的根源[13]。CD44是黏附分子家族成员，也是分离和鉴定肿瘤干细胞的表面标记物，其通过与透明质酸的特异性结合可介导细胞间或细胞与基质间的特异性黏附，并可调节淋巴细胞归巢、转移等，在促进乳腺癌、肠癌等恶性肿瘤的生长、侵袭、转移中具有重要的作用[14-15]。在卵巢癌发生过程中，可能伴随着SIRT-1和CD44基因表达的激活，SIRT-1高表达可能会改变卵巢癌细胞的能量代谢、增殖、凋亡等生物学过程，而CD44的高表达可能会刺激卵巢肿瘤干细胞相关基因的表达，促进卵巢细胞增殖、分化等生物学功能的改变，促使卵巢细胞发生癌变[16-17]。本研究结果显示，组织学分级G1期、FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、浸润度T3～T4期、有淋巴结转移的卵巢癌患者癌组织SIRT-1、CD44阳性率分别高于G2～G3期、Ⅰ～Ⅱ期、T1～T2期和无淋巴结转移的患者（P<0.05），不同年龄、病理类型和肿瘤直径患者SIRT-1、CD44阳性率差异均无统计学意义（P>0.05）。表明SIRT-1、CD44与卵巢癌生长、侵袭、转移等生物学行为有关。原因可能是SIRT-1、CD44介导了卵巢癌的病情进展，SIRT-1表达升高可能会加快卵巢癌细胞的能量代谢、增殖，抑制其凋亡；CD44表达升高可能会增强卵巢癌细胞增殖、分化的能力，从而促进卵巢癌的生长、侵袭和转移。

本研究Spearman等级相关分析结果显示，卵巢癌组织SIRT-1表达与CD44表达呈正相关（r=0.721，P<0.001）。提示SIRT-1、CD44在促进卵巢癌进展中可能存在协同作用，但二者相互作用的具体机制尚不明确。

本研究的不足之处在于样本量较小，结论尚需大样本量的临床研究加以验证。另外，SIRT-1、CD44在卵巢癌中的作用机制尚需进一步深入研究。

综上所述，SIRT-1、CD44与卵巢癌发生、发展有关，二者可能共同促进了卵巢癌的生长、侵袭、转移。SIRT-1、CD44表达阳性提示患者病情可能较严重，应尽早采取相应的干预措施，以改善患者预后。SIRT-1、CD44表达或可作为评估卵巢癌患者病情的标志物。