支气管肺泡灌洗液真菌镜检及培养结果分析

张碧志，余泽明，曾跃芬，郭艳琼，李红宾

（1.昆明医科大学第一附属医院皮肤科，云南 昆明 650031；2.昆明医科大学第一附属医院呼吸科，云南 昆明 650031）

肺部真菌感染是指真菌侵入肺脏，所致肺脏组织的感染，起病隐匿、无特异性临床表现及体征，漏诊率高，预后差，死亡率高。目前临床上对于肺部真菌感染诊断主要通过临床表现结合实验室检查，如痰涂片真菌镜检［1］、G 试验［2］、GM 试验［3］及胸部CT 检查综合考虑，仍然难以能及时、准确诊断肺部真菌感染，故临床上肺部真菌感染多为经验性诊断［4-5］。故如何改良、完善现有的肺深部真菌感染的诊断手段和开发新方法，提高肺部真菌感染的检出率，仍是临床工作者面临的挑战［6］。支气管纤维镜是一种可以从呼吸道和肺泡中获得肺泡上皮内液体的检查方法，该项检查目前主要应用于诊断肺部感染，尤其是免疫受损宿主中由机会性微生物引起的肺部感染［7］。目前支气管肺泡灌洗液直接进行真菌镜检与培养鲜有报道，故我们使用该方法并结合患者影像学诊断做了分析，报告如下。

1 资料与方法

1.1 研究对象 昆明医科大学第一附属医院2020 年10 月至2021 年7 月支气管肺泡灌洗室行经支气管镜肺泡灌洗患者。

1.2 纳入标准 ① 行经支气管肺泡灌洗液检查明确诊断患者；② 患者及其家属知情、同意本研究。排除标准：① 严重心脑血管疾病患者；② 肝肾严重病变患者；③ 拒绝本研究检查患者。

1.3 研究方法 对256 例患者的支气管肺泡灌洗液进行真菌镜检及培养，分析患者临床资料及检查结果。

1.4 真菌镜检、培养及鉴定 支气管肺泡灌洗液2ml置于冻存管中静置2h，沉淀，弃上清液，使用无菌吸液器吸取1ml 液体至沙保氏培养基，置于35℃恒温培养箱中培养，14d 无真菌生长判定为真菌培养阴性。管底吸取10ul 支气管肺泡灌洗液于载玻片上，加入真菌荧光染液进行真菌直接镜检。酵母菌用科马嘉显色进行鉴定，丝状真菌依据显微镜下形态学和生化特征鉴定［8］。

1.5 统计学方法 采用SPSS 21.0 进行统计分析，计数资料用（n，%）表示。

2 结果

2.1 一般资料 2020 年10 月至2021 年7 月昆明医科大学支气管灌洗室行经支气管肺泡灌洗256 例患者，培养阳性20 例（7.81%），其中男性患者13 例（65%），女性7 例（35%），最小年龄18 岁，最大年龄73 岁，平均年龄（72.21±22.42）岁。

2.2 真菌鉴定结果 18 例培养出酵母菌，鉴定出白色念珠菌6 例（33.33%，6/18），光滑念珠菌2 例（11.11%，2/18），克柔1 例（0.55%，1/18），其他念珠菌1 例（0.55%，1/18），2 种及以上念珠菌并存8 例，白色念珠菌与其他种类念珠菌共存7 例（38.89%，7/18），其次克柔与其他念珠菌共存1 例（0.55%，7/18）。丝状真菌2 例，均为黑曲霉，详见表1。

表1 支气管肺泡灌洗液培养深部真菌病原菌

2.3 真菌检查结果与影像学诊断相关分析 通过统计患者影像学诊断及其支气管肺泡灌洗液真菌镜检及培养进行分析，真菌镜检结果找到菌丝19 例（7.42%，10/256），肺部阴影5 例，肺部结节8 例，肺占位病变4 例，咯血1 例，空洞病变1 例。大量孢子4 例（1.56%，4/256），肺部阴影2 例，肺部结节1 例，肺占位病变1 例。少量孢子16 例（6.25%，16/256），肺部阴影8 例，肺部结节3 例，咯血1例，肺不张1 例，胸腔积液2 例，肺部肿瘤1 例。肺部阴影患者真菌镜检和培养阳性最高（38.46%），其次是肺部结节和肺占位性病变，分别是30.77%、12.82%，详见表2。

表2 支气管肺泡灌洗液真菌镜检与影像学诊断分析

3 讨论

肺部真菌感染是指真菌侵入肺脏所致感染，由于无特殊症状和体征，诊断相对困难，肺部穿刺活检找到真菌是诊断金标准，但该项检查对患者具有一定创伤，因此不常用。支气管纤维镜检是近年呼吸系统疾病诊断应用较普遍的检查方法，相较于肺穿刺活检术创伤性小。本次实验共收集256 例患者的支气管肺泡灌洗液，真菌镜检找到菌丝19 例（7.42%，19/256），大量孢子4 例（1.56%，4/256）、少量孢子16 例（6.25%，16/256）；真菌培养阳性20 例，其中酵母菌18 例，鉴定白念珠菌为6 例（33.33%，6/18），光滑念珠菌为2 例（11.11%，2/18），克柔念珠菌1 例（0.55%，1/18），其他念珠菌1 例（0.55%，1/18），2 种及以上念珠菌并存8 例（白念珠菌与其他种类念珠菌共存7 例（38.89%，7/18），其次克柔念珠菌与其他念珠菌共存1 例），另有丝状真菌2例，均为黑曲霉。真菌检查结果与临床诊断相关分析结果显示，肺部阴影患者真菌镜检和培养阳性最高，占38.46%，其次是肺部结节和肺部占位性病变，分别占30.77%、12.82%。支气管肺泡灌洗液真菌镜检与培养阳性率不高，主要见于肺部阴影及肺部结节患者。有文献指出，支气管肺泡灌洗液在某种情况认为是液体式的肺部活检［9］，本研究中，对支气管肺泡灌洗液进行直接真菌镜检及培养阳性率低下，其可能因素首先考虑人群中肺部真菌感染发生率并不高，其次本研究标本仅为全部支气管肺泡灌洗液中的极少部分，极大降低真菌镜检及培养的阳性率，另外，该项检查并非诊断肺部真菌感染的金标准，综上原因可能导致本研究结果的阳性率低下。本研究结果表明，支气管肺泡灌洗液真菌镜检与培养阳性率较低，对于侵袭性肺部真菌感染的敏感性和特异性相较于其他临床实验室检查无特殊优势。