药食两用小蓟中细胞毒活性成分解析

王泽玉，张晓霞，吴 勇，王 欣，李金杰，戴雪玲，尚小雅

（北京联合大学 生物活性物质与功能食品北京市重点实验室 北京 100191）

小薊[Cirsium setosum （Willd.） MB.]为菊科蓟属植物刺儿菜的干燥地上部分，为多年生草本植物，广泛分布于我国大部分地区；其嫩叶是民间喜欢食用的一种野菜，具有丰富的营养和药用价值[1]。文献报道小薊具有止血、凝血、抗菌、抗炎、抑制肿瘤，以及降脂、降糖、提高心肌收缩力、升压、抗疲劳和抗衰老等作用[2]。小蓟止血、凝血等的活性因子已研究清楚，而对于小薊中抗肿瘤活性因子除本课题组的研究外，未检索到其它文献报道。由于小薊可食用、安全无毒，常作为药饮与其它药物联用，治疗膀胱癌、肺癌等，提取物在体外MTT实验中对人源化的肝癌、胃癌和宫颈癌等细胞均具较好的抑制作用[3-4]。以小薊为对象，研究其抗肿瘤活性的物质基础，建立质控标准，开发能够长期食用且预防或缓解肿瘤的功能食品，具有重要的实际意义。

本课题组一直致力于小薊抗肿瘤活性因子的挖掘。在体外MTT 活性指导下，发现小薊提取物的主要样品量和抗肿瘤活性集中在乙醇提取石油醚萃取部位。借助正相硅胶色谱分离纯化方法，将石油醚萃取部位分成11 个不同极性的组分，发现其中5 个组分显示出较好的体外抑制多种人肿瘤细胞的活性，课题组前期从上述活性组分中分离鉴定了26 个化合物，其中8 个化合物具有细胞毒活性[3-7]。本文继续对石油醚部位剩余未研究的强活性亚组分进行分析，以彻底明确其抗肿瘤的物质基础；为小薊抗肿瘤的应用、预防或缓解肿瘤功能食品的开发提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

小蓟采自安徽九华山，经九华山黄精研究所柯云武工程师鉴定为菊科植物小蓟（Cirsium setosum （Willd.） MB），标本（20081028）保存于北京联合大学生物活性物质与功能食品北京市重点实验室。

GF254薄层色谱（TLC）硅胶和160～200 目柱色谱硅胶，青岛海洋化工厂；Sephadex LH-20 凝胶，GE 公司；低压反相硅胶色谱柱和正相氰基色谱柱，ISCO 公司；高压液相C18 Sunfire 和X-bridge制备柱（250 mm×10 mm×5 μm），Waters 公司；甲醇、乙醇、丙酮、氯仿和石油醚等均为分析纯级，北京化学试剂厂；HPLC 色谱级和UPLC 质谱级甲醇、乙腈，美国Fisher 公司；试验用超纯水，美国Millipore 制水机制备；四甲基偶氮唑盐（MTT），德国Serva 公司；1640 培养液，用时临时配制。

1.2 仪器与设备

旋转蒸发仪，瑞士Buchi 公司；CombiFlash 低压快速色谱分离仪，美国ISCO 公司；2545 HPLC色谱仪、2998 型检测器，美国Waters 公司；Thermo QE Plus orbitrap 高分辨质谱仪，美国赛默飞公司；Inova 500 核磁共振仪，美国Varian 公司；Millipore 超纯水仪，美国密理博公司。

1.3 单体的制备方法

小蓟干燥地上部分20 kg，依次用体积分数95%，80%和60%的乙醇超声（380 W）提取3 次、每次1 h，合并提取液减压浓缩得浸膏；浸膏水溶后依次用石油醚和乙酸乙酯萃取，得到石油醚（468.5 g）、乙酸乙酯（180.0 g）和水相3 部分。体外细胞毒活性测试发现石油醚部位对多种人源性肿瘤细胞有较好的抑制活性，用石油醚部分过正相硅胶柱色谱，流动性用石油醚-丙酮 （100∶1～0∶100）分成极性不同的11 个组分：Sh1～Sh11；体外MTT 实验发现组分Sh2，Sh4，Sh5，Sh7，Sh9 均显示出较好的细胞毒活性，课题组前期已从上述活性组分分离鉴定了26 个化合物，其中8 个化合物具有细胞毒活性[4，6-7]，本文继续对Sh9 中的亚组分进行研究。

组分Sh9 经正相硅胶柱层析，流动相用石油醚-丙酮[（100∶1）～（2∶1）]梯度洗脱，得到亚组分Sh9-1～Sh9-7。将亚组分Sh9-2 经葡聚糖凝胶Sephadex LH-20 柱色谱，石油醚-氯仿-甲醇（5∶5∶1）反复洗脱，再经Wates 2545 高效液相Sunfire制备柱制备，流动性甲醇-水（95∶5），流速为18 mL/min 洗脱，得到化合物1（6 mg，tR=17 min，紫外检测波长238 nm）。亚组分Sh9-7 经低压快速分离仪C18 反相flash 柱色谱，流动相甲醇-水[（65∶35）～（100∶0）]梯度洗脱，纯化后的样品过凝胶柱，流动相为石油醚-氯仿-甲醇（5∶5∶1）洗脱，主要馏分加热溶于丙酮，放置冷却后析出白色沉淀，将其反复沉淀过滤，得到化合物2（15 mg）。亚组分Sh9-6 经快速分离仪氰基flash 柱色谱，流动相石油醚-丙酮[（50∶1）～（2∶1）]梯度洗脱，得到的主成分在丙酮中放置出现沉淀，沉淀经低压快速分离仪C18 反相flash 柱色谱，流动相甲醇-水[（60∶40）～（100∶0）]梯度洗脱，纯化后的样品上Waters 2545 高效液相X-bridge 制备柱制备，流动性甲醇-水（93∶7），流速为18 mL/min 洗脱，得到化合物3（5 mg，tR=21.0 min，紫外检测波长238 nm）、化合物4（8 mg，tR=19.5 min，紫外检测波长238 nm）和化合物5（6 mg，tR=19.0 min，紫外检测波长238 nm）。

1.4 化合物的质谱分析

将分离得到的单体化合物用甲醇溶解，配制成质量浓度为0.1 mg/mL 的溶液，过0.22 μm 滤膜后直接进行高分辨质谱分析。高分辨质谱条件参数：离子源：HESI；扫描模式：正离子模式和负离子模式；喷雾电压：正离子（3.5 kV），负离子（4.0 kV）；鞘气流量：50 units；辅助气流量10 units；离子源温度：320 ℃；毛细管温度：320 ℃；分辨率：70 000；二级碰撞能量：20，40，60 eV 归一化能量；一级质谱扫描范围：m/z：100～500。

1.5 细胞毒活性筛选方法

收集生长良好的5 种肿瘤细胞（HCT-116：人结肠癌细胞，HepG2：人肝癌细胞，BGC-823：人胃癌细胞，NCI-H1650：人肺支气管癌细胞，A2780：人卵巢癌细胞），用含10%牛血清的RPMI1640 培养基配制成1×104cell/mL 细胞悬液，接种于96孔培养板内，每孔100 μL（含1 000 个肿瘤细胞），置于37 ℃，5%CO2恒温箱中培养24 h 后加样。试验设空白对照和样品组，受试样品设低、中、高3个浓度（1，10，100 μg/mL），每个浓度3 个平行孔，置于37 ℃，5%CO2温箱里培养4 d。弃去培养液，每孔加入MTT 溶液（0.4 mg/mL，RPMI 1640 配制）100 μL，37 ℃孵育4 h。弃上清液，每孔加入DMSO 150 μL，轻度振荡溶解Fomazan 颗粒，置于酶标仪上，在540 nm 检测波长下测定OD 值，计算其抑制率。以药物的不同浓度及对细胞的抑制率作图，可得到剂量反应曲线，从中求出半数抑制浓度 （IC50）。

2 结果与分析

2.1 化合物的结构鉴定

2.1.1 3 β-羟基豆甾-5-烯-7-酮的结构鉴定 化合物为白色粉末。1H-NMR 谱中高场区显示6 个甲基质子信号，其中有2 个单峰质子信号δH1.20（3H，s） 和0.68 （3H，s），3 个双峰质子信号δH0.93 （3H，d，J=6.5 Hz）、0.83 （3H，d，J=7.0 Hz）和0.81 （3H，d，J=7.0 Hz） 和1 个三重峰质子信号δH0.85 （3H，t，J=8.0 Hz）；低场区显示1 个双键质子信号δH5.69（1H，s），较低场有1 个明显的多重峰连氧质子信号δH3.68 （1H，m），提示结构是含不饱和键的甾体化合物。13C-NMR 谱显示该结构有29 个碳原子，低场信号δC202.4，165.2，126.3，结合氢谱低场信号δH5.69，提示结构中含有α，β-不饱和酮的结构片段，双键上有1 个叔碳、1 个季碳；连氧碳信号δC70.7，结合氢谱较低场中多重峰质子信号δH3.68 （1H，m），推测结构是3 位羟基的豆甾烯酮类结构。HRESIMS 一级质谱显示m/z：429.37234 [M+H]+（理论计算值：429.37271），分子式为C29H48O2；二级特征碎片离子 有411.36194，393.35144，369.31519，271.20541，229.15872，213.16377，197.13251，175.11182；根据碎片离子推测此结构是3β-羟基豆甾-5-烯-7-酮（3β-Hydroxystigmast-5-en-7-one）；将该化合物的核磁数据与文献[8]比对发现，二者数据一致，故确证了所推导结构的正确性。

图1 3β-羟基豆甾-5-烯-7-酮的结构式Fig.1 Structure of compounds 3β-hydroxystigmast-5-en-7-one

2.1.2 豆甾-22-烯-3β，5α，6β-三醇的结构鉴定 化合物为针状结晶（丙酮）。1H-NMR 谱显示6 个甲基质子信号，其中有2 个甲基单峰质子信号δH1.66 （3H，s） 和0.77 （3H，s），3 个甲基质子双峰信号δH1.10 （3H，d，J=6.5 Hz），0.83 （3H，d，J=6.0 Hz），0.80（3H，d，J=7.5 Hz） 和1 个甲基质子三重峰信号δH0.86 （3H，t，J=6.5 Hz）；2 个与氧相连的质子信号δH2.94 （1H，m） 和4.85 （1H，m），2 个双键质子信号δH5.21 （1H，dd，J=15.0，8.5 Hz） 和5.06 （1H，dd，J=15.0，9.0 Hz）。13CNMR 谱显示29 个碳原子，低场有2 个双键碳信号δc138.9 和129.4，3 个连氧的碳信号δc76.3，75.9，67.3。根据氢和碳谱的特征数据推断，此结构为含有1 个双键和3 个羟基的豆甾醇类化合物。HRESIMS 一级质谱显示m/z：445.36871 [M+H]+（理论计算值：445.36872），分子式为C29H50O3；二级特征碎片离子有 427.26258，409.34802，407.33206，353.28513；根据碎片离子推测此结构是豆甾-22-烯-3β，5α，6β-三醇（Stigmast-22-ene-3β，5α，6β-triol）；将该化合物的核磁数据与文献[9]和[10]比对发现，二者数据一致，故确证了所推导结构的正确性。

图2 3β-羟基豆甾-5-烯-7-酮的核磁图Fig.2 NMR of compound 3β-hydroxystigmast-5-en-7-one

图3 3β-羟基豆甾-5-烯-7-酮的质谱图Fig.3 MS of 3β-hydroxystigmast-5-en-7-one

图4 豆甾-22-烯-3β，5α，6β-三醇的结构式Fig.4 Structure of stigmast-22-ene-3β，5α，6β-triol

图5 5α-豆甾-22-烯-3β，5α，6β-三醇的核磁图Fig.5 NMR of 5α-stigmast-22-ene-3β，5α，6β-triol

图6 5α-豆甾-22-烯-3β，5α，6β-三醇的质谱图Fig.6 MS of 5α-stigmast-22-ene-3β，5α，6β-triol

2.1.3 6 β-羟基-豆甾-4-烯-3-酮的结构鉴定 化合物为白色粉末。1H-NMR 谱高场区显示6 个甲基质子信号，其中有2 个单峰质子信号δH1.55（3H，s） 和0.73 （3H，s），3 个双峰质子信号δH1.01 （3H，d，J=6.5 Hz）、0.91 （3H，d，J=8.0 Hz）和0.87 （3H，d，J=7.0 Hz），1 个三重峰质子信号δH0.90 （3H，t，J=7.5 Hz）；低场区2 个质子信号[连氧质子信号δH4.55 （1H，br s） 和烯键质子信号δH6.05 （1H，s）]，提示结构为含α，β-不饱和酮的甾体。13C-NMR 谱29 个碳原子，碳谱低场信号δC199.6，125.8，169.8，结合氢谱相应低场信号δH6.05 （1H，s），确证结构存在α，β-不饱和酮片段；1 个连氧碳信号δC72.5，结合氢谱质子信号δH4.55 （1H，br s），表明结构有1 个羟基；推测结构中存在羟基、α，β-不饱和酮的甾体结构。HRESIMS 一级质谱显示m/z：429.37234 [M+H]+（理论计算值：429.37271），分子式为C29H48O2；二级特征碎片离子有411.36197，393.35156，175.11182，159.11691；根据碎片离子推测此结构是6β-羟基-豆甾-4-烯-3-酮 （6β-Hydroxy-stigmasta-4-en-3-one）；将该化合物的核磁数据与文献[11]比对发现，二者数据一致，故确证了所推导结构的正确性。

图7 6β-羟基-豆甾-4-烯-3-酮的结构式Fig.7 Structure of 6β-hydroxy-stigmasta-4-en-3-one

图8 6β-羟基-豆甾-4-烯-3-酮的核磁图Fig.8 NMR of 6β-hydroxy-stigmasta-4-en-3-one

图9 6β-羟基-豆甾-4-烯-3-酮的质谱图Fig.9 MS of 6β-hydroxy-stigmasta-4-en-3-one

2.1.4 6 β-羟基-豆甾-4，22-二烯-3-酮的结构鉴定 化合物为白色粉末。1H-NMR 和13C-NMR 谱与化合物3 十分相似，仔细对照波谱数据发现，母核数据完全一致，差别只是支链22 位饱和键变成了双键。HRESIMS 一级质谱显示m/z：427.35654[M+H]+（理论计算值：427.35706），分子式为C29H46O2，也表明结构中少了2 个氢原子；二级特征碎片离子有409.34613，365.61716，271.20587，253.19574，123.08091；根据碎片离子推测此结构是6β-羟基-豆甾-4，22-二烯-3-酮（6β-Hydroxystigmasta-4，22-dien-3-one）；将该化合物的核磁数据与文献[11]比对发现，二者数据一致，故确证了所推导结构的正确性。

2.1.5 6 β-羟基-芸苔甾-4-烯-3-酮的结构鉴定 化合物为无色针状结晶 （丙酮）。1H-NMR 和13C-NMR 谱与化合物3 十分相似，仔细对照发现，13C-NMR 谱只有28 个碳原子，比化合物3 少了1个碳；母核数据与化合物3 完全相符，差别在支链；化合物3 中23 位碳的位置在δC26.4，而此结构中向底场移动了4.2 ppm 到δC30.6，24 位碳从δC46.0 向高场移动了7 ppm 到δC39.0，25 位碳从δC29.5 向低场移动了3.1 ppm 到δC32.6；推测24 位连接的乙基变成了甲级。HRESIMS 一级质谱显示m/z：415.35641 [M+H]+（理论计算值：415.35696），分子式为C28H46O2；二级特征碎片离子有397.34647，379.33597，343.29968，271.20575，229.15891，217.15872，217.15872，175.11186，159.11694；根据碎片离子推测此结构是6β-羟基-芸苔甾-4-烯-3-酮 （6β-Hydroxycampest-4-en-3-one）；将该化合物的核磁数据与文献[11]和[12]比对发现，二者数据一致，故确证了所推导结构的正确性。

图10 6β-羟基-豆甾-4，22-二烯-3-酮的结构式Fig.10 Structure of 6β-hydroxy-stigmasta-4，22-dien-3-one

图11 6β-羟基-豆甾-4，22-二烯-3-酮的核磁图Fig.11 NMR of 6β-hydroxy-stigmasta-4，22-dien-3-one

图12 6β-羟基-豆甾-4，22-二烯-3-酮的质谱图Fig.12 MS of 6β-hydroxy-stigmasta-4，22-dien-3-one

图13 6β-羟基-芸苔甾-4-烯-3-酮的结构式Fig.13 Structure of 6β-hydroxycampest-4-en-3-one

图14 6β-羟基-芸苔甾-4-烯-3-酮的核磁图Fig.14 NMR of 6β-hydroxycampest-4-en-3-one

2.2 化合物的核磁波谱数据

2.2.1 3 β-羟基豆甾-5-烯-7-酮的波谱数据 化合物为白色粉末。HRESIMS m/z：429.37234[M+H]+（理论计算值：429.37271）。1H-NMR （CDCl3，500 MHz）δH：5.69 （1H，s，H-6），3.68 （1H，m，H-3），1.20 （3H，s，H-19），0.93 （3H，d，J=6.5 Hz，H-21），0.85 （3H，t，J=8.0 Hz，H-29），0.83（3H，d，J=7.0 Hz，H-26），0.81 （3H，d，J=7.0 Hz，H-27），0.68 （3H，s，H-18）；13C-NMR （CDCl3，125 MHz） δC：36.5 （C-1），31.4 （C-2），70.7（C-3），42.0 （C-4），165.2 （C-5），126.3 （C-6），202.4 （C-7），45.6 （C-8），50.1 （C-9），38.9 （C-10），21.4 （C-11），38.4 （C-12），43.3 （C-13），50.1 （C-14），26.5 （C-15），28.7 （C-16），54.9（C-17），12.1 （C-18），17.5 （C-19），36.2 （C-20），19.1 （C-21），34.1 （C-22），26.3 （C-23），46.0 （C-24），29.3 （C-25），19.9 （C-26），19.2（C-27），23.2（C-28），12.1（C-29）。

图15 6β-羟基-芸苔甾-4-烯-3-酮的质谱图Fig.15 MS of 6β-hydroxycampest-4-en-3-one

2.2.2 豆甾-22-烯-3β，5α，6β-三醇的波谱数据 化合物为针状结晶（丙酮）。HRESIMS 一级质谱显示m/z：445.36871 [M+H]+（理论计算值：445.36872），分子式为C29H50O3。1H-NMR （C5D5N，500 MHz）δH：5.21 （1H，dd，J=15.0，8.5 Hz，H-22），5.06（1H，dd，J=15.0，9.0 Hz，H-23），4.85 （1H，m，H-5），2.94 （1H，m，H-6），1.66 （3H，s，CH3-19），1.10 （3H，d，J=6.5 Hz，CH3-21），0.86（3H，t，J=6.5 Hz，CH3-29），0.83 （3H，d，J=6.0 Hz，CH3-27），0.77 （3H，s，CH3-18），0.80（3H，d，J=7.5 Hz，CH3-26）；13C-NMR （C5D5N，125 MHz） δ：32.5 （C-1），33.3 （C-2），67.3 （C-3），42.8 （C-4），75.9 （C-5 or C-6），76.3 （C-6 or C-5），35.7（C-7），31.2（C-8），45.9 （C-9），39.2（C-10），21.5 （C-11），40.8 （C-12），42.9 （C-13），56.4 （C-14），24.7 （C-15），29.4 （C-16），56.7 （C-17），12.5 （C-18），17.2 （C-19），40.5（C-20），19.2 （C-21），138.9 （C-22），129.4 （C-23），51.4 （C-24），32.1 （C-25），21.7 （C-26），21.2（C-27），25.6（C-28），12.5（C-29）。

2.2.3 6 β-羟基-豆甾-4-烯-3-酮的波谱数据 化合物为白色粉末。HRESIMS m/z：429.37234[M+H]+（理论计算值：429.37271），分子式为C29H48O2。1H-NMR （C5D5N，500 MHz） δ：6.05（1H，s，H-4），4.55 （1H，br s，H-6），1.55 （3H，s，H-19），1.01 （3H，d，J=6.5 Hz，H-21），0.91（3H，d，J=8.0 Hz，H-27），0.90 （3H，t，J=7.5 Hz，H-29），0.87 （3H，d，J=7.0 Hz，H-26），0.73（3H，s，H-18）；13C-NMR （C5D5N，125 MHz） δ：37.4 （C-1），34.7 （C-2），199.6 （C-3），125.8 （C-4），169.8 （C-5），72.5 （C-6），39.9 （C-7），30.3（C-8），54.1 （C-9），38.4 （C-10），21.3 （C-11），39.7 （C-12），42.7 （C-13），56.1 （C-14），24.4（C-15），28.5 （C-16），56.3 （C-17），12.1 （C-18），19.5 （C-19），36.4 （C-20），18.9 （C-21），34.2 （C-22），26.4 （C-23），46.0 （C-24），29.5（C-25），20.0 （C-26），19.2 （C-27），23.4 （C-28），12.1（C-29）。

2.2.4 6 β-羟基-豆甾-4，22-二烯-3-酮的波普数据 化合物为白色粉末。HRESIMS m/z：427.35654 [M+H]+（理论计算值：427.35706），分子式为C29H46O2。1H-NMR （C5D5N，500 MHz） δ：6.05 （1H，s，H-4），5.23 （1H，d，J=15，9 Hz，H-22），5.08 （1H，d，J=15，9 Hz，H-23），4.54（1H，br s，H-6），1.55 （3H，s，H-19），1.10 （3H，d，J=6.5 Hz，H-21），0.89 （3H，t，J=7.5 Hz，H-29），0.92 （3H，d，J=6.5 Hz，H-27），0.87 （3H，d，J=7.0 Hz，H-27），0.75 （3H，s，H-18）；13CNMR （C5D5N，125 MHz）δ：37.4 （C-1），34.7 （C-2），199.5 （C-3），125.8 （C-4），169.8 （C-5），72.5 （C-6），39.8 （C-7），30.5 （C-8），54.1 （C-9），38.4 （C-10），21.3 （C-11），39.7 （C-12），42.5 （C-13），56.1 （C-14），24.5 （C-15），29.3（C-16），56.2 （C-17），12.2 （C-18），19.5 （C-19），40.8 （C-20），21.4 （C-21），138.7 （C-22），129.5 （C-23），51.4 （C-24），32.1 （C-25），21.2（C-26），19.2 （C-27），25.7 （C-28），12.5 （C-29）。

2.2.5 6 β-羟基-豆甾-4-烯-3-酮的波普数据 化合物为无色针状结晶 （丙酮）。HRESIMS m/z：415.35641 [M+H]+（理论计算值：415.35696），分子式为C28H46O2。1H-NMR（C5D5N，500 MHz）δ：6.05（1H，s，H-4），4.55 （1H，br s，H-6），1.55 （3H，s，H-19），0.99 （3H，d，J=6.5 Hz，H-21），0.89（3H，d，J=7.0 Hz，H-27），0.84 （3H，d，J=6.5 Hz，H-26），0.83 （3H，d，J=7.5 Hz，H-28），0.72（3H，s，H-18）；13C-NMR （C5D5N，125 MHz） δ：37.4 （C-1），34.7 （C-2），199.6 （C-3），125.8 （C-4），169.8 （C-5），72.5 （C-6），39.9 （C-7），30.3（C-8），54.1 （C-9），38.4 （C-10），21.3 （C-11），39.7 （C-12），42.7 （C-13），56.1 （C-14），24.4（C-15），28.5 （C-16），56.3 （C-17），12.1 （C-18），19.5 （C-19），36.1 （C-20），18.8 （C-21），33.9 （C-22），30.6 （C-23），39.0 （C-24），32.6（C-25），20.3 （C-26），18.3 （C-27），15.5 （C-28）。

2.3 细胞毒活性筛选结果

采用MTT 法对分离得到的5 个单体化合物分别进行体外细胞毒活性验证，结果如表1所示。

表1 细胞毒活性筛选结果Table 1 Cytotoxic data of compounds

3 结论

在体外MTT 活性测试指导下，从小薊石油醚未研究的亚组分中，借助常压、低压和高压液相色谱，并利用正相硅胶、氰基硅胶、C18 反向硅胶以及Sephadex LH-20 凝胶填料，分离得到5 个化合物；并对分离得到的化合物借助一维核磁和高分辨质谱确定了化合物的结构，再与已知文献比对，确证了结构的正确性。采用MTT 法对分离得到的5 个单体化合物分别进行体外细胞毒活性验证，除化合物豆甾-22-烯-3β，5α，6β-三醇以外，其它4 个化合物对HCT-116 细胞和HepG2 细胞均有明显抑制作用；其中6β-羟基-豆甾-4-烯-3-酮对HCT-116 细胞抑制作用最强，而6β-羟基-芸苔甾-4-烯-3-酮对HepG2 细胞抑制作用最强，推测羰基可能是其活性基团。此外，3β-羟基豆甾-5-烯-7-酮、6β-羟基-豆甾-4-烯-3-酮和6β-羟基-芸苔甾-4-烯-3-酮对HGC-823 细胞具有抑制作用，仅3β-羟基豆甾-5-烯-7-酮对NCI-H1650 细胞有抑制作用。所有被测化合物对A2780 细胞均无抑制作用。