SPF种猪场通过冷冻精液方式引种试验

杨 光，沈 君，方礼禄，麻文静，李鹏亮，郭晓宇，严彩红

（北京市SPF猪育种管理中心，北京 海淀 100089）

随着国内养猪行业规模化、大型化、工厂化的发展，养猪企业的种猪育种和品种培育工作显得十分重要，品种育种和培育工作是猪场提高生产水平、增加养殖经济效益的关键。由于部分猪场核心群数量偏少，同时采用封闭式育种，遗传基础较窄，也丧失了引进优良基因的机会，从而导致近交增量过大和遗传方差减少过快，使得其遗传改良的速度相当缓慢[1]，所以种猪场之间应该开展优秀种猪资源交流和联合育种，但是引进活体猪会受到地理位置和季节影响，同时也会导致养殖成本增加以及猪病不可控。随着猪冷冻精液技术逐渐成熟，冷冻精液可以长期保存、远距离运输，可提前通过PCR等方法检测，确保引进的冻精无特定病原体，使得冷冻精液更加安全可靠的同时促进优秀遗传资源交流。2020年7月至2021年9月北京市SPF猪育种管理中心通过冷冻精液方式进行一次SPF猪引种工作，通过冷冻精液和常温精液对比，来评估冷冻精液技术作为SPF猪引种方式的可行性。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 精液来源 冷冻精液采购于某公司英系大白细管冷冻精液，经检测无特定病原体，细管规格0.25 mL，10支稀释成1头份，选用公猪血统4个，精子活力0.5以上。常温精液为北京市SPF猪育种管理中心核心场提供，每头份60 mL，精子活力0.8以上。

1.1.2 母猪及分群 在北京市SPF猪育种管理中心选取2～4胎英系大白断奶母猪130头，随机分为2组，每组65个重复，每个重复1头，对照组使用常温精液，试验组采用冷冻精液方式，所有母猪输精方式全部采用子宫深部输精。

1.1.3 仪器设备 仪器设备包括scA780-54fc全自动精子质量分析系统、显微镜、恒温水浴锅、50 L液氮罐、一次性猪深部输精管、剪刀、长柄镊子、润滑剂等。

1.2 试验方法

1.2.1 冷冻精液解冻与检测 提前把精液稀释室室温调到26 ℃，将水浴锅加温到37 ℃，准备好精液稀释液，把准备好的精液稀释液放在水浴锅里至少1 h，向输精瓶里加60 mL预热好的精液稀释液；从液氮中取出1～2支冷冻精液，立即转入37 ℃水浴锅中解冻，37 ℃下解冻20 s，立即取出冷冻精液，用干净面巾纸擦干冷冻精液管外部，摇动精液管将气泡移至将要开口的棉花端，在棉花端剪开，放到37 ℃的装好稀释液输精瓶里，再剪开精液管另一端，把精液吹入已经加温到37 ℃的输精瓶，获得1头份精液需要10支，把装稀释好精液输精瓶放水浴锅里20 min，对稀释好的精液镜检，在预温到35～38 ℃的玻璃片上镜检，通过全自动精子质量分析系统检查其精液活力情况，配种精液活力不得低于0.5。

1.2.2 试情与输精 试情过程要有公猪在现场，对母猪背部、耳根、腹侧和乳腺等敏感部位进行触摸、按压和人员骑在母猪背部上，母猪会出现呆立不动的静立反射，母猪阴门内流出一些黏性液体，即判断母猪发情。母猪试情要在精液解冻前做完，保障冻精稀释后及时给发情母猪配种，18 h后再用同样方法给母猪再输一次，30 h后母猪仍在发情再配第3次，一头母猪发情期中的配种只能使用同一公猪的冷冻精液。参与试验母猪饲养在同一圈舍，由专人饲养管理。

1.2.3 数据记录与统计分析 记录参与试验母猪的耳号、品种、胎次和配种时间，以及所用精液的种类、公猪耳号和活力等数据。详细记录试验母猪窝总产仔数、窝产活仔数和窝产死胎数。分娩率相关计算式：分娩率=分娩母猪头数/配种母猪头数×100%。采用Excel进行数据初步分析，用SPSS计算各指标的平均值和标准差，并对各指标进行差异显著性检验。

2 结果与分析

由表1可知，试验组母猪窝总产仔数和窝产活仔数分别比对照组低1.08头（P＜0.01）和1.48头（P＜0.01），降低幅度分别达10.7%和15.5%；但试验组母猪窝产死胎数比对照组高0.38头（P＜0.01），增加幅度达57.6%。试验组母猪分娩率比对照组低10.77个百分点（P＜0.05）。

表1 不同精液对配种母猪分娩成绩的影响

3 讨论

本试验中冷冻精液组窝总产仔数为（9.08±1.87）头，窝产活仔数为（8.04±2.04）头，窝产死胎数为（1.04±0.60）头，分娩率为78.46%，与陈辉[2]、瞿文学等[3]研究结果基本相一致。和陈映等[4]、邓双义等[5]报道数据相比，本试验母猪分娩率要高于其试验中分娩率，但是窝总产仔数和窝产活仔数要低于其试验数据。导致母猪分娩率、窝总产仔数和窝产活仔数不相同与冷冻精液来源不同、冷冻精液解冻程序不同、每头份稀释好精液中精子含量不一致以及猪的品种等有关之外，还有猪场内的配种管理方面的原因。比如发情鉴定，参与试情人员要认真负责，在公猪配合下，鉴定出发情明显、稳定的母猪，不能采取强迫配种和过早或过晚配种。与常温精液不同，冷冻精液配置好镜检合格后，应该迅速输入发情母猪子宫内，因为解冻稀释20 min后精子活率开始迅速降低[6]，所以最好解冻稀释后在20 min内使用完。用冷冻精液配置好的精液必须现用现配，不能存放。在配种方式上最好选用子宫深部输精，可以减少精子穿过子宫颈口的损失，加速精子到子宫获能的时间，缩短精子与卵子结合的距离。通过孙志峰等[7]研究表明，采用冷冻精液深部输精技术可以有效提高母猪的生产性能。

近几年来，随着国内外猪精液冷冻技术发展和深部输精技术的推广，大幅推动了养猪企业猪冷冻精液的广泛应用。冷冻精液的优点是不受时间和地理位置差异的限制，可以促进猪场优秀种猪遗传资源通过冷冻精液方式保留下来，并可以各场之间相互交流，有利于育种企业和科研单位进行猪遗传资源联合育种，进一步打破养猪育种行业“引种→维持→退化→再引种”怪圈[8]。由于非洲猪瘟的传播使养猪行业把生物安全放在猪场生产管理的首位，猪场引种工作成了较大的难题。冷冻精液需要在-196 ℃的液氮中保存，部分病毒性传染病的病毒无法在超低温环境下生存[9]，通过建立疾病净化猪场、SPF公猪站，制定冷冻精液检测机制，可以杜绝在引入猪优质遗传资源的同时也引进潜在的生物安全危险。

4 结论

本次试验结果表明与常温精液相比，采用冷冻精液方式配种没有提高母猪繁育标准，但是根据本试验和众多关于冷冻精液试验报道可知，冷冻精液技术达到或接近大多数猪场生产常温精液配种繁育水平，猪冷冻精液技术显著进步，可以在种猪场和繁育机构进行推广。通过冷冻精液方式使北京市SPF猪育种管理中心母猪分娩了410头仔猪，采血检测鉴定无特定病原体，经过初步选育，102头保育仔猪进入待选后备群，为猪场成功引入新的血统。