蒙药肉蔻-5味丸对抑郁模型大鼠氨基酸类神经递质的影响

白龙棠 呼日乐巴跟 乌 兰* 宏 梅 乌日汗

1.内蒙古医科大学附属医院，内蒙古 呼和浩特 010050；2.内蒙古医科大学，内蒙古 呼和浩特 010110

抑郁症(depression)是以持续的兴趣减退、情感低落为核心症状的精神类疾病之一。抑郁症病程缓慢，发作至少持续2周，病程迁延，反复发作，致残率高[1]。据统计首发患者85%左右会在未来10年内反复发作，终身患病率约为20%，约15%～25%患者最终转变为难治性抑郁症。因其悲观厌世，严重者有自杀观念和行为，有10%～15%的抑郁症患者最终死于自杀[2]。随着经济文化的快速发展和竞争压力的急剧增加，抑郁症的患病率呈逐年上升。据世界卫生组织统计，预计到2030年抑郁症可能成为严重威胁人类健康的第二大疾患，增加社会经济负担的第一大疾病。抑郁症不仅影响着患者的日常生活，且对家庭和社会带来巨大的经济损失[3]。因此研究其发病机制、有效预防和积极治疗已成为广大科研工作者和医护人员面临的重大课题。

现代医学认为抑郁症发病机制复杂，为多种因素导致综合性疾病。目前临床上常用的抗抑郁西药虽然有一定的临床疗效，但也有不良反应多、疗效欠佳和耐药等局限性[4]。近年来越来越多的研究显示，氨基酸类神经递质如谷氨酸(glutamate, Glu)与γ-氨基丁(gammaaminobutyric acid，GABA)等在抑郁、焦虑、失眠等精神类疾病发病机制及治疗中的作用[5]，越来越引起人们的关注。

蒙医学对抑郁症有独特的认识，多年的临床实践表明用蒙药治疗抑郁症疗效显著。根据对抑郁症发病诱因、临床症状和病情转归的认识，抑郁症是蒙医赫依、巴达干偏旺导致三根平衡失调，影响心、白脉、脑而引起的一系列症状。在蒙医学抑郁症归属于“心思病”范畴的疾病[6]。蒙医治疗抑郁症以调节三根，镇心脏赫依，宁心、安神为原则。蒙药肉蔻-5味丸是具有镇赫依、宁心、安神等作用的临床常用的复方制剂[7]。研究表明，肉蔻-5味丸对CUMS大鼠5-HT、DA、EA等含量具有一定调节作用[8]。但尚无研究肉蔻-5味丸对氨基酸类神经递质的影响。

本研究为进一步了解氨基酸类神经递质在抑郁症中的作用和探索肉蔻-5味丸治疗抑郁症的作用机制，观察其抑郁模型大鼠海马/血清中Glu、GABA的影响，现报告如下。

1 仪器与材料

1.1 动物 SD雄性健康大鼠60只，体重180±20 g。购于北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号：SCXK(京)：2016-0002。

1.2 材料 肉蔻-5味丸(批号：M13010062，内蒙古自治区国际蒙医医院制剂中心)，氟西丁(国药准字：J20160029，礼来制药有限公司)，谷氨酸ELASA试剂盒(批号：20911202，南京建成)、γ-氨基丁酸ELASA试剂盒(批号：L91292625，南京建成)，水合氯醛(批号：RH127070、上海罗恩)；

1.3 仪器 自制敞箱实验设备：制作正方形立柱箱一个，长×宽×高为80 cm×80 cm×80 cm，底面为一个正方形，有9个小方格组成，箱体四壁均为黑色。EPOCH型酶标仪(BioTeK厂家)；BCD-186型超低温冰箱；TGL-16C型台式离心机；AJC-0501-P纯水仪；TL-420D水浴锅；PL-203型号电子天秤。

2 方法

2.1 动物分组 将60只SD大鼠适应性喂养1周后参考体重及糖水消耗量随机分为6组，分别为正常组，模型组，氟西丁对照组，肉蔻-5味丸高、中、低剂量组，每组为10只。

2.2 给药方法与剂量 造模第1天开始对各组大鼠灌胃给药，除正常组和模型组给予等体积的蒸馏水外，肉蔻-5味丸高、中、低剂量组分别给予肉蔻-5味丸1.6 g/kg、0.8 g/kg、0.4 g/kg，对照组给予氟西汀3.6 mg/kg。按1.0 mL/100 g体积灌胃，连续28 d，每日同一时间给药。

2.3 造模 由慢性轻度不可预知温和刺激(CUMS)配合孤养法复制抑郁动物模型。除了正常组外，其余组大鼠均单笼孤养，并给予连续28 d的不同刺激(包括：24 h禁食水、黑白颠倒12 h、4 ℃冰水游泳4 min、40 ℃高温环境6 min、平行摇摆、夹尾1 min、潮湿垫料、倾斜鼠笼45°等)；每天随机刺激1次，同样刺激不连续使用，每种刺激28 d内不超过使用3次。

2.4 评价模型复制

2.4.1 体重变化 各组大鼠实验前、实验14 d和28 d同一个时间点测量每个大鼠体重。抑郁模型大鼠食欲减退，体重增长缓慢。因此，根据体重增长快慢来评价抑郁模型成功与否的标准。

2.4.2 1%蔗糖水消耗量 各组大鼠实验前、实验14 d和28 d，禁水24 h后，每只大鼠给予1%蔗糖水100 mL，计算大鼠1 h内饮用蔗糖消耗量。糖水消耗量多说明大鼠快感好，该实验检测大鼠快感反应。

2.4.3 Open-field自主活动 采用自制箱体,规格为80 cm(长)×80 cm(宽)×80 cm(高)，箱内壁为黑色，底面划分为大小相等的16个等边方格，记录大鼠在3 min内水平和垂直活动得分(以大鼠前两只腿穿越敞箱底面格数为水平活动评分，以前两只腿直立次数为垂直活动评分)。水平活动得分反应大鼠自主活动能力，垂直活动得分反应大鼠好奇及探索能力。

2.5 标本制备与检测 连续28 d刺激,同时药物干预，第29天实验结束后，用10%水合氯醛麻醉大鼠(剂量为0.3 mL/100 g), 取腹主动脉血后，3000 r/min速度离心后取血清快速冷冻。采用ELISA技术，按照试剂盒说明测试海马组织/血清中Glu和GABA含量。

3 结果

3.1 体重变化的比较 与正常组比较，模型组大鼠体重增长在第2、4周时较慢(P<0．05，P<0.01);与模型组比较，西药组和蒙药肉豆蔻-5味丸中、高剂量组大鼠体重增长较快(P<0.05，P<0．01)，低剂量组的体重增长较慢，差异无统计学意义(P>0．05)。见表1。

表1 各组大鼠体重增长情况

3.2 1%蔗糖水消耗量变化情况比较 与正常组比较，模型组大鼠1%蔗糖水消耗量在第2、4周时较少(P<0.05，P<0.01);与模型组比较，西药组和蒙药肉豆蔻-5味丸中、高剂量组大鼠1%蔗糖水消耗量显著多(P<0.05)。见表2。

表2 各组大鼠1%蔗糖水消耗量变化

3.3 Open-Field自主活动情况比较 与正常组比较，模型组大鼠水平运动和垂直运动得分较低(P<0.01)；与模型组比较，西药组和蒙药肉豆蔻-5味丸中剂量组水平运动得分较高(P<0.01)，肉豆蔻-5味丸高剂量组水平和垂直运动得分较高(P<0．05)。见表3。

表3 各组大鼠刺激结束后Open-Field行为的影响 (次,

3.4 肉蔻-5味丸对大鼠Glu、GABA含量的影响 与正常组比较，模型组大鼠海马/血清里Glu含量较高(P<0.01)，GABA含量较低(P<0.05);与模型组比较，蒙药肉豆蔻-5味丸中、高剂量组大鼠海马和血清里Glu含量较低(P<0.01)，GABA含量较高(P<0.05)，肉豆蔻-5味丸低剂量组无显著差异(P>0.05)。见表4。

表4 肉蔻-5味丸对各组大鼠Glu及GABA含量的影响

4 讨论

抑郁症是一种情感障碍性疾病，其发病与遗传、社会环境因素、心理、生物化学等众多因素有关。社会环境和心理因素可能是诱发抑郁症的主要原因之一。根据其发病诱因，现在已有很多种抑郁动物模型应用于研究抑郁症的生物学机制。其中慢性轻度不可预知温和刺激(CUMS)高度模拟人类抑郁症的诱发因素。CUMS是抑郁症的发病机制和抗抑郁作用机理研究中最广泛实用的动物模型之一[9]。实验采用CUMS配合孤养造模，观察体重变化、1%蔗糖水消耗量和Open-Field敞箱实验垂直及平行得分情况分别反应抑郁模型动物体重减轻，快感缺乏和自主活动及探索能力等行为学方法评价CUMS大鼠模型成功与否。结果显示，应激刺激前，各组间大鼠体重、糖水消耗量、Open-Field敞箱自主活动均无显著性差异。应激刺激后，与正常组比较，模型组体重增长缓慢，糖水消耗量、敞箱实验水平活动格数和垂直活动次数均明显减少，说明抑郁模型复制成功。与模型组比较，应激刺激后，氟西汀组和肉蔻-5味丸组，体重增长明显，糖水消耗量、Open-Field敞箱自主活动均有所改善，说明肉蔻-5味丸具有抗抑郁作用，与以往的研究结果一致。

随着抑郁症发病机制研究的不断深入，发现其不仅与遗传、社会心理因素有关，并且与大脑神经生物化学密切相关。根据其发病的神经生物化学基础，提出了很多科学假说，其中“单胺类神经递质”是在抑郁症的发病机制中最早提出的且相对主导地位的科学假说[10]。临床上常用的抗抑郁药物大部分都基于该假说而研发的，这些药物仅对50%～60%的患者有效。其次，服用这些药虽然体内单胺类神经递质含量立即上升，但其抗抑郁作用有临床滞后现象[11]，说明抑郁症的发病机制不仅与单胺类神经递质水平有关，可能其他类神经递质也参与了抑郁症发病机制。文献[12]报道，越来越多研究证明，氨基酸类神经递质如谷氨酸(Glu)、γ-氨基丁酸(GABA)也参与到抑郁症的发病机理中，氨基酸类神经递质Glu是中枢神经系统中广泛存在的，人体内最主要的兴奋性神经递质，对维持神经元的兴奋与正常活动具有重要意义，其功能为参与感觉传递、运动控制、高级皮层功能等过程。GABA属于抑制性神经递质，其合成主要来自于Glu代谢，谷氨酸脱羧酶是GABA的重要生物合成酶。GABA具有抗焦虑、调节内分泌作用[13]。研究[14]显示，抑郁症患者血和脑组织内兴奋性神经递质Glu含量与正常对照组比较明显升高，而抑制性神经递质GABA含量下降。Glu的上升水平及GABA 的下降水平与抑郁程度呈正相关，且经药物治疗干预后、Glu水平下降，GABA含量增加[15 ]。说明抑郁症发作与Glu和GABA等氨基酸类神经递质有关。实验结果显示：与正常组比较，抑郁症模型大鼠海马及血清中Glu含量比正常组明显高，GABA含量比正常组显著降低，这结果符合以往的研究结果，说明氨基酸类神经递质异常可能是抑郁症发病机制之一。与模型组比较，肉蔻-5味丸高、中剂量组海马/血清Glu含量降低，肉蔻-5味丸高剂量组海马/血清GABA含量增多(P<0.05)。说明：肉蔻-5味丸中、高剂量具有明显的降低Glu含量，不同程度提高GABA含量作用。肉蔻-5味丸调节抑郁模型大鼠氨基酸类神经递质含量可能是其抗抑郁作用机理之一。与模型组比较，西药氟西丁组Glu和GABA含量无显著性差异(P>0.05)。氟西汀抗抑郁作用可能与氨基酸类神经递质无关。