基于HS-SPME-GC-MS快速分析毛橘红和光橘红挥发性成分

周伟明，刘浩，郑海

广东食品药品职业学院(广东 广州 510520)

化橘红CitriGrandisExocarpium即化州橘红，是芸香科植物化州柚Citrusgrandis‘Tomentosa’的或柚Citrusgrandis(L.)Osbeck的未成熟或近成熟的干燥外层果皮[1]。前者习称“毛橘红”，后者习称“光七爪”“光五爪”[2]或“光橘红”。其主要种植于丘陵地带，主产于广东、广西、四川、湖南、湖北、浙江等地，具有散寒、利气、消痰的功能[3]。在《新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第七版)》中，化橘红被列入新冠肺炎诊疗组方用药[4]。2016年4月，化橘红入选广东岭南中药材第一批立法保护品种，被评为为“中国四大南药”和“十大广药”之一[5]。目前药典把“毛橘红”和“光橘红”均称为化橘红，毛橘红属于道地药材，光橘红不是道地药材，所以现有关于化橘红的研究主要集中在毛橘红[6-8]，而对光橘红的研究较少。化州柚和柚不属于同一种植物，其挥发性成分可能存在差异。

顶空固相微萃取(HS-SPME)[9-10]可以避免复杂繁琐的提取过程，GC-MS[11]可快速准确的检测目标物(毛橘红和光橘红)的挥发性成分，为化橘红的研究利用提供实验依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

GCMS-QP2010 Ultra气相-质谱仪；手动固相微萃取装置、萃取纤维头50/30μm DVB/CAR/PDMS、10mL顶空瓶；A11基本型分析研磨机。

1.2 试药

毛橘红和光橘红购自化州市正源堂化橘红实业有限公司，为芸香科植物化州柚Citrusgrandis‘Tomentosa’的和柚Citrusgrandis(L.)Osbeck的未成熟干果；切成片再粉碎，过80目筛，备用。

2 方法与结果

2.1 样品制备

将两种0.5g粉末状样品装于顶空瓶中，密封，80℃，平衡30min，将萃取纤维头(50/30μm DVB/CAR/PDMS)插入瓶中，萃取30min，取出立即插入GC-MS进样口中，解吸附，分离，鉴定。

2.2 GC-MS实验条件

石英毛细管柱(Rxi-5Sil MS，30m，0.25mm，0.25μm)；99.999%高纯度氦气作为流动相；流速为1.0mL/min；进样方式为不分流，进样时间设为1min；进样口温度和接口温度均为250℃；程序升温：50℃保持1min，3℃/min升到150℃保持1min，5℃/min升到200℃，保持0min，10℃/min升到250℃保持5min，总程序时间55.33min。溶剂延迟时间为2min，电离源：EI；离子源温度：220℃；扫描范围：m/z 35～500，质谱记录时间：2.5～55.0min。

2.3 数据分析

使用NIST.17标准谱库检索得到的质谱数据，结合标准质谱图和相关文献报道鉴别相应的化学成分。

2.4 样品的测定

取样品，按2.1项下方法进行固相微萃取，按2.2项下GC-MS条件进样测定，记录图谱(图1)。并采用峰面积归一化法进行分析，得出各化学成分在挥发性组分中的相对质量分数，结果见表1。

图1 总离子流图(1为毛橘红，2为光橘红)

表1 挥发性成分

续表1

3 讨论与结论

本实验通过HS-SPME-GC-MS对两种化橘红的挥发性成分进行快速鉴别。光橘红鉴定出52种挥发性成分(表1)，占总挥发性成分的87.15%。其中含量较高(5%以上)的是D-柠檬烯(10.28%)、β-石竹烯(8.47%)、大牛儿烯D(6.11%)、β-杜松烯(5.62%)。毛橘红鉴定出55种挥发性成分(表1)，占总挥发性成分的90.15%。其中含量较高(5%)的是反式-橙花叔醇(10.61%)、大牛儿烯D(9.34%)、γ-摩勒烯(6.42%)、β-杜松烯(5.73%)。图1和表1的结果提示两种化橘红的挥发性物质大体相似，但两者属于不同的植物果实，挥发性物质还是存在差异，相较于光橘红，毛橘红有异大香叶烯-D、4(15),5,10(14)-大根香叶三烯-1-醇等10种挥发性物质独有的，光橘红也有D-樟脑、芳樟醇等7种挥发性物质是独有的。

采用HS-SPME-GC-MS技术可以避免繁杂的提取过程，快速准确分析两种化橘红的挥发性成分，为化橘红的研究提供实验依据。