24%盐酸吗啉胍·甲噻诱胺悬浮剂高效液相色谱分析

许艳秋，王广成，吴春先，陈丙坤，高立明

（四川省农药检定所，成都 610041）

盐酸吗啉呱又名病毒灵，化学名为N-(2-胍基-乙亚胺基)-吗啉盐酸盐，是一种在医药和农药领域常用的抗病毒制剂，通过抑制或破坏DNA和RNA聚合酶阻止病毒的复制，从而达到防治病毒的效果[1]，其在农业生产中可防治番茄病毒病、烟草病毒病等[1-2]。甲噻诱胺化学名称为N-(5-甲基-1，3-噻唑-2-基)-4-甲基-1，2，3-噻二唑-5-甲酰胺，是由南开大学创制，利尔化学股份有限公司开发的植物诱导抗病激活剂，通过诱导植物产生系统、广谱的抗病活性，主要用于细菌、真菌及植物病毒等引起的多种植物病害的防治[3-4]。

目前，盐酸吗啉胍单剂和甲噻诱胺原药的检测方法已有相关文献报道[5-6]，但2种药剂混配的分析方法尚未见报道。本文采用高效液相色谱方法对盐酸吗啉胍·甲噻诱胺悬浮剂进行同时测定，在选定的色谱条件下，2种有效成分与杂质可以完全分离。此方法简便、快速、准确，能同时测定2种有效成分的含量，是一种较为理想的分析方法。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

Agilent 1260高效液相色谱仪（二极管阵列检测器），美国安捷伦科技有限公司；symmetryshieldTMC18色谱柱（5 μm，4.6 mm×250 mm）、盐酸吗啉胍标准品（纯度≥99.0%），国家农药质检中心（北京）；甲噻诱胺标准品（纯度≥99.0%），广安利尔化学有限公司；24%盐酸吗啉胍·甲噻诱胺悬浮剂，广安利尔化学有限公司；甲醇（色谱纯），飞世尔科技公司；乙酸（分析纯），四川西陇化工有限公司。

1.2 液相色谱分析条件

流动相：甲醇-0.3%乙酸溶液（55∶45，V/V）；流速：1.0 mL/min；柱温：30℃；检测波长：253 nm；进样体积：3.0 μL。

1.3 溶液配制

标准溶液的配制。准确称取盐酸吗啉胍标准品0.06 g、甲噻诱胺标准品0.03 g（精确至0.000 2 g），用甲醇溶解并定容于50 mL容量瓶中，经0.5 μm有机滤膜过滤，备用。

样品溶液的配制。准确称取24%盐酸吗啉胍·甲噻诱胺悬浮剂样品0.35 g（精确至0.000 2 g），用甲醇溶解并定容于50 mL容量瓶中，超声10 min，经0.45 μm有机滤膜过滤，备用。

1.4 有效成分测定

仪器于“1.2”所述条件下稳定，待基线稳定后，连续进标准品溶液数针至相邻峰面积变化小于1.5%，按照标准品、样品、样品、标准品的顺序进样测定。

1.5 计算

按式（1）进行计算样品中的有效成分盐酸吗啉胍和甲噻诱胺的质量分数w。

式中：A1为标样溶液中盐酸吗啉胍（甲噻诱胺）峰面积的平均值，mAU·min；A2为试样溶液中盐酸吗啉胍（甲噻诱胺）峰面积的平均值，mAU·min；m1、m2分别为盐酸吗啉胍（甲噻诱胺）标样、试样质量，g；P为标样中盐酸吗啉胍（甲噻诱胺）的质量分数，%。

2 结果与分析

2.1 检测波长的确定

采用二极管陈列检测器（DAD），对盐酸吗啉胍、甲噻诱胺标准品在200～400 nm波长下进行扫描，其紫外吸收图如图1所示。由图1可知，盐酸吗啉胍的最大吸收波长为237 nm，甲噻诱胺的主吸收波长分别在265 nm和345 nm。因盐酸吗啉呱与甲噻诱胺的紫外曲线交叉点为253 nm，且在此波长条件下2种物质均有较好的吸收，无杂质干扰，故选择253 nm为该方法的检测波长。

图1 盐酸吗啉胍和甲噻诱胺紫外扫描图

2.2 流动相的选择

甲噻诱胺在甲醇中的溶解度较好，优先选择甲醇为流动相。盐酸吗啉胍为盐酸盐化合物，采用甲醇-水为流动相时，出峰不对称，峰形严重拖尾，当采用乙酸溶液为流动相，峰形对称。因此，本文最终选择的流动相为甲醇-0.3%乙酸溶液（55∶45，V/V）。此条件下盐酸吗啉胍与甲噻诱胺分离效果好，峰形对称尖锐，保留时间适中（图2、图3）。

图2 盐酸吗啉胍和甲噻诱胺标准品液相色谱图

图3 盐酸吗啉胍和甲噻诱胺样品液相色谱图

2.3 分析方法的线性关系

配制不同浓度的盐酸吗啉胍标准品溶液，浓度分别为0.678 5、1.030 6、1.180 7、1.366 9、2.017 6 mg/mL。每个浓度溶液按1.2节所述的色谱分析条件分别测定3次，取其平均值。以质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。盐酸吗啉胍线性回归方程为y=3 869.4x＋473.95，R2=0.998 7。

配制不同浓度的甲噻诱胺标准溶液，浓度分别为0.341 3、0.518 4、0.687 8、1.014 9 mg/mL。根据同样方法测定3次，取其平均值。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。甲噻诱胺线性回归方程为y=3 603.3x-7.762 7，R2=9.998 9。

2.4 分析方法的精密度

在1.2色谱检测条件下，取24%盐酸吗啉胍·甲噻诱胺SC样品进行8次平行测定（表1）。盐酸吗啉胍质量分数平均值为16.34%，标准偏差（RSD）为0.046 73%，变异系数（CV）为0.29%；甲噻诱胺质量分数平均值为8.43%，RSD值为0.035 23%，CV值为0.42%。

表1 盐酸吗啉胍和甲噻诱胺精密度检测（n=8）

2.5 分析方法的准确度

称取24%盐酸吗啉胍·甲噻诱胺悬浮剂样品5份，分别加入不同量的盐酸吗啉胍（甲噻诱胺）标准品，按照上述方法进行回收率测定，测定结果见表2。结果表明，盐酸吗啉胍平均回收率为100.28%；甲噻诱胺平均收回率为100.11%。

表2 盐酸吗啉胍和甲噻诱胺添加回收检测结果（n=5）

3 结 论

本文建立了能够同时对24%盐酸吗啉胍·甲噻诱胺悬浮剂中的有效成分盐酸吗啉胍和甲噻诱胺进行检测的高效液相色谱分析方法，并对此方法进行合理的方法验证。结果表明，盐酸吗啉胍和甲噻诱胺有效成分的分离效果较好，精密度较高，检测方法重现性良好，高效，易操作，因此该方法可用于24%盐酸吗啉胍·甲噻诱胺悬浮剂产品的有效成分的定量分析。