阴道菌群对不同级别宫颈上皮内瘤变的影响

吴雪燕 张梅 王星星 焦薇△

(1.贵州中医药大学第一附属医院，贵州 贵阳 550001，2.贵州医科大学附属医院，贵州 贵阳 550004)

宫颈上皮内瘤变(CIN)是与宫颈癌(CC)密切相关的一组病变。目前国际公认高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)的持续感染是CIN或CC发生的必要条件[1-2]。从HPV感染到发展为CIN及癌变大概需要5～10年，目前认为阴道微环境在宫颈HPV感染、宫颈上皮内瘤变的发生、发展存在过程中发挥作用[3-4]。本文主要探讨阴道菌群的改变与不同级别宫颈上皮内瘤变发生、发展的关系。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2018年7月至2020年1月就诊于贵州医科大学妇科门诊的高危型HPV感染患者，以阴道镜下活检病理结果为依据分为三组，其中正常组25例，年龄24～55岁，平均(35.88±8.20)岁，低级别宫颈上皮内瘤变组11例，年龄21～42岁，平均(33.18±6.66)岁，高级别宫颈上皮内瘤变组29例，年龄28～50岁，平均(39.17±6.09)岁。纳入患者均为年龄18～55岁的已婚女性，月经周期规律，1个月内无阴道用药史、全身使用使用抗生素史；1周内无阴道不规则流血史；3 d内无性生活史。已排除妊娠期、哺乳期、月经期、绝经期妇女；阴道炎患者；有宫颈病变治疗史妇女；宫内节育器置入术后患者；长期使用皮质类固醇激素、免疫抑制剂妇女；糖尿病、心、肝、肾等内科疾病患者。各组一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法 标本采集前告知研究对象本实验研究方案及意义，获其同意后，采集阴道分泌物，30 min内保存至-80℃冰箱中。通过16S rDNA测序技术进行细菌DNA的提取、扩增、测序：采用提取试剂盒 QIAamp DNA Mini Kit对阴道分泌物进行细菌基因组DNA提取。继而进行PCR扩增：试剂盒中提供P1、P3、P5、P6 四对扩增引物，按照P1+P5、P3+P6引物对组合配置PCR反应体系。最后参照Illumina Miseq 默认流程进行上机操作、参数设置步骤，完成每个样本测定20万对以上序列的数据。

1.3观察指标 阴道菌群多样性是指某一菌群中所有细菌种类的多少，是评价阴道微环境的一个重要指标。优势菌群是指菌群中生物量或种群密集度最大的细菌，在很大程度上影响着整个菌群的功能且其对宿主的生理病理影响最大。对三组菌群多样性及优势菌群进行对比分析。

2 结 果

2.1菌群多样性分析 微生物群落结构是按照界、门、纲、目、科、属、种水平逐级分层，本实验共检出26种菌种，随着宫颈病变的发生发展，在菌种水平各组间阴道菌群多样性无统计学意义(P>0.05)。见表1。分别在菌属和菌门水平再次进行菌群多样性比较，均无统计学意义(P均>0.05)。

表1 不同组别阴道菌群多样性的比较

2.2优势菌群分析 本实验结果前三位阴道优势菌为惰性乳杆菌、卷曲乳杆菌、阿托波氏菌，惰性乳杆菌在三组中检出率高达46.15%(30/65)。各组优势菌群之间的差异无统计学意义(P均>0.05)。见表2。各优势菌群在每组中的构成比详见表1。

表2 不同组优势菌群在每组中的构成比的比较[n(%)]

3 讨 论

阴道微生物在HPV感染的持续或消退中起到重要作用[3,5-6]，但在宫颈上皮内瘤变的女性中阴道微环境作用的研究相对较少。我们分别在菌种水平、菌属水平以及菌门水平分析不同级别宫颈病变患者阴道菌群多样性之间的差异，结果均提示无统计学意义。C.J.Piyathilake等[7]通过研究发现随着宫颈病变分级升高，阴道菌群的多样性并无增加。通过本次研究我们发现随着宫颈病变严重程度的增加，以卷曲乳杆菌为优势菌群的占比明显减少，但差异无统计学意义。惰性乳杆菌在各组中的占比呈现逐渐升高的趋势，从我们的数据分析各组优势菌群之间的差异无统计学意义，这一结果与A.Mitra等[8]研究一致。我们推测高危型HPV感染患者，阴道菌群以惰性乳杆菌为主，且随着宫颈病变的发展，惰性乳杆菌的占比逐渐升高；尽管在样本量不大的情况下分析结果没有显著性差异，但我们考虑卷曲乳杆菌为主的阴道菌群的减少与疾病严重程度增加之间可能存在相关性。下一步需扩大样本量，进一步分析优势菌群与宫颈病变的关系。