胃癌组织中COX-2蛋白、UHRF1蛋白表达及其与胃癌患者临床病理特征的相关性分析

张凯 高建华 路志宇 谢元元

(榆林市第一医院，(1.普通外科二病区；(2.消化内科，陕西 榆林 719000)

研究[1]证实，环氧化酶2(COX-2)在肿瘤的发生、发展中具有重要作用，且在消化道大部分肿瘤中有过度表达。泛素样含PHD和环指域蛋白1(UHRF1)属于表观遗传学调节因子，主要与细胞生长有关，现有研究[2-3]发现其在喉癌、肺腺癌等肿瘤疾病的发生发展过程具有重要的作用。本文主要探讨胃癌组织中COX-2蛋白、UHRF1表达及其与胃癌患者临床病理特征的相关性。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2016年5月至2019年4月于我院普通外科就诊的124例胃癌患者作为研究对象。纳入患者符合胃癌相关诊断标准[4]，并经影像学及病理活检证实者；患者TNM分期：Ⅰ～Ⅳ期；凝血及造血功能正常；未合并其他肿瘤者；患者均经外科手术切除治疗，且术前均未行放化疗。已排除转移情况或胃癌分期存在分歧者；既往胃部手术史者；临床资料不完整，伴有严重脏器功能不全、精神性疾病、认知功能以及交流障碍等的患者；出现肝肾肺等远处转移，无法耐受手术切除治疗者；胸膜粘连、肺脓肿等导致邻近脏器转移者；手术未能顺利完成或术中切除脾脏者。纳入患者中，男95例，女29例；年龄(59.14±6.79)岁；肿瘤≤5 cm 86例，肿瘤>5 cm 38例；局部浸润深度T1+242例，T3+482例；高分化5例，中分化39例，低分化80例；伴淋巴结转移63例，无淋巴结转移61例；临床病理分期：Ⅰ～Ⅱ期70例，Ⅲ～Ⅳ期54例；病变部位：胃体癌28例，胃食管交界癌96例。患者均对本研究知情同意，并经我院医学伦理研究协会同意。

1.2方法 患者均经外科手术切除治疗，并于手术中留取距肿瘤边缘>1 cm处的胃癌组织以及距肿瘤边缘5 cm处的癌旁组织，常规脱水，石蜡包埋，连续切片(厚度4 μm)。COX-2蛋白及UHRF1蛋白的表达水平均采用免疫组织化学法(SP法)进行检测，主要试剂包括鼠抗人UHRF1的多克隆抗体及免疫组化染色试剂盒(英国Abcam公司)，鼠抗人COX-2单克隆抗体及免疫组化染色试剂盒(美国Cay-man公司)，DAB显色试剂盒、SP免疫组化试剂盒、磷酸缓冲盐溶液(PBS)均由武汉博士德生物工程有限公司提供。实验步骤参照试剂盒说明书进行，以试剂公司提供的阳性照片作阳性对照。

1.3结果判定 采用双盲法进行判定，依据每个点的阳性染色细胞构成比和染色强度进行评分和判读。COX-2的判定：无色0分，浅黄色1分，棕黄色2分，棕褐色3分；阳性细胞<5% 0分，阳性细胞构成比为5%～25% 1分，阳性细胞构成比为26%～50% 2分，阳性细胞构成比为51%～75% 3分，阳性细胞构成比为>75% 4分。根据染色强度分值与阳性细胞百分比分值的乘积判定，阴性(-)：0～1分，弱阳性(+)：2～3分，中等阳性(++)：4～6分，强阳性(+++)：6分以上。UHRF1的判定：无色0分，浅黄色1分，浅黄色和棕黄色之间2分，深黄色3分，阳性染色细胞构成比为0为0分，阳性细胞构成比为0%～25% 1分，阳性细胞构成比为25%～50% 2分，阳性细胞构成比为50%～75% 3分，阳性细胞构成比为>75% 4分。根据染色强度分值与阳性细胞百分比分值的乘积判定，阴性(-)：0分，弱阳性(+)：1～4分，中等阳性(++)：5～8分，强阳性(+++)：9～12分。

1.4统计学方法 采用SPSS21.0软件对数据进行分析，计数资料使用频数表示，行χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1COX-2蛋白及UHRF1蛋白 胃癌组织中COX-2蛋白表达阳性率为66.94%，高于癌旁组织的22.58%(χ2=54.669，P<0.05)；HRF1蛋白表达阳性率为65.32%，高于癌旁组织的48.39%(χ2=27.811，P<0.05)。见表1。

表1 COX-2蛋白及UHRF1蛋白在胃癌组织及癌旁组织中的比较[n(%)，N=124]

2.2相关性分析 COX-2蛋白表达与局部浸润程度、是否淋巴结转移、临床分期有关(χ2=8.231、14.09、11.622，P均<0.05)；UHRF1蛋白表达与肿瘤大小、局部浸润程度、是否淋巴结转移、临床分期有关(χ2=11.201、8.788、16.66，P均<0.05)。见表2。

表2 COX-2蛋白表达与胃癌患者临床病理特征的相关性分析

3 讨 论

研究[5]显示，胃癌在我国的恶性肿瘤发病率中位列第一位，以腺癌较为多见。现阶段胃癌的诊断主要借助于胃十二指肠镜检查及病理学检查，但大部分胃癌患者就诊时已处于进展期，分析与胃癌患者相关的生物学标志物对其早期诊断、控制胃癌进展及探讨治疗靶点均有重要意义。COX是花生四烯酸转化为前列腺素(PG)过程中的限速酶，也是炎症发展过程中的一个重要的诱导酶。COX-2属于COX中与肿瘤细胞增殖、侵袭、转移及预后密切相关的同工酶，受COX-2基因的控制，存在于核膜和微粒体膜，研究[6]指出其具有促进肿瘤增殖、肿瘤血管新生等作用，还可以通过诱导肿瘤细胞的侵袭、抑制细胞凋亡等多种途径参与肿瘤的发生和发展。研究[7]显示，胃癌组织中COX-2阳性表达率显著高于癌旁组织，可明显促进胃癌组织中肿瘤血管新生；本研究得到了与之相似的结果，胃癌组织中COX-2蛋白表达阳性率高于癌旁组织，且卡方分析显示，COX-2蛋白表达与局部浸润程度、是否淋巴结转移、临床分期有关，进一步说明COX-2蛋白的阳性表达与胃癌细胞的生物学行为、淋巴结转移等密切相关。

UHRF1属UHRF超家族成员之一，含有多个功能结构域，是新发现的一种与细胞生长相关的核蛋白基因，可参与机体维持子细胞的DNA甲基化状态、调控细胞生长及维持基因组稳定、调节淋巴细胞的发育和功能等多种生理及代谢过程，在增殖旺盛的正常组织具有较高表达。UHRF1现已成为某些肿瘤早期诊断和预后评价的重要指标之一，既往研究[8]显示其在多种肿瘤组织中呈过表达状态，还能通过调控抑癌基因失活、细胞周期、凋亡等多种过程来影响肿瘤的发生发展。本研究结果显示，胃癌组织中UHRF1蛋白表达阳性率高于癌旁组织，且卡方分析显示，UHRF1蛋白表达与局部浸润程度、是否淋巴结转移、临床分期有关，提示UHRF1 在胃癌组织中过表达，且其表达与胃癌发生、发展密切相关。研究[9-10]指出，UHRF1可通过其SRA 结构域结合半甲基化的DNA，并趋化DNA甲基转移酶到DNA复制的分叉处，催化新合成的DNA链发生甲基化，进而调控基因表达。UHRF1可通过增加p16 INK4A 、hMLH1、p21和RB等肿瘤抑癌基因甲基化，从而抑制其表达，最终促进肿瘤的发生发展有关。此外，UHRF1还能调节淋巴细胞的发育和功能，调控细胞生长等，加之UHRF1在维持基因组的稳定性以及细胞中的DNA甲基化方面具有重要作用，一旦机体受到外力侵害或刺激破坏这种维持作用，将触发多基因的随机表达，破坏细胞内的稳态，使得细胞凋亡或者细胞周期阻滞，促进肿瘤的发生发展。

综上所述，胃癌组织中COX-2蛋白及UHRF1蛋白呈过表达状态，且与胃癌肿瘤大小、局部浸润程度、是否淋巴结转移、临床分期有关。