昆布颗粒提取及制备工艺研究

张怡评 ，施丽君，胡贤陈，张红红，杨 婷，方 华 ，洪 专 ，邱远望*

（1. 自然资源部第三海洋研究所 海洋生物资源开发利用工程技术创新中心，福建 厦门 361005；2. 福建中益制药有限公司，福建 泉州 362712）

昆布（Laminariae Thallus）为海带科植物海带（Laminaria japonicaAresch.）或翅藻科植物昆布（Ecklonia kuromeOkam.）的干燥叶状体，具有软坚散结、利水消肿等功效，始载于汉末的《名医别录》[1]。《嘉佑本草》记载昆布能“去瘦行水，下气化痰”，临床常用于防治瘿瘤、瘰疬、痞块等症，应用前景广阔[2-3]。现代药理研究表明，昆布具有降血脂、降血糖、抗肿瘤等功效[4-5]。目前，已有关于昆布中活性成分的提取工艺见诸报道，大多以多糖、多酚的得率为指标进行试验设计，均采用分光光度法检测多糖或多酚类成分，专属性及准确性较差[6-8]。研究发现，昆布中岩藻黄质具有减肥、降血糖、降血脂、抗氧化等多种生物活性[9-13]。本研究以岩藻黄质得率为指标，建立昆布乙醇提取工艺，并进行配方颗粒制剂工艺研究，为昆布药材及相关制剂的开发提供参考。

1 仪器与材料

1.1 仪器

LC-1260高效液相色谱仪（美国安捷伦科技有限公司）；KQ500E超声波提取器（昆山市超声仪器有限公司）；纯水机（美国Millpore公司）；SQP电子天平（德国赛多利斯公司）。

1.2 试药

昆布购自福建远扬藻业有限公司，经福建中医药大学黄鸣清教授鉴定为海带科海带（Laminaria japonicaAresch.）；岩藻黄质（中国国家标准样品管理委员会，批号：GSB11-3291-2016）；乙醇（分析纯，西陇化学试剂有限公司）；甲醇（色谱纯，默克化工技术有限公司）；超纯水（Millpore纯水机组制备）。

2 方法与结果

2.1 溶液制备

2.1.1 对照品溶液制备 取岩藻黄质对照品10 mg，精密称定，置于10 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，即得1 mg/ml的对照品储备液。

2.1.2 颗粒供试品溶液制备 取昆布颗粒0.3 g，精密称定，置50 ml锥形瓶中，加95 %乙醇10 ml，超声处理10 min，滤过，滤液定容至10 ml，即得。

2.2 岩藻黄质检测

采用高效液相色谱法检测岩藻黄质含量。色谱条件：参考文献[14]方法，色谱柱：Thermo Hypersil ODS C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水（92:8）；检测波长为450 nm；进样量10 μl。理论板数按岩藻黄质峰计算应不低于5000。

2.3 昆布浸膏提取工艺研究

2.3.1 乙醇浓度的选择 精密称取海带5 g，共5份，固定液料比为10:1，分别加入60 %，70 %，80 %，90 %乙醇溶液及无水乙醇，超声提取10 min，过滤，检测[14]，考察不同浓度乙醇溶液对昆布中岩藻黄质提取率的影响，结果见图1。

图1 不同浓度乙醇溶液对提取率的影响

由图1可见，岩藻黄质的提取率随乙醇浓度的升高先升高再下降，当乙醇浓度为90 %时，岩藻黄质提取率最高，因此选择90 %乙醇为提取溶剂。

2.3.2 超声提取时间的选择 精密称取海带5 g，共5份，固定液料比为10:1，分别超声提取5，10，20，30，60 min，过滤，检测，考察不同超声提取时间对岩藻黄质提取率的影响，结果见图2。

图2 超声提取时间对提取率的影响

由图2可见，随超声提取时间的延长，岩藻黄质提取率先上升后下降。5～10 min内，随超声时间延长，岩藻黄质的提取率增大，约10 min时提取率达最大，但因岩藻黄质对光和热的稳定性较差，随超声时间的延长，部分岩藻黄质会被氧化降解，因此选择超声提取时间为10 min。

2.3.3 液料比的选择 精密称取海带5 g，共5份，分别加入6，8，10，12，14倍90 %乙醇超声提取10 min，过滤，检测，考察不同液料比对岩藻黄质提取率的影响，见图3。

图3 不同液料比对提取率的影响

由图3可见，随液料比增大，岩藻黄质提取率逐渐增大，当液料比增加至10以上，岩藻黄提取率基本不再增加，因此选择液料比为10:1。

2.3.4 提取次数的选择 精密称取海带5 g，加入10倍量90 %乙醇溶液，超声提取10 min，过滤，检测，同法提取2，3次后分别检测，考察不同提取次数对岩藻黄质提取率的影响，结果见图4。

图4 提取次数对提取率的影响

由图4可得，第二、三次提取的岩藻黄质与第一次相比显著减少。因昆布属低值原料，其原料成本在提取过程的占比较小，因此考虑成本等问题，选择提取一次。

综上，确定昆布颗粒提取工艺为：以90 %乙醇为溶剂，液料比为10:1，超声提取10 min。

2.4 昆布干膏粉的制备

按2.3项确定的最佳提取工艺，对10 kg海带分次超声提取，合并提取液，浓缩至稠膏后于60 ℃下减压干燥至干，粉碎即得昆布干膏粉。

2.5 昆布颗粒制备

2.5.1 辅料筛选 醇提取后浸膏由于黏度较大，需使用较多稀释剂。对中药颗粒常用的两种稀释剂（微晶纤维素和糊精）进行筛选。将昆布干膏粉与糊精、微晶纤维素分别按1:9混合，选用90 %乙醇作为润湿剂，充分混合后，挤压过筛制粒，60 ℃干燥。以颗粒的成型率和溶化性为评价标准，对处方中辅料的种类及比例进行优化。结果发现，以微晶纤维素为辅料时，昆布颗粒的成型率较好，为90 %；以糊精为辅料时，昆布颗粒成型率较低，仅为75 %，但糊精为辅料时溶化性较好。综合分析，最终确定按昆布干膏:糊精:微晶纤维素=1:7:2的比例混合，成型率为85 %，且溶化性较好。

2.5.2 润湿剂浓度的选择 按处方比例分别称取昆布干膏粉和辅料各5份，混合均匀后，喷洒等量的不同浓度（60 %，70 %，80 %，90 %，100 %）乙醇水溶液（10:1），制粒，干燥后检测颗粒的成型率。结果发现，选用80 %乙醇时，颗粒成型率最高，可达89 %，故以80 %乙醇作为润湿剂。

对中药颗粒常用的两种辅料（微晶纤维素和糊精）进行筛选，最终确定的制备工艺为昆布干膏:糊精:微晶纤维素=1:7:2的比例混合后，按照10:1喷洒80%的乙醇作为润湿剂，制软材后通过筛网挤压在该工艺下制备的昆布颗粒成型率高，昆布颗粒的粒度、水分及溶化性等均符合要求。

2.6 昆布颗粒含量检测

取3批样品，按2.1.2项下方法制备供试品溶液，按2.2项色谱条件进样测定。结果表明3批样品中岩藻黄质平均含量为1.16 mg/g，RSD为1.84 %，表明昆布颗粒制备工艺稳定可行，见表1。

表1 3批昆布颗粒样品中岩藻黄质含量测定

3 讨论

岩藻黄质是昆布中特有的一种天然类胡萝卜素，具有多种生物活性，已成为近年的研究热点[2-5]。以昆布的活性单体成分岩藻黄质研制的制剂已有相关研究报道[15-16]，但以昆布提取物浸膏为原料制备配方颗粒未见报道。本研究以岩藻黄质为指标性成分建立昆布浸膏提取工艺，并以浸膏为原料，建立昆布颗粒的制备工艺并试制样品。在提取工艺研究中发现，干昆布表皮坚硬，溶剂难以浸入细胞，导致提取效率较低。本研究以泡水后的湿昆布为原料，采用90 %乙醇超声辅助提取10 min，具有提取时间短、得率高的特点，可最大程度地提取出岩藻黄质，避免加热提取对活性成分的破坏。本研究可为昆布药材及其制剂的创新应用提供参考。