滴眼液使用过程中的微生物检测分析

谢美娜，于丹丹，吴真祎

滴眼液是一种眼科最常使用的直接作用于眼表并发挥治疗效果的眼科制剂，其疗效及安全性一直受到公众及临床关注[1-4]。滴眼液若主药本身不具备较强抗菌活性，存在较高污染风险，需要添加适宜防腐剂，预防使用过程中的微生物污染，继而损害眼部健康。但长期应用含防腐剂的滴眼液也会对眼表造成一定程度的损伤，此外除了滴眼液本身成分外，滴眼液还会受到环境保存、操作者等因素的影响，出现微生物污染风险极高。因此，临床认为需要加强滴眼液微生物污染控制，确保眼病患者可以获得更好效果[5-6]。而实施微生物检测有利于筛查微生物感染的滴眼液患者，及时更换滴眼液，降低患者感染风险。但目前临床对滴眼液使用过程中的污染因素研究较多，而对于使用过程中的微生物检测研究报道相对较少[7-8]。本研究对滴眼液使用过程中的微生物检测进行研究分析，旨在为滴眼液合理使用期限提供参考数据。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2018年9月至2020年12月中国人民武装警察部队海警总队医院收治的应用滴眼液治疗的80例患者，将其使用的80 瓶滴眼液纳入研究，并根据滴眼液种类分为两组，A 组（左氧氟沙星滴眼液）42例，B组（玻璃酸钠滴眼液）38例。A 组男29例，女13例；年龄20 ～64岁，平均（42.4±5.7）岁；原发疾病：白内障32例，青光眼10例。B组男27例，女11例；年龄21 ～65岁，平均（42.4±5.2）岁；原发疾病：白内障30例，青光眼8例。两组一般资料差异无统计学意义（P ＞0.05）。

A 组使用左氧氟沙星滴眼液[参天制药（中国）有限公司，规格：5 ml，国药准字：J20150106]，1 滴/次，3 次/d。B 组使用玻璃酸钠滴眼液[生产厂家：参天制药（中国）有限公司，规格：5 ml，国药准字：H20173249]，1 滴/次，3 次/d。纳入标准：（1）滴眼液距离有效期时间均≥21 d；（2）每种滴眼液均为同一厂商且外包装完整；（3）患者签署治疗知情同意书。排除标准：（1）眼周原发性感染性病灶及影响滴眼液污染因素者；（2）长期服用免疫抑制剂及其他影响眼部菌群分布的药物。

1.2 方法 两组患者的滴眼时间和次数相同，完成之后盖紧瓶盖，使用后的滴眼液均常温放置在患者床头保存，患者用药3 ～7 d后出院带药回家继续用药。样本采集方法：参照《感染性眼病细菌学检查操作专家共识》进行相关操作。每组均在滴眼液开启后第1、7、21天，于每天下午3 点进行采样，均由经过培训的护士采样操作并记录，并且将标本送检。瓶口取样：采用棉签蘸取少量0.9%氯化钠注射液，对滴眼液瓶口全周进行轻轻擦拭，完成操作后将棉签放置于血平板中进行涂抹操作，并放置于恒温培养箱中（温度设置37 ℃）进行微生物培养。瓶内取样：采集1 滴滴眼液放置于培养皿中，应用定量环进行涂抹，并放置于恒温培养箱中（温度设置37 ℃）进行微生物培养。滴眼液质量要求：开启时瓶口及瓶内滴眼液微生物检测均为阴性。若呈现阳性者需要继续微生物菌种鉴定，并为患者提供新滴眼液，而新滴眼液不纳入本研究。

1.3 观察指标 对比两组治疗后各时间点瓶口污染及瓶内污染情况，鉴定微生物菌种情况。（1）瓶口污染及瓶内污染情况：记录治疗后第1、7、21天瓶口污染率及瓶内污染率。采集好的样本进行24 h培养（血平板内），并用肉眼观察，若出现颜色灰白且半透明或不透明，形状为凸起或扁平的菌落生长则呈阳性，记为污染；培养48 h 后仍未见任何细菌生长则呈阴性，记为无污染。统计瓶口污染及瓶内污染数及其占比。（2）污染微生物的种类：将瓶口及瓶内呈现阳性的滴眼液筛选出来，对其血平板上细菌进行微生物培养，对单个菌落进行分纯涂片及革兰染色操作，并根据染色结果，应用鉴定卡对菌种类型进行分辨、记录。

1.4 统计方法 采用SPSS23.0 统计软件进行分析，计量资料以均数±标准差表示，采用t检验；计数资料采用2检验（理想频数＜5 采用连续性校正2检验）。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组治疗后各时间点瓶口污染情况比较 两组治疗后第1天瓶口均无污染，A组治疗后第7、21天瓶口污染率均低于B 组（均P ＜0.05），见表1。

表1 两组治疗后各时间点瓶口污染情况比较 例（%）

2.2 两组治疗后各时间点瓶内污染情况比较 两组治疗后第1、7天瓶内均无污染，治疗后第21天B 组出现污染5例，A组瓶内无污染，A组瓶内污染率低于B 组（13.16%）（2=3.863，P ＜0.05）。

2.3 治疗后各时间点菌种分布情况 按照瓶口微生物菌种分布数量由高到低依次为金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性的葡萄球菌、毛霉菌、芽孢杆菌，瓶口污染微生物最常见均为金黄色葡萄球菌；瓶内主要为毛霉菌。且A 组金黄色葡萄球菌发生率低于B 组（P ＜0.05）。见表2 ～3。

表2 两组瓶口污染微生物菌种分布情况 例（%）

3 讨论

滴眼液包装主要为多剂量包装，开启后始终处于不封口状态，经空气与外界接触，出现瓶口或瓶内感染风险较高。一旦出现瓶内或瓶口微生物污染，将会增加眼病患者眼部感染或眼内感染的风险，继而损伤到眼部组织。而加强滴眼液使用过程中的微生物检测工作是保障患者治疗安全的关键，也是医院感染预防的重要管理环节[9-10]。

本研究结果显示治疗后第7、21天两组均出现瓶口污染，且A 组瓶口污染率均低于B 组（均P ＜0.05）。其原因在于瓶口可能与眼睑皮肤、睫毛、结膜、手部组织进行接触，继而增加瓶口污染风险[11]。笔者认为有必要加强医务人员及患者的感染意识，严格按照消毒隔离、手卫生及操作方法进行治疗，尤其是对于做好手部组织消毒工作，避免直接眼睑皮肤、睫毛、结膜触碰；同时加强对患者消毒隔离的安全意识，对其操作行为进行培训。B 组治疗后第21天出现污染，且A 组瓶内污染率低于B 组（P ＜0.05）。其原因在于瓶内感染主要与滴眼液成分、环境等因素有关。因此，临床需要定时开窗通风及空气消毒，尤其是在冬季病区内中央空调集中供暖时期，更需要定时通风及消毒。而不同滴眼液种类出现瓶口、瓶内污染风险存在一定差异，可能与左氧氟沙星滴眼液为抗菌素类滴眼液代表，0.3%玻璃酸钠滴眼液为非抗菌素类滴眼液代表，左氧氟沙星滴眼液具有抗菌作用，且抑菌功能较强，继而降低微生物污染风险。而瓶口污染风险更高可能与滴眼液包装瓶设计有关，能预防滴出滴眼液逆流进入瓶内[12-13]。因此，临床选择滴眼液品种时，在患者对用药耐受情况下，需尽量选择可预防逆流的包装瓶设计及具有较强抗菌作用的滴眼液。

表3 治疗后各时间点菌种分布情况 例（%）

按照瓶口微生物菌种分布数量由高到低依次为金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性的葡萄球菌、毛霉菌、芽孢杆菌，瓶口污染微生物最常见的均为金黄色葡萄球菌；瓶内主要为毛霉菌。且A 组金黄色葡萄球菌发生率低于B 组（P ＜0.05）。金黄色葡萄球菌属于革兰阳性菌代表，主要分布于人体皮肤、鼻腔、咽喉、空气等环境中，37 ℃环境下生长良好，有很强的感染能力，也是医院内交叉感染的重要传染源。毛霉菌属于腐生性真菌，主要分布于土壤、粪便或腐烂食物、环境中，在高温、高湿度或通风不良环境下更有利于生长；该类型检出率主要集中于冬季，可能与季节环境有着密切关联性，冬季室内通风不良且空气质量不佳，促进毛霉菌增长[14-15]。因此，要根据滴眼液常见微生物发生原因加强管理，包括定时开窗通风、定时消毒，保持室内温度适宜等；同时对于已感染患者可根据微生物菌种检测结果实施对症治疗。

综上所述，非抗菌素滴眼液瓶口更易发生污染，且随着使用时间的延长污染率升高。滴眼液使用过程中发生瓶口污染率较高，而瓶内污染率较低；且瓶口感染微生物主要为革兰阳性球菌，瓶内污染微生物主要为真菌。