捆仙七化学成分研究*

2022-08-01丁超吴莹黄欣悦孙玉张化为姜祎李玉泽宋小妹张东东

陕西中医药大学学报 2022年4期

丁超吴莹黄欣悦孙玉张化为姜祎李玉泽宋小妹张东东

(陕西中医药大学药学院，陕西咸阳 712046)

太白“七药”是秦巴山区中草药资源的一大特色，其资源丰富，疗效显著，得到广大临床医生和科研学者的关注[1]。捆仙七(Herbapachysandraeterminalis)为黄杨科板凳果属植物顶花板凳果(PachysandraterminalisSieb.et Zucc.)的干燥带根全草，广泛分布于我国西北、西南等地区。其味苦微辛，具有祛风除湿、清热解毒、通经止带的功效；主要治疗风湿性关节炎、胃痛、支气管炎等病症[2]。其主要含有生物碱、甾醇、三萜类、酚类等化学成分[3]；现代药理学研究表明，其具有抗氧化、抗溃疡[4-6]、抗肿瘤[7-12]、抗菌[13-14]、杀虫[15-16]等生物活性。作为太白“七药”的重要品种，捆仙七药效物质基础尚不明确，系统性化学成分研究相对较少。本实验针对捆仙七80%乙醇[17]提取物的二氯甲烷萃取部位进行系统分离纯化，通过理化性质和波谱数据共鉴定了9个化合物，分别为4β-methyl-3-methylenepentane-1,2,5-triol(1)、4α-methy-3-methylenepentane-1,2,5-triol(2)、magnolioside(3)、香草醛(4)、3,4-二羟基苯甲酸(5)、apocynin(6)、(E)-methyl 12-hydroxyoctadec-10E-enoate(7)、(E)-11-hydroxy-octadeca-12-enoic acid(8)以及棕榈酸(9)。其中化合物3、6～9为首次从板凳果属中分离得到。

1 仪器与试药

1.1仪器 Burker AVANCE 400型核磁共振波谱仪(瑞士Burker公司)；WFH-203三用紫外分析仪(上海精科实业有限公司)；OB204电子分析天平(瑞士METTLER TOLEDO公司)；EYELAN-1100旋转蒸发仪、KQ-500DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；Sephadex LH-20(美国GE公司)；岛津LC-6AD型半制备液相色谱仪(岛津紫外可见光检测器SPD-20A)；CAPCELL PAK C18MGⅡ半制备色谱柱,(10 mm×250 mm，5 μm)；柱色谱硅胶(100～200目)、薄层色谱用硅胶GF254(青岛海洋化工有限公司)。

1.2试药捆仙七药材于2019年采自陕西省宝鸡市眉县境内，经陕西中医药大学王薇教授鉴定为黄杨科板凳果属植物顶花板凳果PachysandraterminalisSieb.et Zucc.的带根全草；色谱甲醇(天津市科密欧化学试剂有限公司)；分析甲醇、丙酮、三氯甲烷、二氯甲烷(天津科密欧公司)；显色剂为20%硫酸乙醇溶液；娃哈哈纯净水。

2 提取与分离

取自然干燥的捆仙七药材50 kg，粉碎，80%乙醇回流提取3次，每次2 h，滤过，合并滤液，浓缩得浸膏，分别以石油醚、二氯甲烷、正丁醇萃取3次，得二氯甲烷部位(190 g)，正丁醇部位(1500 g)。二氯甲烷部位(190 g)经硅胶柱色谱(二氯甲烷-甲醇1∶0 ～ 0∶1)系统洗脱，得到F1～F13共13个组分。

F7(87.0 g)经硅胶柱色谱(二氯甲烷-甲醇80∶1～0∶1)梯度洗脱得到F7-1～F7-7，F7-2(3.3 g)经硅胶柱色谱(二氯甲烷-甲醇80∶1～0∶1)洗脱，析出无色针状结晶为化合物3(15.6 mg)，再经半制备液相(甲醇-水35∶65)纯化得化合物1(26.0 mg，tR=25.0 min)、化合物2(19.0 mg，tR=27.3 min)；F-3(2.9 g)经Sephadex LH-20凝胶柱(二氯甲烷-甲醇1∶1)洗脱，再经半制备液相(甲醇-水32∶68)纯化得化合物4(20.3 mg，tR=35.5 min)、化合物5(21.5 mg，tR=38.0 min)；F7-4(3.1 g)经Sephadex LH-20凝胶柱(二氯甲烷-甲醇1∶1)洗脱得化合物6(14.0 mg)；7-5(2.4 g)经硅胶柱色谱(二氯甲烷-甲醇80∶1 ～0∶1)洗脱，再经半制备液相(甲醇-水30∶70)纯化得化合物7(22 mg，tR=25.0 min)；F7-6经硅胶柱色谱(二氯甲烷-甲醇80∶1)洗脱得化合物8(16.2 mg)，再经半制备液相(甲醇-水25∶75)纯化得化合物9(14.1 mg，tR=45.0 min)。化合物1～9的化学结构见图1。

图1 化合物1～9结构图

3 结构鉴定

化合物1：为淡黄色油状物，易溶于甲醇，1H-NMR (400 MHz，CD3OD)δ:1.03 (3H，d，J=7.0 Hz，7-CH3)，2.37 (1H，dd，J=7.0，14.0 Hz，4-H)，3.63 (2H，m，1-H)，3.50 (2H，m，5-H)，4.21 (1H，m，2-H)，5.08 (1H，s，6a-H)，5.23 (1H，s，6b-H);13C-NMR (100 MHz，CD3OD)δ:17.5 (C-7)，37.8 (C-4)，65.5 (C-5)，68.1 (C-1)，74.7 (C-2)，112.5 (C-6)，151.5 (C-3)。以上数据与文献[18]报道基本一致，因此鉴定化合物为4β-methyl-3-methylenepentane-1,2,5-triol。

化合物2：为淡黄色油状物，易溶于甲醇，1H-NMR (400 MHz，CD3OD)δ:1.07 (3H，d，J=7.0 Hz，7-CH3)，2.43 (1H，dd，J=7.0，12.7 Hz，4-H)，3.56 (2H，m，5-H)，3.69 (2H，m，1H)，4.21 (1H，m，2-H)，5.09 (1H，s，6a-H)，5.28 (1H，s，6b-H);13C-NMR (100 MHz，CD3OD)δ:17.2 (C-7)，38.5 (C-4)，65.6 (C-5)，67.9 (C-1)，75.0 (C-2)，111.7 (C-6)，151.6(C-3)。以上数据与文献[18]报道基本一致，因此鉴定化合物为4α-methy-3-methylenepentane-1,2,5-triol。

化合物3：为白色粉末，易溶于甲醇，1H-NMR (400 MHz，CD3OD)δ:7.66 (1H，d，J=9.5 Hz，4-H)，7.55 (1H，s，8-H)，7.08 (1H，s，5-H)，6.34 (1H，d，J=9.5 Hz，3-H)，5.80 (1H，d，J=7.1 Hz，1′-H)，4.20～4.83 (6H，m，2′～6′-H)，3.74 (3H，s，OCH3);13C-NMR (100 MHz，CD3OD)δ:161.55 (C-2)，113.40 (C-3)，144.00 (C-4)，110.32 (C-5)，150.20 (C-6)，147.49 (C-7)，104.65 (C-8)，114.55 (C-9)，151.77 (C-10)，102.31 (C-1′)，75.13 (C-2′)，79.63 (C-3′)，71.60 (C-4′)，79.01 (C-5′)，62.74 (C-6′)，56.84 (OCH3)。以上数据与文献[19]报道基本一致，因此鉴定化合物为magnolioside。

化合物4：为白色粉末，易溶于甲醇，1H-NMR (400 MHz，CD3OD)δ:3.91 (3H，s，OCH3)，7.40 (1H，d，J=2.0 Hz，2-H)，6.92 (1H，d，J=8.0 Hz，5-H)，7.43 (1H，dd，J=8.0，2.0 Hz，6-H)，9.74 (1H，s，CHO);13C-NMR (100 MHz，CD3OD)δ:129.2 (C-1)，109.9 (C-2)，148.3 (C-3)，153.4 (C-4)，114.9 (C-5)，126.6 (C-6)，191.5 (C-7)，54.9 (OCH3)。以上数据与文献[20]报道基本一致，因此鉴定化合物为香草醛。

化合物5：白色粉末，易溶于甲醇。1H-NMR (400 MHz，DMSO-d6)δ:7.32 (1H，d，J=2.2 Hz，H-2)，6.76 (1H，d，J=8.2 Hz，H-5)，7.27 (1H，dd，J=2.2，8.2 Hz，H-6)；13C-NMR (100 MHz，DMSO-d6)δ:167.7 (C-1′)，150.5 (C-4)，145.2 (C-3)，122.3 (C-1)，121.7 (C-6)，116.5 (C-5)，115.4 (C-2)。以上数据与文献[21]报道基本一致，因此鉴定化合物为3,4-二羟基苯甲酸。

化合物6：为无色针状结晶，易溶于甲醇，1H-NMR (400 MHz，CD3OD)δ:3.83 (3H，s，OCH3)，2.50 (3H，s，COCH3)，6.86 (1H，d，J=8.2 Hz，5-H)，7.44 (1H，d，J=2.0 Hz，2-H)，7.50 (1H，dd，J=8.2，2.0 Hz，6-H);13C-NMR (100 MHz，CD3OD)δ:129.2 (C-1)，111.7 (C-2)，147.9 (C-3)，152.3 (C-4)，115.4 (C-5)，124.0 (C-6)，196.5 (C-7)，26.3 (C-8)，56.1 (OCH3)。以上数据与文献[22]报道基本一致，因此鉴定化合物为apocynin。

化合物7：为无色油状物，易溶于甲醇，1H-NMR (400 MHz，CD3OD)δ:0.87 (3H，t，J=7.1 Hz，CH3-18)，1.25-1.40 (18H，m，H-3～8、15～17)，1.42-1.70 (4H，m，H-2、14)，2.00 (2H，m，H-13)，2.32 (2H，m，H-9)，3.69 (3H，s，OCH3)，4.05 (1H，m，H-12)，5.45 (1H，ddd，J=15.5，7.0，1.3 Hz，H-10)，5.64 (1H，dt，J=15.5，7.0 Hz，H-11);13C-NMR (100 MHz，CD3OD)δ:174.4 (C-1)，34.1 (C-2)，24.9 (C-3)，29.0 (C-4)，29.1 (C-5)，29.1 (C-6)，29.2 (C-7)，29.2 (C-8)，31.8 (C-9)，133.0 (C-10)，132.1 (C-11)，73.2 (C-12)，37.3 (C-13)，31.1 (C-14)，29.2 (C-15)，25.5 (C-16)，22.6 (C-17)，14.1 (C-18)，51.4 (OCH3)。以上数据与文献[23]报道基本一致，因此鉴定化合物为(E)-methyl 12-hydroxyoctadec-10E-enoate。

化合物8：为无色油状物，易溶于甲醇，1H-NMR (400 MHz，CD3OD)δ:0.88 (3H，t，J=6.4 Hz，H-18)，1.20-1.40 (20H，m，H-4～10、15～17)，1.50 (2H，m，H-3)，1.95 (2H，m，H-14)，2.21 (2H，m，H-2)，3.85 (1H，m，H-11)，5.51 (1H，m，H-13)，5.35 (1H，m，H-12);13C-NMR (100 MHz，CD3OD)δ:174,1 (C-1)，33.4 (C-2)，24.4 (C-3)，28.7 (C-4)，29.1 (C-5)，28.8 (C-6)，28.9 (C-7)，28.3 (C-8)，25.0 (C-9)，37.5 (C-10)，71.0 (C-11)，129.1 (C-12)，134.6 (C-13)，31.6 (C-14)，28.9 (C-15)，31.1 (C-16)，22.2 (C-17)，13.9 (C-18)。以上数据与文献[24]报道基本一致，因此鉴定化合物为(E)-11-hydroxy-octadeca-12-enoic acid。

化合物9：为白色粉末，易溶于甲醇，1H-NMR (400 MHz，CD3OD)δ:0.92 (3H，t，J=6.9 Hz，H-16)，2.23 (2H，m，H-2)，1.57 (2H，m，H-3)，1.31-1.40 (24H，m，H-4～15);13C-NMR (100 MHz，CD3OD)δ:178.0 (C-1)，35.4 (C-2)，26.1 (C-3)，29.3 (C-4，13)，29.4 (C-5，12)，29.7 (C-6～11)，32.8 (C-14)，23.2 (C-15)，14.6 (C-16)。以上数据与文献[25]报道基本一致，因此鉴定化合物为棕榈酸。