跨膜丝氨酸蛋白酶2-成红细胞特异性转化基因相关基因、成红细胞特异性转化基因变异体1及成红细胞特异性转化基因变异体4在前列腺癌中的表达及临床意义

陈俊泳，韩耕宇，褚 靖，邓 健，谢 群

(广东省珠海市人民医院，暨南大学附属珠海医院，广东 珠海 519000)

前列腺癌是男性发病率最高恶性疾，多好发于老年人群[1]。目前有关前列腺癌的发病机制尚未十分明确，有学者指出，人类恶性肿瘤与基因融合存在密切联系，参与了肿瘤发生、发展，通过观察基因融合情况，观察基因融合情况对治疗方法选择、预后评估具有重要意义[2]。前列腺癌中基因融合涉及了跨膜丝氨酸蛋白酶2(transmembrane serine protease 2，TMPRSS2)基因及成红细胞特异性转化基因相关基因(ERG)、成红细胞特异性转化基因变异体4(ETV4)、成红细胞特异性转化基因变异体1(ETV1)等，多数前列腺癌患者常伴有上述基因融合改变，而在前列腺良性组织中并不会出现上述改变[3，4]。本研究通过检测前列腺癌患者中各因子表达情况，探讨三者与前列腺癌的关系及其临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料2018年4月至2020年9月我院收治的82例前列腺癌患者，纳入标准：①均经临床确诊；②年龄>18岁，且无意识、沟通障碍；③无放疗、化疗等治疗史；④资料齐全。排除标准：①自身免疫系统先天性异常；②存在急性前列腺炎、尿潴留等；③非典型性腺瘤样增生者；④精神病、痴呆、孕妇等特殊人群。82例患者年龄52～85岁[(71.65±9.36)岁]；病理类型：腺癌69例，鳞癌13例；Gleason 分级评分标准：2～4分17例，5～7分42例，8～10分23例；Jewett-WhitmoreProut临床分期：A+B期34例，C+D期48例。

1.2 方法收集82例患者术后癌组织及距瘤体5 cm以上的正常组织。常规脱水、固定、包埋，5 μm连续厚切片。用于免疫组化检测TMPRSS2-ETV1、TMPRSS2-ERG、TMPRSS2-ETV4表达。试剂：兔抗人TMPRSS2-ERG(浓缩型，稀释度为1∶200)、TMPRSS2-ETV1(浓缩型，稀释度为1∶200)、TMPRSS2-ETV4(浓缩型，稀释度为1∶200)、多克隆抗体，均由美国 Epitomics公司提供。SP免疫组化、DAB试剂盒均由美国 Epitomics公司提供。并采用S-P免疫组化染色法检测TMPRSS2-ETV1、TMPRSS2-ERG、TMPRSS2-ETV4。一抗阴性对照使用PBS进行代替。

1.3 结果判定采用双盲法对结果进行判定，即根据阳性细胞在全部组织细胞中占比及阳性细胞染色强度判定[5]：①按显色细胞数计分，无阳性细胞数为0分；1分阳性细胞<10%，2分10%～50%；3分50%～75%；4分>75%。②着色程度：0分为无色，淡黄色、棕黄色、黄褐色分别记1、2、3分。每张切片取5个高倍视野。两类分数相乘总分<3分为阴性。比较不同组织TMPRSS2-ERG、ETV1、ETV4表达。分析各因子与临床特征之间的关系及对前列腺癌的诊断价值。

1.4 统计学方法采用SPSS 22.0统计软件分析数据。计量资料以均数±标准差描述，组间比较采用t检验；计数资料以n(%)表示，比较行χ2检验；诊断价值分析采用ROC曲线。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同组织中各因子表达比较前列腺癌组织中TMPRSS2-ERG、ETV1、ETV4阳性表达率均显著高于癌旁正常组织(P<0.05)。见表1。

表1 不同组织中各因子表达比较 [n(%)]

2.2 不同临床特征前列腺癌患者各因子阳性表达率比较临床分期C+D期、Gleason评分≥5分患者的各因子阳性表达率均显著高于临床分期A+B期、Gleason评分<5分(P<0.05)。见表2。

表2 不同临床特征前列腺癌患者各因子阳性表达率比较 [n(%)]

※与A+B期比较，P<0.05；○与<5分比较，P<0.05

2.3 各因子检测对诊断前列腺癌的价值TMPRSS2-ERG、ETV1、ETV4联合检测曲线下面积(AUC)、敏感度、特异度分别为0.814、0.925、0.865，均高于各项指标单独检测(P<0.05)。见表3及图1。

表3 各因子检测对诊断前列腺癌的价值

图1 各因子对诊断前列腺癌的ROC曲线分析

3 讨论

染色体结构改变是正常细胞进展为癌细胞的重要分子生物学事件，其中染色体易位导致基因融合可能是部分肿瘤发生的重要原因。TMPRSS2-ETS基因融合具有多样性，TMPRSS2与ETS家族成员如ERG、ETV1、ETV4等均可发生基因重排，其中以TMPRSS2-ERG发生最为常见[6，7]。

ETS转录因子家族成员可表达于人体各脏器、组织，且同时参与了多个生物学过程，如细胞分化、调节、增殖等[8，9]。国内外相关报道显示，ETS在乳腺癌、前列腺癌等多种恶性肿瘤的血管生成、转移、浸润中具有调控作用[10，11]。周文浩等则指出ERG、ETV1、ETV4基因与TMPRSS2基因融合生成新的融合基因频繁出现在前列腺癌中，在疾病进展中发挥重要作用[12，13]。本研究报道结果与上述研究基本相符，认为可能是融合基因TMPRSS2调节了前列腺癌组织中ERG、ETV1、ETV4的表达，且ERG、ETV1、ETV4易受雄激素的影响；其融合基因的存在同样亦影响雄激素的调节机制[14～16]。大部分的前列腺癌标本中可见出现基因重排，从而促进EST家族表达。但Todorova等[17]发现，在前列腺癌患者中，TMPRSS2-ETV1、ETV4阳性表达率不超过10%，与本研究报道不符，可能与纳入样本量、患者自身差异等因素有关。

国外部分研究指出，TMPRSS2-ERG、ETV1、ETV4的过度表达与ERG、ETV1、ETV4的高表达具有较高的一致性[18，19]。TMPRSS2-ERG、ETV1、ETV4过表达与前列腺癌的侵袭性具有一定关系，且与分化程度、肿瘤分期等亦相关。Carsten等[20]通过检测Gleason评分为7分的前列腺癌中TMPRSS2-ERG、ETV1、ETV4表达，发现含融合基因患者的5年生存率明显高于未含融合基因者。本研究中，随临床分期进展、Gleason评分增高，TMPRSS2-ERG、ETV1、ETV4阳性表达率亦逐渐增高，提示上述因子同样参与了前列腺癌的进展，增加了前列腺癌细胞的侵袭能力，促进肿瘤临床进展。进一步ROC曲线分析发现，三者均可有效诊断前列腺癌，但通过联合检测三者可一定程度提高诊断效能。

综上所述，前列腺癌患者中TMPRSS2-ERG、ETV1、ETV4表达异常，联合检测上述因子可为临床鉴别诊断前列腺癌提供参考。