不同检测方法对学龄前儿童支原体肺炎早期诊断价值比较

刘朔婕,逯晓辉,黄 宇

(厦门大学附属第一医院，福建 厦门 361003)

肺炎支原体是引起学龄前儿童呼吸道感染的常见病原体之一，可引发咽炎、鼻炎、气管炎、毛细支气管炎，尤其是抵抗力低下的婴幼儿，未及时治疗极易进展为支气管肺炎[1]。同时，由于患儿咳嗽剧烈，痰飞沫在空气的传播极易导致病菌的扩散传播，引发幼儿聚集区小范围的感染流行。因此，对疑似肺炎支原体感染的患儿尽早明确诊断并及时进行治疗尤为重要。本文将目前临床实验室采用的三种肺炎支原体诊断方法(胶体金法、明胶颗粒凝集试验(PA)、RT-PCR毛细电泳法)对学龄前儿童肺炎支原体肺炎早期诊断价值做比较研究。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2018年7月～2019年6月于厦门大学附属第一医院儿科初诊的患儿255例，年龄为2～6周岁，疑似肺炎支原体感染且咳嗽症状≤14 d，留取其咽拭子并抽取外周血样，EDTA-K2抗凝管1 mL、无抗凝剂普通管2 mL。

1.2 方法

将疑似患儿按照咳嗽天数分为≤7 d与>7～14 d两组。EDTA-K2抗凝血样采用珠海丽珠肺炎支原体IgM抗体(胶体金法)检测试剂盒检测IgM抗体，分离血清采用日本富士肺炎支原体抗体检测试剂盒(PA)检测IgM/IgG/IgA综合抗体效价。咽拭子样本采用宁波海尔施13种呼吸道病原体多重检测试剂盒(PCR毛细电泳片段分析法)检测肺炎支原体保守序列扩增产物表达。所有患儿依照指南，经影像学与血清学检查来确认是否为肺炎支原体肺炎[2]。

255例疑似肺炎支原体感染的患儿中，最终有196例确诊患支原体肺炎。其中，咳嗽天数≤7 d的患儿为77名(A组)，确诊为支原体肺炎的患儿为42名，咳嗽天数>7～14 d的患儿为178名(B组)，确诊为支原体肺炎的患儿为154名。所有疑似患儿的血样与咽拭子均进行胶体金法、明胶颗粒凝集试验、RT-PCR毛细电泳法三种方法进行检测。

1.3 统计学方法

采用SPSS 21.0软件统计分析数据。以临床诊断为准，分析胶体金法、PA、RT-PCR毛细电泳法诊断支原体肺炎的灵敏度和特异度。采用McNemar检验分析三种方法之间灵敏度、特异度的差异，采用秩和检验分析每一种方法在不同组别的灵敏度、特异度的差异。

2 结果

对于A组患儿，三种方法的特异度均无统计学差异(P>0.05)。见表1。对于B组患儿，三种方法在A、B两组中的特异度差异无统计学意义(P>0.05)。

表1 A组患儿的血样与咽拭子经三种方法检测结果 例

表2 B组患儿的血样与咽拭子经三种方法检测结果 例

3 讨论

目前，有肺炎的表现和/或影像学改变，结合肺炎支原体病原学检查即可诊断为儿童支原体肺炎。病原学实验室诊断分为分离培养、血清学诊断与核酸诊断三类主要手段，其中由于常规培养耗时较久，快速培养敏感性和特异性不佳，临床上主要采用血清学和核酸诊断。在本研究中，选用血清学诊断的金标法与PA，核酸诊断的RT-PCR法，分析在学龄前患者支原体肺炎早期诊断的能力。PA检测的是IgM、IgG和IgA的混合抗体，恢复期和急性期MP抗体滴度呈4倍或4倍以上增高或减低时，可确诊为MP感染。然而，针对初诊的早期感染患者，临床上更多采用单次MP抗体滴度≥1∶160作为诊断MP近期感染或急性感染的参考，以此为近期肺炎支原体感染有力的证据之一。胶体金法仅测定IgM抗体，当其阳性时即提示MP近期感染。感染初期，IgM抗体尚未产生或滴度很低的时候，胶体金法可为阴性，PA法的滴度不及1∶160的诊断界限，在本研究中发现，咳嗽不超过7 d的患儿，两种血清学方法的灵敏度都不高；而当疾病进一步进展，在咳嗽症状超过了7 d的患儿这一组中，两种血清学方法的灵敏度有了提高。胶体金方法和PA法在两组检测MP的灵敏度并明显差异，这与相关报道是一致的[3,4]。同时，胶体金法又兼具采样方便(仅需患儿的末梢全血)和快速报告(10 min即可判读结果)的优点，成为目前临床推广这一快测MP方法的有效依据。值得注意的是，IgM抗体虽然是一个早期感染的指标，但部分患儿的抗体水平能够维持较久，甚至在病愈后半年左右还未完全消失，将导致假阳性结果的出现，必须结合患儿的病史、症状、体征和影像学检查综合分析。

基于核酸技术的肺炎支原体检测方法一直被被认为具有快速、简便、敏感度高的特点。本文中的RT-PCR毛细电泳法检测MP感染的原理即为以其高度保守序列为靶区域设计的引物进行RT-PCR扩增。本文所选择的该方法并未呈现出与他人近似的高灵敏度的研究结果，不论是A组还是B组患儿，该方法的灵敏度都没有超过60%，均低于血清学方法。尽管肺炎症状明显，影像学支持，颗粒凝集试验的抗体效价高达1∶640以上的患者，仍有相当数量的病例检为阴性。分析原因可能有三：一是由于幼儿在取材过程中的依从性较差，咽拭子标本的采集是否标准有效地取到了含有病原体的分泌物，虽然痰液也可作为样本，但是患儿年龄过小，部分不会顺利咳痰并吐出，以上均为样本不合格的因素；二是有研究表明，咽拭子作为标本在RT-PCR中的检出率低于痰液、肺泡灌洗液及支气管灌洗液[1，3]；三是该检测试剂盒可同时测定13种呼吸道病原体，所有的13对引物均在一个体系中完成扩增，是否会造成干扰而影响阳性检出率。

综上所述，对于学龄前儿童支原体肺炎早期诊断，血清学方法较本实验中所选用的核酸法更具价值，胶体金法适于急诊快速检测，然而血清学方法也存在早期阳性检出率不高的问题，因此，在临床表现怀疑肺炎支原体感染的情况下，选用多种检测方法，并随诊动态观察，方可做到早诊断，早治疗，避免疾病迁延，发展至重症或引发流行感染。