佩兰挥发油治疗轮状病毒性仔猪腹泻的疗效观察研究

张福寿，王鹤鸣，王 利

(商丘职业技术学院，河南 商丘 476100)

仔猪轮状病毒性腹泻是由猪轮状病毒引起的仔猪感染[1]，是仔猪常见的一种传染病.感染仔猪常出现急性胃肠炎症状，主要表现为厌食、呕吐、腹泻、脱水等.仔猪发病后往往呈现出混合交叉感染的特点.该病对我国养猪业造成了极大的威胁与危害，引起了人们的高度重视.目前，关于仔猪轮状病毒性腹泻的治疗尚无特殊药物，主要采取对症治疗及疫苗预防方法[2].在预防和治疗时，疫苗的保护率不高，有时还有副作用，对症治疗往往不能有效控制仔猪腹泻.有关研究表明，佩兰有抗炎、抑菌作用，对轮状病毒性肠炎、腹泻有较好的治疗和保护作用[3].本文通过对仔猪进行人工感染猪轮状病毒，模拟猪轮状病毒仔猪腹泻，使用佩兰挥发油进行治疗试验，以期获得仔猪轮状病毒性腹泻的中医药治疗方案.

1 材料

1.1 中药佩兰

中药佩兰自安徽亳州中药市场采购，为地上茎杆，含部分叶.佩兰挥发油由商丘职业技术学院药物分析实训室制备.

1.2 试验动物

28日龄三元杂交断奶仔猪(杜洛克×长白×大约克夏)40头，已去势，购买于商丘市梁园区富有养猪场.

1.3 试验毒株

猪轮状病毒，由商丘职业技术学院微生物实训室提供.该病毒系从某猪场发生腹泻的猪群粪便中,用MA_104细胞培养分离而得.

1.4 试剂与耗材

乙醚、生理盐水、蒸馏水、硫酸钠、目筛、烧瓶、注射器、喂药器、解剖器材等.

1.5 仪器

高速中药粉碎机、分析天平、挥发油提取器、恒温鼓风干燥箱、恒温水浴锅、磁力搅拌器、电子天平等.

2 方法

2.1 佩兰挥发油的制备

选取自然干燥的佩兰植株并粉碎，过10目筛后，称取佩兰粉末100 g，采用水蒸气蒸馏提取法，经乙醚萃取，无水硫酸钠干燥后得到挥发油[4].

2.2 动物分组

将40 头仔猪，随机分为4个处理组，每组10 头仔猪.4个处理组分别为猪轮状病毒对照组、佩兰挥发油低剂量组、中剂量组、高剂量组.动物的分组处理情况，如表1所示.

表1 试验动物的分组与处理

将分组后的仔猪单笼饲养，按常规方法进行饲养管理.所有饲喂饲料均不添加任何抗生素，4日后(即32日龄时)向基础饲粮中添加佩兰挥发油.仔猪基础饲粮配方组成及营养水平，分别如表 2、表3所示.

表2 基础日粮组成

表3 基础日粮营养水平

据孙绍美[5]、赵静[6]等研究可知，佩兰干品、鲜品挥发油对小鼠具有抗炎及增强免疫力的作用，其最佳的剂量为0.5 mg / kg，同时，根据《动物间体表面积折算的等效剂量比值表》 中提供的转换方法，转换后猪的佩兰挥发油最佳剂量应为50 mg/kg.因此，特将实验中的佩兰挥发油剂量设定为高、中、低三个组，分别为100 mg/kg、50 mg/kg、25 mg/kg，以便更好地研究其对仔猪腹泻的影响效果.按照三个剂量标准将佩兰挥发油以拌料的形式添加到饲料中.对低剂量组、中剂量组和高剂量组仔猪连续饲喂含有相应剂量的佩兰挥发油.三周后，于仔猪53日龄时对病毒对照组和药物组的每头仔猪经口灌服1.0×106TCID50/mL的轮状病毒液4 mL，轮状病毒对照组继续饲喂不含佩兰挥发油的基础饲粮，低剂量组、中剂量组和高剂量组继续饲喂添加有相应剂量佩兰挥发油的基础饲粮.观察猪轮状病毒对照组仔猪，当出现连续腹泻情况时，则认为猪轮状病毒成功诱导仔猪腹泻.

2.3 腹泻评分标准与计算

仔猪灌服轮状病毒后，记录灌服后天数(Days post infection，dpi)及相应的腹泻情况，根据腹泻情况给出并记录评分.根据仔猪粪便的性状进行腹泻评分，评分及其依据如下：粪便正常为无腹泻表现，记为0分；粪便为面糊膏状为轻度腹泻表现，记为1分；粪便为半流体状为中度腹泻表现，记为2分；粪便为流水型为严重腹泻表现，记为3分[7].当评分≥2分时，判定仔猪发生了腹泻.仔猪腹泻情况用腹泻指数(Diarrhea Index，DI)来表示.计算方法如下：

2.4 数据分析

试验数据使用Excel 2016软件进行整理、SPSS22.0进行处理，结果使用“平均数±标准差”表示，组间比较使用t检验,p< 0.05 表示差异显著，p< 0.01 表示差异极显著.

3 结果与分析

3.1 仔猪轮状病毒腹泻模型的建立

在仔猪灌服轮状病毒后的第2天、第3天和第4天记录腹泻仔猪数，分别为7头 、9头和10头，这说明猪轮状病毒成功诱导了仔猪腹泻.仔猪轮状病毒感染后，除出现腹泻、呕吐症状外，还出现精神萎靡不振、厌食等症状，对其进行解剖还发现小肠呈点状出血等病理变化.

3.2 佩兰挥发油对猪轮状病毒感染仔猪腹泻的影响

仔猪攻毒后的腹泻情况，如表4所示.佩兰挥发油低剂量组在攻毒后第2天、第3天、第4天出现腹泻的仔猪数分别是3头、7头、7头，佩兰挥发油中剂量组在攻毒后第2天、第3天、第4天出现腹泻的仔猪数分别为3头、5头、3头，佩兰挥发油高剂量组在攻毒后第2天、第3天、第4天出现腹泻的仔猪数分别为1头、1头、1头.

表4 仔猪感染猪轮状病毒后的腹泻情况

仔猪攻毒后，从表5可以看出，佩兰挥发油低、中、高剂量组与病毒感染对照组相比均呈现出差异显著的情况，这说明佩兰挥发油对人工感染猪轮状病毒仔猪腹泻有较好的疗效.佩兰挥发油低、中、高剂量组组间相比也呈现出差异显著的情况，这说明随着佩兰挥发油剂量的增加，对仔猪轮状病毒腹泻的疗效呈现增强的趋势.佩兰挥发油低、中、高剂量组疗效组间相比，以高剂量组疗效最好.

表5 不同处理对仔猪腹泻指数的影响

使用佩兰挥发油对仔猪感染猪轮状病毒后的腹泻统计情况，如图1所示.图1中的折线表明，随着佩兰挥发油剂量的增加，仔猪腹泻情况明显减少.

图1 使用佩兰挥发油对仔猪感染猪轮状病毒后的腹泻统计情况

4 讨论

断奶仔猪由于缺少相应的抗体，感染轮状病毒后很容易导致腹泻的发生.王纯刚[8]、汤俊[9]等人利用轮状病毒培养液对仔猪进行口服攻毒，仔猪在攻毒后均成功诱导腹泻.本试验成功建立了仔猪轮状病毒腹泻模型，并在此基础上开展腹泻指数的研究.结果表明，佩兰挥发油对感染猪轮状病毒的仔猪腹泻起到了较好的保护作用，这与中药佩兰所具有的化湿和中、醒脾开胃的功效密切相关.中医经典里有“湿胜则濡泻”“泄泻之本，无不由脾胃”“脾胃失健运则泄泻随之”的论述，这说明腹泻与体内过湿及脾胃失调相关.所以，佩兰挥发油对感染猪轮状病毒的仔猪腹泻有着较好疗效，这正是佩兰化湿和中，醒脾开胃的具体应用.现代药理研究证实，佩兰还具有较明显的抗炎、抗病毒作用。佩兰能够对轮状病毒引起的肠道炎症起到有效的抑制作用.总之，佩兰挥发油对感染轮状病毒仔猪腹泻的治疗是从中医药的角度进行的探索，希望为感染轮状病毒的仔猪腹泻的治疗提供一些理论依据.