小陷胸汤对2型糖尿病痰热互结证大鼠的影响

刘冬恋，张 谦，谢 蕾，夏阳淼

(成都医学院药学院，四川 成都 610500)

中医认为糖尿病属于中医学“消渴”“脾瘅”范畴，患者多因过食肥甘厚腻、多食少动所致脾胃损伤，运化失司，积热内蕴，痰热互结，故中满内热为其基本病机[1]。目前，2型糖尿病(T2DM)大鼠模型均是借用西医造模方法，采用西医病因病理复制的动物模型，虽具有造模方法稳定，实验结果可靠、重复性好等优点，但这类造模方法是用西医的思路来探讨中医的理论，与中医传统病因不符，同时制作出来的动物模型不具有中医糖尿病的本质和特点[2-3]。因此，在T2DM大鼠模型基础上，动态观察大鼠的宏观表征和微观指标，综合形体、饮水、大小便、舌脉等进行证候判定，在此思路上构建的“痰热互结”中医证候属性的大鼠模型，具有客观性强、可信度高以及更贴近临床等特点。

小陷胸汤出自《伤寒论》辨太阳病脉证并治太阳病变证篇，是至今仍在中医临床被广泛使用的名方之一，方中瓜蒌清热涤痰、宽胸散结；黄连清泄“心下”之热；半夏涤痰化饮开结，三药合用，辛开苦降，则痰热各自分消，而无结滞之患，用于治疗T2DM前期对应的痰热互结证候[4]。本实验建立T2DM前期痰热互结证大鼠模型，经小陷胸汤的干预治疗，通过阳性表征检测和血糖、体质量、饮水量、尿量、体温等指标检测，初步评价小陷胸汤对T2DM痰热互结证大鼠的疗效，为小陷胸汤临床应用于T2DM的治疗提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料 SPF级雄性wistar大鼠55只，体质量200～250 g，由成都达硕实验动物有限公司提供，实验动物生产许可证号SCXK(川)2018-24。每只大鼠分笼饲养，饲养环境为室温(22±2)℃、相对湿度(55±5)%、12 h/12 h明暗交替。

黄连购自北京同仁堂(集团)有限公司，批号170801；法半夏和瓜蒌购自四川省中药饮片有限责任公司，批号170817、170902，3种药材经成都医学院药学院游元元教授鉴定为正品。盐酸二甲双胍片购自鞍山九天制药有限公司，批号201806；链脲佐菌素(STZ)购自美国Sigma公司，批号170325。其他化学试剂均为分析纯。

小陷胸汤由黄连25 g、法半夏12 g、瓜蒌25 g组成，浸泡1 h，煎煮2次，每次30 min，合并滤液后减压浓缩，得到质量浓度为6.5 g/kg的小陷胸汤[5-6]。

大鼠代谢笼，苏州冯氏实验动物设备有限公司；CP225D精密分析天平，德国Sartorious公司；安稳血糖仪、血糖试纸，长沙三诺生物传感股份有限公司。

1.2 方法

1.2.1 造模 参考文献[7]方法，所有大鼠适应性喂养1周后，随机分为正常组和造模组，正常组10只，给予普通饲料，造模组大鼠喂养45%热量比高脂饲料(20%蛋白质，35%碳水化合物，45%脂肪)。为限制大鼠的活动空间，造模组10只/笼。第8周末，造模组大鼠均一次性左下腹腹腔注射30 mg/kg链脲佐菌素(STZ)，注射后72 h剪尾采血测空腹血糖，以空腹血糖>11.1 mmol/L为造模成功。继续高脂饲料喂养，1周后(即第9周末)再测血糖，空腹血糖仍>11.1 mmol/L证明模型稳定，选入正式实验，开始给药。

1.2.2 分组 将造模成功的36只大鼠随机分为小陷胸汤组(6.5 g/kg)、二甲双胍组(100 mg/kg)、模型组，每组各12只，正常组及模型组按10 mL/kg灌胃给予生理盐水，其余组灌胃给予相应药物。每天灌胃给药1次，给药周期为4周。在给药期间，正常组喂养标准饲料，其余各组大鼠继续给予高脂饲料。

1.2.3 表征指标 参考潘秋[8]的表征采集表，见表1。观察并记录第13周各组大鼠表征的变化，统计各组大鼠异常变化的只数，以组内变化只数/组内总只数(n/N)表示。

表1 2型糖尿病大鼠表征采集表

1.2.4 口服葡萄糖耐量试验 在第9周末，即STZ注射后1周(给药前)和第13周末，即给药第4周末(第28天)，分别进行一次口服葡萄糖耐量(OGTT)试验，即大鼠空腹12 h后，灌胃给予50%葡萄糖溶液2 g/kg，剪尾采血，检测给糖前即0 h和给糖后0.5、1、2 h的血糖，计算糖耐量曲线下面积[9](AUC)，公式为AUC=(G0+G2)/2+G0.5+G1。

1.2.5 体质量、24 h饮水量、24 h尿量和体温检测 称定各组大鼠第1、3、5、7、9、10、11、12、13周的体质量，检测给药后(即10～13周)各组大鼠24 h饮水量、24 h尿量和体温的变化。

2 结果

2.1 各组大鼠第13周表征的变化 根据中华中医药学会糖尿病分会制订的《糖尿病中医诊疗标准》[10]中关于T2DM痰热互结型标准，主症为形体肥胖、腹部胀大、胸闷脘痞；次症为口干口渴、喜冷饮、饮水量多、心烦口苦、大便干结、小便色黄；舌脉表现为舌体胖大、舌质红、苔黄腻、脉弦滑。与正常组比较，模型组大鼠出现了肥胖，神情倦怠，皮毛枯黄，鼻、舌、爪暗红，耳、唇鲜红，大便干结等表征(P<0.01)，符合T2DM痰热互结证的外观表现；经小陷胸汤干预治疗后，大鼠的各项体征都有明显变化，与模型组比较，小陷胸汤组大鼠体质量降低，大鼠皮毛和爪的清洁程度增加，大鼠鼻和爪暗红的程度有改善(P<0.05)，见图1～2。

注：在横坐标中，1.1表示肥胖，1.2表示神情倦怠，2.1表示皮毛有光泽，2.2表示皮毛顺滑，3表示鼻湿润，4表示大便坚硬，5表示爪清洁，6表示尾部有结痂。与正常组比较，##P<0.01；与模型组比较，*P<0.05。图1 第13周各组大鼠表征比较

注：在横坐标中，1表示皮毛枯黄，2表示眼部淡白，3表示耳鲜红，4表示鼻暗红，5表示唇鲜红，6表示舌暗红，7表示爪暗红。与正常组比较，#P<0.05，##P<0.01；与模型组比较，*P<0.05。图2 第13周各组大鼠表征比较

2.2 各组大鼠第9、13周血糖和AUC值的比较 在第9周末，与正常组比较，其余各组大鼠各时间点的血糖值和AUC值均上升(P<0.01)；与模型组比较，小陷胸汤组和二甲双胍组大鼠各时间点的血糖值和AUC值差异均无统计学意义(P>0.05)。给药后，第13周末时，与模型组比较，小陷胸汤组大鼠0.5、1、2 h血糖值和AUC值下降(P<0.05)，见图3～4。

注：与正常组比较，##P<0.01；与模型组比较，*P<0.05。图3 各组大鼠血糖值比较

注：与正常组比较，##P<0.01；与模型组比较，*P<0.05。图4 各组大鼠第9周和第13周末AUC值比较

2.3 各组大鼠体质量的变化 在第1～7周，各组大鼠的体质量均呈缓慢增加的趋势。与正常组比较，在第5周时，模型组和二甲双胍组大鼠体质量增加(P<0.05)；在第7周时，模型组和小陷胸汤组大鼠体质量增加(P<0.05)，说明饲喂高脂饲料的方法能够增加大鼠的体质量。STZ腹腔注射造模后，即第9周时，与正常组比较，其余各组大鼠体质量增加缓慢。在给药后，即第10～13周，与正常组比较，模型组大鼠体质量在10～13周均有上升趋势(P<0.05，P<0.01)，此结果佐证了模型组大鼠“形体肥胖”的体征。与模型组比较，第11～13周，小陷胸汤组和二甲双胍组大鼠体质量均下降(P<0.01)，见图5。由此可知，小陷胸汤和二甲双胍均能降低T2DM大鼠体质量。

注：与正常组比较，#P<0.05，##P<0.01；与模型组比较，**P<0.01。图5 各组大鼠第1、3、5、7、9、10、11、12、13周体质量的比较

2.4 各组大鼠第10～13周24 h饮水量和24 h尿量的变化 与正常组比较，第11～13周模型组24 h饮水量增加(P<0.01)，第10～13周模型组大鼠24 h尿量均增加(P<0.01)；与模型组比较，小陷胸汤组大鼠第11～13周24 h饮水量和尿量均降低(P<0.05，P<0.01)，二甲双胍组大鼠第11、13周的24 h尿量降低(P<0.05)，而同时间点的24 h饮水量差异无统计学意义(P>0.05)，见图6。

注：与正常组比较，##P<0.01；与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。图6 各组大鼠第10～13周24 h饮水量和24 h尿量的比较

2.5 各组大鼠第10～13周体温的变化 第10～13周，与正常组比较，模型组大鼠体温均上升(P<0.01)；与模型组比较，小陷胸汤组大鼠第12～13周体温下降(P<0.01)，二甲双胍组大鼠第11～12周体温降低(P<0.01)，见图7。

注：与正常组比较，##P<0.01；与模型组比较，**P<0.01。图7 各组大鼠第10～13周体温的比较

2.6 各组大鼠第13周时AUC、体质量、24 h饮水量、24 h尿量和体温的相关性分析 第13周时，各组大鼠的AUC、体质量、24 h饮水量、24 h尿量和体温之间均相关(P<0.05,P<0.01)，见图8。

3 讨论

在临床上，T2DM的症候分型较多，如肾阴虚证、痰湿中阻证、痰热互结证、脾虚湿盛证等，其中以痰热互结、肝火允盛和脾虚湿盛的患者居多，痰热互结证患者分布的年龄段多在20～40岁[11]。痰热互结证患者在被辩证时认为其舌厚腐腻答，舌形胖大、齿痕均反映痰湿痰油，红舌、黄苔反映中满内热的病机[12]。本实验采用45%高脂饲料长时间喂养，限制活动空间叠加小剂量STZ的方式，根据临床症候判断标准作为大鼠症候属性的判断依据，多数模型组大鼠的表征出现舌象呈暗红色，与正常组的淡红色有明显差异，提示模型组大鼠出现痰热体征。同时，模型组大鼠出现肥胖，神情倦怠，皮毛枯黄，鼻、爪暗红，耳、唇鲜红，大便干结等表征，符合T2DM痰热互结证的外观表现。采用定量指标评价，从第5周开始，模型组大鼠的体质量持续增加，符合T2DM痰热互结证形体肥胖的主症表现；10～13周，模型组大鼠的24 h饮水量和24 h尿量均增加，体温升高，符合T2DM痰热互结证口干口渴和饮水量多的次症特点以及“热”的外在表现。因此，判断模型组大鼠符合T2DM痰热互结的症候属性。

小陷胸汤出自《伤寒论》，由黄连一两、半夏半升、瓜蒌一枚组成，三药合用则具有清热化痰、宽胸散结的功能，用于痰热互结之症[13]。在本实验中，经小陷胸汤干预治疗后，大鼠的各项体征都有明显变化，与模型组比较，小陷胸汤能较大程度改善暗红色舌象，降低大鼠的肥胖程度、鼻和爪暗红的程度，改善T2DM痰热互结模型大鼠的表征。在临床实践中，小陷胸汤能有效地降低患者血糖，明显改善患者的胰岛素抵抗指数，保护β细胞功能，同时纠正糖尿病前期痰湿蕴热偏颇的体质，治疗痰热互结型2型糖尿病[14-16]。本研究中，小陷胸汤能降低T2DM痰热互结模型大鼠的体质量和体温，减少24 h饮水量和24 h尿量。同时，小陷胸汤组大鼠0.5、1、2 h餐后血糖值和AUC值均较模型组下降，与临床报道一致。

综上所述，高脂饲料长程喂养+限制活动空间+小剂量STZ可以建立T2DM痰热互结症候的大鼠模型。小陷胸汤对T2DM痰热互结模型大鼠各种表征有不同程度的改善，同时对血糖、体质量、饮水量和尿量等T2DM典型指标有显著改善，从而达到逆转和阻止痰热互结证模型大鼠T2DM发展的作用。因此，小陷胸汤是一剂良好的T2DM痰热互结模型的反证方药，本研究也为中医辨证论治中“方证相关”提供了的实证依据。