毛细管血红蛋白电泳联合平均红细胞体积对育龄夫妇β-地中海贫血的筛查效果

何榕葵 潘少吟 黄燕娟

广东省清远市清新区妇幼保健院检验科，广东清远 511518

地中海贫血属于常染色体隐性遗传性疾病，它的 发生机制是由于缺乏珠蛋白基因，使得珠蛋白肽链合成受到影响，进而改变血红蛋白的正常构成，终而出现进行性溶血性贫血[1]。其中β-地中海贫血是常见的地贫类型之一。数据统计显示，β-地中海贫血在全球范围内的流行率达4.9%[2]。而我国广东省在内的南方是β-地中海贫血的高发区域[3]。β-地中海贫血主要出现于新生儿，会对其正常的生长发育造成严重的不良影响，还可能并发黄疸、腹水等并发症，严重的甚至造成溶血危象，威胁其生命健康[4]。因此对于育龄夫妇进行有效的孕前筛查，能及时帮助β-地中海贫血携带者进行确诊，预防β-地贫新生儿的出生，从而降低β-地中海贫血的发病率。基因检查是β-地中海贫血筛查的金标准，但是其检测的耗时长，且检测费用和成本较高，不适用于β-地中海贫血广泛性的初筛[5]。平均红细胞体积（mean corpuscular volume，MCV）是常用的血液相关疾病检测方法，但对地中海贫血筛查的特异度不高。毛细管血红蛋白电泳是一种专门针对血液病筛查的实验室检测方法，它能对血红蛋白（hemoglobin，Hb）的成分和结构进行分析，从而发现相关的血红蛋白病[6]。本研究将两者联合应用于育龄夫妇的孕前β-地中海贫血筛查，并与基因检测进行对照分析，以探讨毛细管血红蛋白电泳联合MCV 检测在育龄夫妇的孕前β-地中海贫血筛查中的临床效果。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2019年8月至2020年9月在清远市清新区妇幼保健院进行孕前β-地中海贫血筛查的1508 对育龄夫妇（3016 人）作为研究对象，其中男性、女性各1508 人；年龄20～45 岁，平均（27.8±1.2）岁。纳入标准：①清远市本地户籍；②年龄20～45岁；③有备孕意向；④知情同意，并自愿参与研究；⑤无生育史。排除标准：①随访资料不全；②凝血功能异常。本研究已经医院医学伦理委员会审核批准。

1.2 方法

1.2.1 样品采集 对所有受试者均采集其空腹静脉血样本2 ml，放置于抗凝管中。将抗凝管进行震荡，以充分混匀样本与抗凝剂。做好抗凝管的标识，并放置于2～8℃的环境下进行保存待检。

1.2.2 检测方法 取其静脉血样本应用全自动毛细管血红蛋白电泳仪和血液分析仪检测其Hb 含量分布情况和MCV，并应用多聚酶链反应/反向斑点杂交（polymerase chain reaction/reverse dot blot，PCR/RDB）技术进行β-地中海贫血的基因诊断。

①毛细管血红蛋白电泳仪检测。采用Capillarys 2型全自动血红蛋白毛细管电泳仪（Sebia 公司）及配套检测试剂盒，严格按照相关操作标准对采集的静脉血样本进行检测，分析其Hb 的组分，并进行进一步的Hb-A、Hb-F 以及Hb-A2 含量的定量分析。阳性的标准参照《β-地中海贫血的临床实践指南》[7]为Hb-A＜96.5%。②MCV 检测。采用BC-5500 的自动血液分析仪和配套的试剂进行MCV 检测。阳性的标准参照《地中海贫血妊娠期管理专家共识》[8]为MCV＜82 fl。③PCR/RDB 检测。PCR/RDB 检测上送深圳华大基因股份有限公司进行操作，对样本中基因组DNA 中的β-地中海贫血常见17 种点突变进行基因测定。

以上检测均由两名专业的检测人员按照盲法判读法对检测结果进行判断，存在异议的可交由上一级检验医师进行最终判断。

1.3 观察指标及评价标准

分析育龄夫妇样本中β-地中海贫血的基因检测结果和基因分型情况。并以PCR/RDB 的基因诊断结果为金标准，分析β-地中海贫血不同临床分型的Hb分布情况，计算毛细管血红蛋白电泳、MCV 检测单独及联合应用筛查育龄夫妇β-地中海贫血的诊断效能。灵敏度=真阳性例数/（真阳性+假阴性）例数×100%；特异度=真阴性例数/（假阳性+真阴性）×100%；准确度=（真阳性+真阴性）例数/总例数×100%。

1.4 统计学方法

采用SPSS 23.0 软件进行数据分析；对于符合正态分布的计量资料，用均数±标准差（±s）的形式进行描述，不符合正态分布的资料，用中位数（下四分位数，上四分位数）[M（P25，P75）]进行描述，组间比较采用非参数检验；计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验；一致性分析采用Kappa 检验，以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 β-地中海贫血基因的基因检查结果

基因诊断结果显示，3016 份静脉血样本中β-地中海贫血基因阳性样本174 份，β-地中海贫血阳性率为5.77%，其中轻型β-地中海贫血168 例（96.55%），中间型β-地中海贫血6 例（3.45%）。共检出中11 种不同的基因型，其中常见的包括βCD41-42/βN、βIVS-Ⅱ-654/βN、βCD17/βN、β-28/βN以及βCD71-72/βN。基因型其具体的基因型分布见表1。

表1 β-地中海贫血基因的基因型分布情况

2.2 β-地中海贫血血不同临床分型的Hb 分布情况

中间型β-地中海贫血者的Hb-A 含量低于轻型β-地中海贫血者，差异有统计学意义（P＜0.05），但二者的Hb-F、Hb-A2比较，差异无统计学意义（P＞0.05）（表2）。

表2 β-地中海贫血者不同临床分型的Hb 分布情况[M（P25，P75）]

2.3 毛细管血红蛋白电泳、MCV 检测诊断β-地中海贫血的效能分析

以基因诊断结果为金标准，毛细管血红蛋白电泳筛查β-地中海贫血的灵敏度、特异度以及准确度分别为84.48%、91.93%、91.50%，MCV 检测筛查β-地中海贫血的灵敏度、特异度以及准确度分别为91.95%、91.33%、91.37%，毛细管血红蛋白电泳和MCV 检测联合筛查β-地中海贫血的灵敏度、特异度以及准确度分别为95.98%、91.86%、92.09%。毛细管血红蛋白电泳和MCV 检测联合筛查β-地中海贫血的灵敏度及总准确性最高，但三种检测方式的灵敏度、特异度、准确度比较，差异并无统计学意义（P＞0.05）（表3）。

表3 毛细管血红蛋白电泳筛查结果分析（例）

表4 毛细管血红蛋白电泳筛查的效能分析[%（n/N）]

3 讨论

β-地中海贫血是常见的地中海贫血类型之一，由于其属于遗传性疾病，因此主要见于新生儿，多在其出生后3 个月内出现相关症状。数据统计显示每年全球约有100 万的β-地中海贫血新生儿出生[9]。β-地中海贫血新生儿的预后不良，因此临床需要积极预防β-地中海贫血新生儿的出生。β-地中海贫血为常染色体隐性遗传，因此对于育龄夫妻进行孕前筛查，找出β-地中海贫血携带者，有助于促进人口的优生优育。我国的广东区域是地贫的高发地区。本次研究中基因诊断结果显示，3016 份育龄夫妇的静脉血样本中β-地中海贫血基因阳性样本174 份，阳性率为5.77%，其中轻型β-地中海贫血168 例，中间型β-地中海贫血6 例，略高于钟永红等[10]研究中的β-地中海贫血携带率3.73%。而本研究的在174 份阳性样本的β-地中海贫血基因分型中，占比较高的是βCD41-42/βN、βIVS-Ⅱ-654/βN、βCD17/βN、β-28/βN以及βCD71-72/βN，这与黄军垣[11]研究结果基本相符。基因检测的结果准确性高，但是费用昂刚，且检测技术要求高，用于地贫筛查的适用性不高。

毛细血红蛋白电泳属于实验室检测方法，能根据不同类型血红蛋白的电荷和等电点不同，对血红蛋白的类型和含量进行定性和定量分析，区分正常的血红蛋白和血红蛋白变异体，从而筛查相应的血红蛋白病变[12]。在β-地中海贫血患者中，Hb-A 的含量降低是其主要的血液学特征[13]。本次研究中，中间型β-地中海贫血者的Hb-A 含量低于轻型β-地中海贫血 （P＜0.05），结果提示毛细管血红蛋白电泳能有效检测不同临床分型的β-地中海贫血患儿之间Hb-A 含量的差异，提示其对于β-地中海贫血临床分型能提供一定的参考[14]，一定程度上能减少中间型,重型地中海贫血患儿的出生，为β-地中海贫血防控提供一定的作用。不过毛细管血红蛋白电泳单独应用筛查β-地中海贫血容易出现漏诊。

β-地中海贫血患者的MCV 会出现下降，MCV 检测也是地贫筛查的常用方法，对于地贫筛查的灵敏度较高。但是由于缺铁性贫血人群的MCV 也会出现下降。因此MCV 检测筛查地贫的特异度不是很理想。本次研究将毛细管血红蛋白电泳和MCV 检测联合用于β-地中海贫血的筛查，并以基因诊断结果为金标准对其诊断效能进行分析，结果显示在三种检测方式中，毛细管血红蛋白电泳和MCV 检测联合筛查β-地中海贫血的灵敏度、总准确性最高。结果验证了陈锐芳等[15]研究结论，显示联合应用毛细管血红蛋白电泳和MCV 检测进行育龄夫妇孕前β-地中海贫血筛查，能取长补短，提高筛查灵敏度和准确性。不过本次研究中纳入的育龄夫妇静脉血样本量不够大，因此结果可能存在一定的偏倚，故而需要后续的深入探讨。

综上所述，联合应用毛细管血红蛋白电泳和MCV 检测进行育龄夫妇孕前β-地中海贫血筛查，能一定程度上提高筛查的灵敏度和准确性，且对于其临床分型也有一定的指导意义。