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不同豆制品中大豆异黄酮的种类和含量分析

2022-07-22刘李婷陈姗姗

食品安全导刊 2022年19期
关键词:木素异黄酮种类

刘李婷,石 菲,刘 叶,陈姗姗

(陕西省产品质量监督检验研究院农副食品所,陕西西安 710048)

异黄酮是黄酮类化合物中的一种,主要存在于豆科植物中,其中大豆中的含量最高,故特别称为大豆异黄酮[1]。大豆异黄酮是强力的抗氧化物,能够降低自由基对于低密度脂蛋白的氧化,降低低密度脂蛋白—胆固醇在动脉中沉积,减少动脉硬化的风险;能有效地预防和抑制白血病、骨质疏松、结肠癌、肺癌、胃癌、乳腺癌和前列腺癌等多种疾病的发生,尤其是对乳腺癌和前列腺癌有积极的预防和治疗作用[2]。国内有关大豆异黄酮检测方法的研究已有很多,包括分光光度法[3]、液相色谱法[4]、医学免疫法和色谱-质谱联用法[5]等。由于不同豆制品的成分均较复杂,大豆异黄酮组分含量会随着实际生产环境和制作工艺发生相互转化,本研究建立了一种快速简便、灵敏度高的高效液相色谱法,用于检测不同豆制品中大豆异黄酮的含量,并比较不同豆制品中大豆异黄酮的种类。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

固体类:豆腐乳、豆瓣酱、豆腐、豆芽、豆干、豆皮、腐竹和辣条;液体类:大豆油、豆乳、豆浆、酱油;不同豆类:扁豆、黑豆、黄豆、红小豆和豇豆,所用样品均为市售常见样品。

试剂:甲醇(色谱纯);二甲基亚砜(色谱纯);正己烷(色谱纯);磷酸(分析纯);大豆苷标准品;大豆素标准品;大豆黄苷标准品;大豆黄素标准品;染料木苷标准品;染料木素标准品。

1.2 仪器与设备

高效液相色谱仪(岛津SPD-20A);超声波清洗仪(昆山市超声仪器KQ-500E);离心机(湖南湘仪实验室仪器开发有限公司);酸度计[梅特勒-托利名仪器(上海)有限公司F2系列]。

1.3 实验方法

1.3.1 样品前处理

(1)固体。精密称取固体样品2.0 g,加5 mL正己烷超声脱脂10 min,再加10 mL 80%甲醇溶液溶解至50 mL离心管,超声萃取10 min,离心机离心(8 000 r/min,3 min),取有机层用0.45 μm有机滤膜过滤,HPLC分析含量。

(2)液体。移液枪精密吸取液体样品2.0 mL于50 mL离心管中,加5 mL正己烷超声脱脂10 min,再加10 mL 80%甲醇溶液溶解至50 mL离心管,超声萃取10 min,离心机离心(8 000 r/min,3 min),取有机层用0.45 μm有机滤膜过滤,HPLC分析含量。

1.3.2 仪器条件

色谱柱:C18ODS-3(5 μm,4.6 mm×250 mm);柱温:30 ℃;流动相:流动相A为乙腈,流动相B为磷酸水溶液(pH=3);梯度洗脱,如表1所示;流速:1.0 mL/min检测波长:260 nm。

表1 流动相比例

1.3.3 标准溶液配制

精密称取干燥的大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆黄素、大豆素和染料木素各4 mg,用二甲基亚砜溶液定容至10 mL为标准储备溶液,浓度均为400 mg/L。从大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆黄素、大豆素和染料木素的6种标准贮备溶液中分别吸取0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL和1.0 mL;加入等体积的水,用50%二甲基亚砜溶液定容至10 mL,得到浓度分别为8.0 mg/mL、16.0 mg/mL、24.0 mg/mL、32.0 mg/mL和40.0 mg/mL的标准系列。

2 结果与分析

2.1 标准曲线与线性范围

标准曲线与线性范围见表2,6种大豆异黄酮R2均在0.9以上,表明线性关系良好。

表2 6种大豆异黄酮标准曲线方程

2.2 检出限

选取样品分别加标,进行逐级稀释,仪器检测,可检出的最小浓度为该样品的检出限,最终得到该实验可达到的检出限为0.2 μg/mL。

2.3 精密度

吸取8.0 μg/mL的大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆素、大豆黄素和染料木素标准品溶液,重复进样6次,以测得的峰面积为指标,测定检测方法的精密度。测得大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆素、大豆黄素和染料木素的RSD值分别为0.05%、0.07%、0.06%、0.17%、0.23%和0.05%(n=6),表明实验精密度良好。

2.4 样品检测结果

2.4.1 固体类样品中不同种类大豆异黄酮

固体类样品中不同种类大豆异黄酮如表3所示。由以上结果分析可得,不同固体样品中大豆异黄酮总含量比较为腐竹>豆干>豆皮>豆腐>豆瓣酱>豆芽>豆腐乳>辣条。由此可判断加工工序越少,对大豆异黄酮含量损失越少,且保留的种类越丰富,加工样品原料种类越单一,其含量较高。

表3 固体类样品异黄酮含量(单位:mg/kg)

2.4.2 液体类样品中不同种类大豆异黄酮

液体类样品中不同种类大豆异黄酮如表4所示。由以上实验结果可得,不同液体样品中大豆异黄酮含量比较为豆乳>豆浆>酱油>大豆油。其中大豆油含量较低有可能是因为油脂含量过高,未能将异黄酮全部提出,后期实验过程应针对油脂含量高的样品进行进一步优化。液体样品中异黄酮含量明显低于固体样品,且豆乳、豆浆含量相差不大。

表4 液体类样品异黄酮含量(单位:mg/kg)

2.4.3 不同豆类中不同种类大豆异黄酮

不同豆类中不同种类大豆异黄酮如表5所示。由以上实验结果可得多种豆类产品并不是均含有大豆异黄酮,其中黄豆含量最高,豇豆含量次之。

表5 不同豆类异黄酮含量(单位:mg/kg)

3 结论

大豆异黄酮作为一种天然抗氧化剂,可用于人们日常生活保健,不同种类、不同加工方式影响产品中异黄酮的种类及含量。本研究建立高效液相色谱法测定不同样品中大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆素、大豆黄素和染料木素6种大豆异黄酮。通过分析比较得出,固体类样品中的大豆异黄酮含量高于液体类样品,且加工处理方式越单一,对其含量影响越小;豆类产品中多数不含有大豆异黄酮,黄豆含量最高。该方法回收率高,灵敏度高,且操作简单,快速高效,可应用于实际样品中不同种类的大豆异黄酮的分析测定。

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