多发性骨髓瘤患者NLR、β2-MG、LDH与免疫表型、细胞遗传学及预后生存的关系

张 琪，甘宜敏，徐 阳，衡 春△

江苏省淮安市第一人民医院：1.血液病研究室；2.检验科，江苏淮安 223000

多发性骨髓瘤(MM)是常见的血液系统恶性肿瘤，是一种浆细胞异常克隆增殖性疾病，目前尚无有效的治疗方法，预后一般较差[1-2]。MM的致病机制尚不明确，但随着间接荧光原位杂交技术(FISH)、基因表达谱检测(GEP)等技术的不断发展，MM的生物学及遗传特征逐渐明确[3-4]。细胞遗传学异常被认为是影响MM预后的重要因素，但细胞遗传学检验的实验室条件严格，检查费用高，并不适用于基层医院，故寻找更为方便简单的方法预测MM患者预后，成为了当前MM相关研究的热点。外周血中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)是一种和免疫调节功能相关的指标，能反映体内免疫炎症反应强度[5]。有研究表明，NLR在反映乳腺癌、卵巢癌以及膀胱癌等多种恶性肿瘤患者预后中均具有较高的价值[6]。β2微球蛋白(β2-MG)是一种单链多肽低分子蛋白，主要由淋巴细胞分泌，研究表明，合并恶性肿瘤患者血清β2-MG水平将大幅度升高，这可能是因为肿瘤细胞自身能合成并分泌β2-MG以及恶性肿瘤患者机体免疫稳定性被破坏，免疫反应被激活，促使β2-MG分泌增加[7]。乳酸脱氢酶(LDH)是糖酵解过程中的重要代谢酶，其血清水平能提示机体缺氧、肿瘤细胞活性状态及恶性转化等状况[8]。以上指标的检测取材方便，步骤简单。研究外周血NLR、血清β2-MG以及LDH与MM患者细胞遗传学以及免疫表型之间的关系，进而分析其在MM患者预后中的价值具有一定的临床意义，基于以上背景，本课题组开展了如下研究。

1 资料与方法

1.1一般资料 将本院2016年1月至2019年1月收治的233例MM患者以及同期100例健康体检合格的志愿者纳入研究，分别作为MM组与健康组。MM患者纳入标准：患者符合2003年国际骨髓瘤工作组制定的MM相关诊疗标准[9]；初次被诊断为MM；参与研究前未接受过任何化疗。MM患者排除标准：参与研究前已存在急性或活动性感染者；合并自身免疫性疾病、艾滋病等可能影响NLR者；合并各类慢性炎症者；合并其他恶性肿瘤者。233例MM患者中，男141例、女92例，年龄43～81岁、平均(65.41±13.54)岁；对照组中，男61例、女39例，年龄45～80岁、平均(66.14±14.03)岁；两组年龄及性别构成比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

1.2.1外周血指标检测 采集被研究者空腹静脉血6 mL，均分为3份，置于干燥洁净的试管内，分别用于检测外周血NLR以及血清β2-MG、LDH水平。血清β2-MG采用放射免疫法检测，试剂盒为上海超研生物科技有限公司生产。NLR及LDH均采用日立7600全自动生化分析仪检测。

1.2.2患者免疫表型、细胞遗传学检查结果的收集 收集MM患者的检查结果，包括常规染色体核型、骨髓免疫分型、细胞遗传学、FISH检查结果。染色体核型检测包括常规染色体核型(中期R+G显带)、FISH(间期)检测，复杂染色体核型指常规中期R+G显带染色体检测存在≥3个染色体核型异常或多个预后不良染色体核型异常。

1.2.3分组比较及随访 首先比较MM组与对照组以及MM不同DS分期患者外周血NLR及血清β2-MG、LDH水平。并根据MM患者外周血NRL及血清β2-MG、LDH的中位水平，将其分为高、低NLR组，高、低β2-MG水平组，高、低LDH水平组，分别比较各亚组患者免疫表型以及细胞遗传学特点；随访3年，绘制生存曲线，分析外周血NLR及血清β2-MG、LDH水平对MM患者生存情况的影响。

2 结 果

2.1MM组与对照组外周血NLR、血清β2-MG以及LDH水平比较 MM组外周血NLR及血清β2-MG、LDH水平均高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 MM组与对照组外周血NLR、血清β2-MG以及LDH水平比较

2.2不同DS分期MM患者外周血NLR、血清β2-MG以及LDH水平比较 DS分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期患者外周血NLR、血清β2-MG以及LDH水平比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。进一步两两比较显示，不同DS分期患者外周血NLR、血清β2-MG、LDH水平：Ⅰ期<Ⅱ期<Ⅲ期，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 不同DS分期MM患者外周血NLR、血清β2-MG以及LDH水平比较

2.3NLR水平与MM患者免疫表型及细胞遗传学的关系分析 MM组中233例患者外周血NLR中位值为1.96，以NLR中位水平作为分组标准，将233例MM患者分为高NLR组(n=72)与低NLR组(n=161)。比较发现，高NLR组患者CD56、TP53、RB-1以及复杂核型检出率均高于低NLR组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 NLR水平与MM患者免疫表型及细胞遗传学的关系分析[n(%)]

2.4血清β2-MG水平与MM患者免疫表型及细胞遗传学的关系分析 MM组患者血清β2-MG中位水平为3.94 mg/L，以此作为分界点，将233例MM患者分为β2-MG高水平组(n=55)与β2-MG低水平组(n=178)。比较发现，β2-MG高水平组TP53、RB-1以及复杂核型检出率均高于β2-MG低水平组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表4。

表4 血清β2-MG水平与MM患者免疫表型及细胞遗传学的关系分析[n(%)]

2.5血清LDH水平与MM患者免疫表型及细胞遗传学的关系分析 233例MM患者血清LDH中位水平为196.69 U/L，以此作为分组标准，将其分为血清LDH高水平组(n=89)与LDH低水平组(n=144)，比较发现，LDH高水平组CD56、TP53、RB-1以及复杂核型检出率均高于LDH低水平组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表5。

表5 血清LDH水平与MM患者细胞表型及细胞遗传学的关系分析[n(%)]

2.6外周血NLR、β2-MG以及LDH水平与MM患者预后的关系 随访3年，绘制生存曲线发现，高NLR组MM患者中位生存时间为13个月，低NLR组MM患者中位生存时间为24个月，两组生存曲线比较差异有统计学意义(Log-rankχ2=9.577，P<0.05)，见图1。β2-MG高水平组MM患者中位生存时间为16个月，β2-MG低水平组MM患者中位生存时间为20个月，两组生存曲线比较，差异有统计学意义(Log-rankχ2=10.156，P<0.05)，见图2。LDH高水平组MM患者中位生存时间为22个月，LDH低水平组MM患者中位生存时间为21个月，两组生存曲线比较差异有统计意义(Log-rankχ2=4.177，P=0.041)，见图3。

图1 不同NLR水平MM患者生存曲线

图2 不同β2-MG水平MM患者生存曲线

图3 不同LDH水平MM患者生存曲线

3 讨 论

MM是一种生物异质性强的血液系统恶性疾病，虽近年来，免疫调节剂、蛋白酶体抑制剂等新药物的使用大幅度提高了MM的生存率，但MM病死率依旧较高，借助可靠的指标有效预测MM预后，在指导临床治疗工作中具有重要价值。

随着FISH、GEP等技术的不断发展，细胞遗传学与MM之间的关系已逐步明了，细胞遗传学也被证实为影响MM患者预后的重要因素[10]。有学者研究发现，MM患者常伴有一个或多个细胞遗传学异常，其中1q、IgH、RB-1以及TP53阳性等被证实为高危遗传学异常，是影响患者预后的独立危险因素[11]。但细胞遗传学检查对检测条件要求高，检测费用高，在临床中并不适用。血生化指标的检测具有取材方便、步骤简单的优势，是许多疾病诊断、病情及预后判断的常用辅助手段。

本研究以外周血NLR及血清β2-MG、LDH作为研究指标。其中NLR是反映机体免疫炎症状态的敏感指标，而肿瘤的发生及发展与机体免疫调剂功效间关系密切。淋巴细胞及中性粒细胞是机体免疫系统中重要的组成部分[12]。有研究表明，实体肿瘤中NLR值异常上升一般预示着预后不良。孙磊[13]研究发现，NLR>2.61是影响MM患者预后的独立危险因素。血清β2-MG是一种单链多肽低分子蛋白，是组织相容性抗原Ⅰ，在正常生理条件下，β2-MG进入血液循环后以非蛋白结合状态存在，经肾小球基底膜过滤后可被肾小管重吸收，进一步被降解，其血清水平维持稳定。但当机体发生恶性病变时，血清β2-MG水平将异常升高，这与恶性肿瘤异常增生，导致细胞被大量破坏，促进β2-MG释放，并且肿瘤自身也合成大量β2-MG等因素有关。张蕴玉等[14]研究表明，β2-MG在预测MM患者近期疗效中的灵敏度及特异度分别为89.3%与73.6%，曲线下面积为0.865，提示血清β2-MG在反映MM疗效中的价值较高。LDH广泛分布于人体心、肝、肾等多种器官，是反映细胞代谢状态的敏感指标，有研究表明，恶性肿瘤细胞内基因失调将增加LDH的合成及释放，进而导致血清中LDH水平上升[15]，故LDH在反映恶性肿瘤病情及预后中也具有一定价值。

本研究发现，与对照组相比，MM组患者外周血NLR、血清β2-MG及LDH水平均异常升高，且随着DS分期的增加，MM组患者外周血NLR、血清β2-MG以及LDH水平均随之上升。这说明外周血NLR、血清β2-MG以及LDH水平在反映MM患者病情中具有一定价值。根据MM组患者外周血NLR、血清β2-MG及LDH中位水平，将其依次划分为高、低水平的各个亚组。在检测各亚组细胞遗传学以及免疫表型中发现，高NLR组患者CD56、TP53、RB-1以及复杂核型检出率均显著高于低NLR组(P<0.05)；β2-MG高水平组TP53、RB-1以及复杂核型检出率显著高于β2-MG低水平组(P<0.05)；LDH高水平组CD56、TP53、RB-1以及复杂核型检出率均显著高于LDH低水平组(P<0.05)；提示MM患者外周血NLR、β2-MG以及LDH水平越高，其细胞遗传学及免疫表型异常发生率越高。受限于研究设计及条件，本研究并未对其中的原因进行探讨。此外，本研究进行了为期3年的随访，绘制生存曲线发现，高NLR、β2-MG高水平组以及LDH高水平组生存时间均明显短于各低水平亚组，提示外周血NLR、β2-MG以及LDH水平在预测MM患者预后中具有一定的价值。

综上所述，MM患者外周血NLR、β2-MG以及LDH水平越高，其发生细胞遗传学及免疫表型异常的概率越大，生存时间也越短，提示外周血NLR、β2-MG以及LDH水平在反映MM患者病情及预后中具有一定的价值。