血清IL-1β、CXCL-13、VEGF水平与HBV复制及肝功能的相关性研究

彭思璐，刘 冰，刘仁伟，寇 丹，林 剑

四川绵阳四○四医院感染科，四川绵阳 621000

肝癌是最常见的恶性肿瘤之一。流行病学调查显示，我国每年肝癌的发病人数约为36.6万，死于肝癌的患者多达32.1万[1]，死亡例数仅次于肺癌，位居恶性肿瘤死亡病例数的第二位，成为严重威胁我国居民健康和生命的重大疾病之一。各分型的肝癌中，以原发性肝癌的发病率最高，约占肝癌的90%以上[2]。研究显示，原发性肝癌的发生与慢性肝炎密切相关，其中慢性乙型肝炎(简称乙肝)与丙型肝炎(简称丙肝)是肝癌最主要的诱因[3]。我国是慢性乙肝发病率最高的国家，乙型肝炎病毒(HBV)感染-慢性乙肝-肝纤维化-肝硬化-肝细胞癌是慢性乙肝患者的疾病进展过程。乙肝相关肝癌患者预后极差，5年生存率低于20%[4]，所以探讨慢性乙肝病程进展中有价值的标志物对肝功能损伤和肝癌的早期诊断和预防具有重要意义。本研究对不同疾病进程(包括慢性乙肝、肝硬化、肝癌)的患者血清白细胞介素-1β(IL-1β)、趋化因子-13(CXCL-13)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)水平进行了分析，旨在探讨上述指标对判断HBV复制水平及肝功能损伤程度的价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 将本院2018年8月至2020年8月共97例确诊为慢性乙肝的患者纳入研究。研究经本院医学伦理委员会批准。根据患者疾病进展情况将其分为慢性乙肝组(41例)、肝硬化组(35例)、肝癌组(21例)，各组年龄、性别构成比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，病程比较差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。纳入研究者对本研究知情同意并签署知情同意书。

表1 各组一般资料比较

1.2纳入及排除标准 纳入标准：(1)符合中华医学会肝病学分会、中华医学会感染病学分会2015年版《慢性乙型肝炎防治指南》[5]中HBV感染诊断标准；(2)年龄≥18岁。排除标准：(1)心、肺、肾功能异常者；(2)近两周接受过抗菌药物或免疫调节剂治疗者；(3)合并其他肝炎病毒感染者；(4)妊娠及哺乳期女性。

1.3方法

1.3.1分组标准 慢性乙肝组：HBV阳性，肝功能指标有1或2项异常，有乏力、腹胀、食欲减退等肝炎症状，且未进展至肝硬化或肝癌者；肝硬化：HBV阳性，发生肝硬化者；肝癌：HBV阳性，经临床病理检查确诊为原发性肝细胞癌者。

1.3.2检测指标 HBV-DNA载量采用实时荧光定量PCR(qPCR)进行检测，仪器为7300型荧光定量分析仪(Applied Biosystem公司)，检测试剂为中山大学达安基因有限公司的HBV-DNA试剂盒。肝功能主要指标包括血清总胆红素(TBIL)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)，检测设备为AU2700全自动生化分析仪(日本奥林巴斯株式会社)及配套试剂。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测IL-1β、CXCL-13、VEGF水平。

2 结 果

2.1各组IL-1β、CXCL-13、VEGF水平及HBV-DNA载量比较 各组IL-1β、CXCL-13、VEGF水平，HBV-DNA载量差异均有统计学意义(P<0.05)。各组间IL-1β、CXCL-13、VEGF水平两两比较：由高至低依次为肝癌组、肝硬化组、慢性乙肝组(P<0.05)；各组间HBV-DNA载量两两比较：肝癌组、肝硬化组均低于慢性乙肝组(P<0.05)，肝硬化组、肝癌组HBV-DNA载量差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 各组IL-1β、CXCL-13、VEGF水平及HBV-DNA载量比较

2.2各组肝功能主要指标比较 各组ALT、AST水平比较差异均有统计学意义(P<0.05)；TBIL、ALP水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。各组间ALT、AST水平两两比较：由高至低依次为肝癌组、肝硬化组、慢性乙肝组，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 各组肝功能指标比较

2.3IL-1β、CXCL-13、VEGF水平与HBV-DNA载量及肝功能主要指标的关系 血清IL-1β、CXCL-13、VEGF水平与AST水平均呈正相关(r分别为0.429、0.387、0.354，P<0.05)，IL-1β、CXCL-13、VEGF水平与ALT水平均呈正相关(r分别为0.411、0.356、0.377，P<0.05)；IL-1β、CXCL-13、VEGF水平与TBIL、ALP水平、HBV-DNA载量均无相关性(P>0.05)。见表4。

表4 血清IL-1β、CXCL-13、VEGF水平与HBV-DNA载量及肝功能主要指标的相关性

3 讨 论

ALT、AST是反映肝损伤程度的重要指标之一，但脂肪肝、药物等也可能造成肝损伤，同样会引起ALT、AST水平升高，所以要判断HBV对慢性乙肝患者造成的肝损伤及严重程度仅通过ALT、AST水平的检测是远远不够的。研究显示，肝癌与肝脏慢性炎症所致的肝细胞增生和损伤密切相关，其分子机制包括抑癌基因失活、癌基因激活及癌细胞相关信号通路的过度活化[6-7]。我国是HBV感染率较高的国家，大部分肝癌与HBV感染导致的慢性乙肝有关。既往研究认为，乙肝E抗原(HBeAg)阳性是评价慢性乙肝患者病毒复制是否活跃的主要指标，但近年来的研究却发现，部分HBeAg转阴的患者HBV的复制并未停止[8-10]。同时有研究证明，乙肝造成的肝细胞损伤与HBV复制无直接关系[11-12]。本研究显示，肝硬化组与肝癌组患者HBV-DNA载量明显低于慢性乙肝组，差异有统计学意义(P<0.05)。这说明慢性乙肝造成的肝损伤不是由HBV病毒直接造成的，肝细胞损伤与HBV复制无直接关系。同时本研究显示，随着肝脏损伤的加重，HBV-DNA载量逐渐降低。分析肝损伤的原因可能与HBV感染激发的肝细胞免疫应答反应有关。

IL-1是一种复杂的多功能炎症细胞因子,IL-1β是其中重要的家族成员之一，主要作用是促进炎症反应和T、B淋巴细胞的活化、增殖、分化。近年来国内外文献报道，IL-1β在多种炎症疾病及多器官恶性肿瘤中呈高表达[13-14]。本研究显示，各组IL-1β水平：由高至低依次为肝癌组、肝硬化组、慢性乙肝组，差异有统计学意义(P<0.05)。相关性分析显示，IL-1β与AST、ALT均呈正相关(P<0.05)，提示血清IL-1β超过某一水平可能预示着肝癌的发生，但仍需进一步研究证实。

趋化因子是指一类可吸引白细胞迁移募集到炎症部位的分泌蛋白，根据其结构可分为CXC、CC、C、CX3C 4个家族。有研究发现，趋化因子及其受体在慢性肝炎的初始阶段即参与其中，在疾病进展后期亦可促进肿瘤的生长、侵袭和转移[15]。趋化因子-5(CXCL-5)是调节免疫和炎症反应的重要因子，PARK等[16]研究发现，晚期胃癌患者中CXCL-5表达明显高于慢性胃炎患者与健康体检者，但目前CXCL-5在慢性乙肝患者中的表达情况鲜有报道。CXCL-13主要分布于肝脏和淋巴结组织中，是CXCR-5的唯一配体，血清CXCL-l3水平升高可能提示患某种自身免疫性疾病。RIOJA等[17]研究发现，乙肝疫苗注射后无特异性抗体产生与CXCL-l3的基因多态性相关。本研究显示，各组CXCL-13水平：由高至低依为肝癌组、肝硬化组、慢性乙肝组(P<0.05)。相关性分析显示，CXCL-13与AST、ALT均呈正相关(P<0.05)，提示血清CXCL-13超过某一水平可能预示着肝癌的发生，但仍需进一步研究证实。

VEGF是一种可促进血管内皮细胞生长的特异性蛋白，主要作用是调节和刺激内皮细胞的增殖、迁移，使血管的通透性增加并对血管再生的多个环节产生影响。研究发现，VEGF在肝实质与非实质细胞分裂再生过程中起着重要作用[18-19]，所以理论上讲，HBV感染后慢性乙肝病程中血清VEGF水平应随着病情进展而升高，但VEGF水平是否可用于判断慢性乙肝患者肝功能损伤程度尚不清楚。本研究显示，各组VEGF水平由高至低依次为肝癌组、肝硬化组、慢性乙肝组(P<0.05)。相关性分析显示，VEGF表达与AST、ALT均呈正相关(P<0.05)。随着慢性乙肝病程的迁延，肝血管炎症日益严重，对肝细胞的破坏加重，肝脏阻塞病变愈加明显，致肝细胞进一步缺氧缺血，诱导VEGF合成增加并导致新生血管生成。同时随着VEGF水平升高，内皮细胞的增殖、迁移能力及血管通透性增加，肝脏组织局部有效血容量下降，缺氧缺血现象进一步加重，形成恶性循环，导致病情加重和肝癌的发生。

综上所述，慢性乙肝患者血清IL-1β、CXCL-13、VEGF水平随着病情进展而升高，与肝细胞损伤程度相关，提示IL-1β、CXCL-13、VEGF参与了慢性乙肝病程的进展，可作为慢性乙肝病情严重程度判断指标之一，但对判断HBV复制水平无指导意义。