乌梅丸中人参的薄层鉴别

越 亮 孙建彬 胡 彬 喻贵英 彭 爽 王 欣 罗维早

①重庆市中药研究院 ②太极集团重庆桐君阁药厂有限公司

目的：建立乌梅丸中人参的薄层色谱鉴别方法。方法：使用硅胶G高效薄层板，以环已烷-乙酸乙酯-正丁醇-无水乙醇-甲酸-水（1.5:3:3:1.5:0.5:0.5）为展开剂，喷以5%香草醛硫酸溶液显色，进行薄层色谱分析。结果：供试品色谱图中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，各组分的分离良好，斑点均匀清晰。结论：所用方法专属性强、耐用性好，完善了乌梅丸的质量标准。

乌梅丸由乌梅肉、花椒、细辛、黄连、黄柏、干姜、炮附子、桂枝、人参、当归组成。具有缓肝调中，清上温下的功效。用于治疗蛔厥，久痢，厥阴头痛[1]。原质量标准中鉴别项下只有乌梅、附子、黄连和黄柏的显微鉴别；黄连、黄柏中盐酸小檗碱，当归、干姜的薄层鉴别。为了完善该制剂的质量标准，以人参中的有效成分人参皂苷Rf、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re及人参皂苷Rb1为指标，研究建立的乌梅丸中人参的薄层鉴别方法。

1 仪器与试药

CPA225D型电子天平：十万分之一，Sartorius；BS224S型电子天平：万分之一，Sartorius；KQ5200型超声波清洗器：昆山市超声仪器有限公司；HH-4型数显恒温水浴锅：金坛市华欧实验仪器厂；CS101-2EBN电热恒温鼓风干燥箱：重庆市永生实验仪器厂。硅胶G高效薄层板：规格为50×100mm，100×100mm，青岛谱科分离材料有限公司。人参对照药材（批号：120917-201211）、人参皂苷Rf（批号：111719-201104）、人参皂苷Rg1（批号：110703-201731）、人参皂苷Re（批号：110754-201525）及人参皂苷Rb1（批号：110704-201424）由中国食品药品检定研究院提供；乌梅丸（批号：201808001、201808002）及乌梅丸-人参阴性样品由太极集团重庆桐君阁药厂有限公司提供；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

（1）对照品溶液的配备：取人参皂苷Rf对照品、人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品及人参皂苷Rb1对照品适量，加甲醇制成每 l ml含1mg人参皂苷Rf、1mg人参皂苷Rg1、1mg人参皂苷Re及1mg人参皂苷Rb1的混合溶液，作为对照品溶液。

（2）对照药材溶液的制备：取人参对照药材1g，分别加50ml、50 ml水饱和正丁醇，超声处理二次，每次30分钟，过滤，合并滤液，滤液用等量氨试液萃取两次，取上层正丁醇液，蒸干，用10ml三氯甲烷超声溶解，过滤，再用三氯甲烷洗涤残渣两次，每次5ml，弃滤液，残渣用25ml甲醇溶解，浓缩甲醇至1ml，离心，取上清液作为对照药材溶液。

（3）供试品溶液的制备：取本品粉末30g，分别加150ml、100 ml水饱和正丁醇，超声处理二次，每次30分钟，过滤，合并滤液，滤液用等量氨试液萃取两次，取上层正丁醇液，蒸干，用10ml三氯甲烷超声溶解，过滤，再用三氯甲烷洗涤残渣两次，每次5ml，弃滤液，残渣用25ml甲醇溶解，浓缩甲醇至1ml，离心，取上清液作为供试品溶液。另取乌梅丸人参阴性粉末30g，同法制成阴性供试品溶液。

（4）薄层鉴别：照薄层色谱法（通则0502)试验，吸取上述两种溶液各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环已烷-乙酸乙酯-正丁醇-无水乙醇-甲酸-水（1.5:3:3:1.5:0.5:0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在110℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；而人参阴性样品在药材色谱相应的位置上，无相同颜色的斑点，见图1。

图1 乌梅丸中人参薄层图

（5）展开条件的耐用性：对展开条件进行了 4～10、25℃、30 ℃的温度考察以及 18%、75% 相对湿度考察，分离效果均良好，证明该薄层鉴别方法耐用性良好，见图2～图6。

图2 在30℃薄层图

图3 在25℃薄层图

图4 在4℃薄层图

图5 在相对湿度18%薄层图

图6 在相对湿度75%下的薄层图

3 讨论

（1）供试品制备方法的考察：我们借鉴《中国药典》2020版一部人参项下薄层色谱鉴别的供试品制备方法制备供试品，发现在与对照品相应位置上斑点不清晰，不易分辨。我们对供试品制备方法进行了改进，先采用水饱和正丁醇提取，再用三氯甲烷除杂质，然后用较多的甲醇充分溶解样品之后再浓缩至1ml，作为供试品溶液，点样量3μl时，能够显示清晰的斑点。

（2）展开剂及显色剂的考察：《中国药典》2020版一部人参项下薄层色谱鉴别展开剂为三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水（15:40:22:10）10°C以下放置的下层溶液，由于三氯甲烷的沸点较低，实验中发现其展开效果受温度影响较大，并有时存在分离度不理想的问题。分别考察了以下几个系统：环己烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水、环己烷-乙酸乙酯-无水乙醇-甲酸-水、环己烷-乙酸乙酯-正丁醇-甲醇-甲酸-水、环己烷-乙酸乙酯-正丁醇-无水乙醇-甲酸-水。对以上系统进行不同比例的调整和反复试验，最后确定环已烷-乙酸乙酯-正丁醇-无水乙醇-甲酸-水（1.5:3:3:1.5:0.5:0.5）为展开剂。比较了5%香草醛硫酸溶液和10%硫酸乙醇溶液的显色效果，发现5%香草醛硫酸溶液较10%硫酸乙醇溶液的显色效果好，最后确定5%香草醛硫酸溶液为显色剂。