ARID1A在肺癌中的表达及临床意义研究

赵淑芳 刘智荣 王伟 洪磊

[摘要]目的研究 AT 丰富结构域1A（ARID1A）在肺癌中的表达及临床意义。方法纳入2013年1月至2014年12月蚌埠医学院第一附属医院病理科肺癌组织存档蜡块100例，另附癌旁组织100例，并收集患者相关临床资料。采用免疫组织化学染色法（IHC）检测肺癌和癌旁组织中 ARID1A 蛋白的表达水平，分析 ARID1A 蛋白表达与肺癌临床病理因素之间的关系。结果肺癌组织 ARID1A 蛋白表达阴性率明显高于癌旁组织，差异有统计学意义（ P <0.05）。ARID1A 阳性与 ARID1A 阴性患者的 TNM 分期、肿瘤大小差异有统计学意义（ P <0.05）。logistic 回归分析显示， TNM 分期高、肿瘤偏大与 ARID1A 蛋白表达阴性有关（ OR=2.132、1.556，P <0.05）。結论 ARID1A 表达与肺癌的分期、肿瘤大小有密切关系，肺癌的发展与 ARID1A 表达缺失有关，其作为抑癌基因在肺癌早期起到重要作用。

[关键词] AT 丰富结构域1A;肺癌;临床病理;相关性

[中图分类号] R446.1  [文献标识码] A   [文章编号]2095-0616（2022）09-0028-04

Study on ARID1A expression and its clinical significance in lung cancer

ZHAO  Shufang    LIU  Zhirong    WANG  Wei    HONG  Lei

1. Molecular Diagnostic Center， the First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College， Anhui， Bengbu 233000， China;2. Department of Thoracic Surgery， the First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College， Anhui， Bengbu 233000， China;3. Department of Respiratory Medicine， the First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College， Anhui， Bengbu 233000， China

[Abstract] Objective To study the expression of AT-rich interactive domain containing protein 1A （ARID1A） and its clinical significance in lung cancer. Methods A total of 100 cases of lung cancer tissues archived in wax blocks and 100 cases of adjacent tissues collected in the pathology department of the First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College from January 2013 to December 2014 were included and the relevant clinical data of these patients were collected. The expression of ARID1A protein in lung cancer tissues and adjacent tissues was detected by immunohistochemical （IHC） staining， and the relationship between ARID1A protein expression and clinicopathological factors for lung cancer was analyzed. Results The negative expression rate of ARID1A protein in lung cancer tissues was significantly higher than that in adjacent tissues， with statistically significant difference （P <0.05）. There were statistically significant differences in tumor-node-metastasis （TNM） stage and tumor size between ARID1A positive and negative patients （P <0.05）. Logistic regression analysis showed that the high TNM stage and large tumor were related to the negative expression of ARID1A protein， with statistically significant differences （ OR=2.132， 1.556， P <0.05）. Conclusion The ARID1A expression is closely related to the stage and tumor size of lung cancer. The development of lung cancer is related to the loss of ARID1A expression . As a tumor suppressor gene， ARID1A plays an important role in the early stage of lung cancer.

[Key words] AT-rich interactive domain containing protein 1A; Lung cancer; Clinical pathology; Relevance

肺癌是目前威胁人类健康的一大杀手，虽然临床上对肺癌的主要致病基因和分子机制研究尚不明确，但多数学者认为肺癌的发生与人口老龄化、环境污染、基因遗传等均有密切关系[1]。且对肺癌的主要致病基因及其分子机制的研究在肿瘤的预防和诊治中起关键作用。SWI/SNF 是一种 ATP 依赖的染色质重塑复合物，能调控染色质的结构和表达[2-3]。AT 丰富结构域1A（AT-rich interactive domain containing protein 1A，ARID1A）是該复合物的一个重要亚基，其功能失调会导致染色质重塑异常，引起肿瘤等疾病的发生[4-5]。有学者认为[6]，肿瘤的发生发展与 ARID1A 表达有密切关系。为进一步分析 ARID1A 表达与肺癌的关系，本研究对蚌埠医学院第一附属医院（我院）收治的肺癌患者为研究对象，分析 ARID1A 表达在肺癌中的意义，现报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料

选取2013年1月至2014年12月我院病理科肺癌组织存档蜡块100例，另附癌旁组织100例（所有标本均为患者术中选取的病例标本），并收集患者相关临床资料。其中男62例，女38例;年龄48～79岁，平均（61.4±5.8）岁;肺癌组织标本的病理学分级：低分化组织36例，中、高分化组织64例; TNM 分期：Ⅰ期48例，Ⅱ期29例，Ⅲ期23例;淋巴结转移情况：有转移31例，无转移69例;肿瘤个数：单个患者66例，多个患者34例;肿瘤大小：≤5 cm 患者63例，>5 cm 患者37例。

1.2方法

1.2.1仪器与试剂 ARID1A 抗体（美国 Santa  Cruz 公司，批号：180624）;DAB 试剂盒（北京中杉生物工程公司，批号：50881774）;磷酸盐缓冲液（PBS）（北京中杉生物工程公司，批号：ZY8621-1）; CX31显微镜（日本 OLYMPIS）;YS-431L 温箱（北京福意联医疗设备有限公司）;MI-H658冰箱（德国西门子）。

1.2.2方法①固定标本：将所选取的标本切片放入60℃恒温箱中加热1 h;②脱蜡、水化：将切片标本置于二甲苯 I 中浸泡10 min，再置于二甲苯Ⅱ中浸泡10 min，再依次置于100%、95%、85%、75%四种不同浓度酒精和蒸馏水中各5 min，PBS 缓冲液洗涤3次，5 min/次;③修复抗原：将切片置于0.01 mol/L 柠檬酸盐缓冲液中孵育，放于微波炉中大火加热5 min，小火加热10 min，冷却至室温后使用 PBS 缓冲液洗涤3次，5 min/次;④切片上滴加3%过氧化氢，孵育10 min，再滴加山羊血清，将切片放入37℃的湿盒中20 min，甩去多余液体;⑤将 ARID1A 鼠多克隆抗体按1∶ 100经 PBS 缓冲液稀释作为一抗，滴加至切片上，将切片放于4℃冰箱中孵育过夜;⑥复温：将切片置于37℃恒温箱中30 min， PBS 缓冲液洗涤2次，5 min/次;⑦将 Polymer Helper（试剂1）滴于切片上，室温孵育30 min， PBS 缓冲液洗涤3次，5 min/次;⑧切片上滴加polyperoxidase-IgG（试剂2），室温孵育30 min，PBS缓冲液洗涤3次，5 min/次;⑨ DAB 显色：将新鲜稀释混匀后的 DAB 溶液滴于切片上，在显微镜下控制反应程度，染色完成后自来水冲洗;⑩苏木素复染5 min，自来水冲洗;11脱水：依次置于75%、85%、95%和100%浓度的酒精中各5 min，再分别放入二甲苯Ⅱ、二甲苯Ⅰ中10 min;12中性树胶封片;13镜检。

1.3观察指标

观察肺癌组织和癌旁组织中 ARID1A 的蛋白表达水平，分析 ARID1A 蛋白表达与肺癌临床病理因素的关系。

1.4统计学方法

采用 SPSS 18.0统计学软件进行数据处理，计数资料用[n （%）]表示，采用χ2检验。采用 logistic 回归方程计算分析相关参数，以 ARID1A 蛋白表达的阳性、阴性作为因变量，患者临床病理参数作为自变量，以 a=0.05作为筛选变量的标准，P<0.05为差异有统计学意义。采用 Kaplan-Meier 生存分析患者生存情况。

2结果

2.1肺癌组织与癌旁组织中ARID1A的蛋白表达情况比较

肺癌组织 ARID1A 蛋白表达阴性率明显高于癌旁组织，差异有统计学意义（ P <0.05），见表1。

2.2肺癌组织中ARID1A蛋白表达与肺癌临床病理参数的关系

ARID1A 阳性与 ARID1A 阴性患者 TNM 分期、肿瘤大小差异有统计学意义（ P <0.05），见表2。

2.3 ARID1A蛋白表达与肺癌临床病理参数的关系分析

TNM 分期高、肿瘤偏大与 ARID1A 蛋白表达阴性有关（ P <0.05），见表3。

2.4 ARID1A蛋白表达与患者生存情况分析

ARID1A 阳性表达患者的生存状态优于 ARID1A 阴性表达患者，见图1。

2.5 ARID1A在癌旁组织和肺癌组织中的表达

免疫组化检测 ARID1A 蛋白在不同组织中的表达，阳性结果显示细胞核内有棕色颗粒染色。ARID1A 在癌旁组织（图2A）中阳性表达率为47.5%， ARID1A 在肺癌组织（图2B）中阳性表达率为25.0%。

3讨论

近年来随着人们对 ARID1A 基因的研究，越来越多学者认为 ARID1A 基因在恶性肿瘤中存在突变情况，尤其在妇科肿瘤中突变频率高于其他恶性肿瘤[7]。报道显示，ARID1A 基因在卵巢透明细胞癌中突变频率高达43%～57%[8]。认为 ARID1A 基因突变会导致相关蛋白表达减少，且在临近的癌旁组织中也存在突变情况[9]。Yamaguchi 等[10]对卵巢透明细胞癌进行研究，结果显示， ARID1A 在癌组织和癌旁组织中表达缺失，而在囊肿上皮细胞中表达正常。上述研究均表明 ARID1A 的突变与多种肿瘤的发生发展有密切关系[11]。

本研究对我院肺癌患者进行研究，取肺癌组织和癌旁组织蜡块进行分析，结果显示，肺癌组织 ARID1A 蛋白表达阳性率明显低于癌旁组织。对肺癌患者临床病理参数与 ARID1A 蛋白表达情况进行分析发现，TNM 分期高、肿瘤偏大与 ARID1A 蛋白表达阳性有关。结果表明 ARID1A 在早期肺癌组织中阳性表达，但在Ⅱ期和Ⅲ期肺癌组织中低表达，提示 ARID1A 阳性表达发生在肺癌早期阶段，晚期后表达缺失。在Kinali等[12]的研究中对肺癌患者的肺癌组织、近端癌旁组织和远端肺组织进行对比，结果显示，远端肺组织 ARID1A 的阳性表达率高于近端癌旁组织，近端癌旁组织高于肺癌组织。提示 ARID1A 的表达缺失可能是引起肺癌发生发展的重要原因。这与本研究结果相符，表明 ARID1A是一种抑癌基因。在观察患者生存状态时也发现， ARID1A 阳性表达患者的生存状态优于 ARID1A 阴性表达患者的生存状态，也验证了 ARID1A 是一种抑癌基因。ARID1A 基因编码 BAF250a 蛋白，肿瘤组织中 BAF250a 蛋白常常缺失。而 ARID1A 是参与了Fas基因介导的细胞凋亡的重要基因。因此认为 ARID1A 表达调控 BAF250a 蛋白表达，在细胞周期中抑制肿瘤 SWI/SNF 复合物的活性，从而介导肿瘤细胞死亡，ARID1A 表达缺失可能是导致肺癌进展的重要原因[13-15]。其作为抑癌基因在肺癌早期发挥重要作用。

综上所述，ARID1A 表达与肺癌的分期和大小有密切关系，肺癌的发展与 ARID1A 表达缺失有关，其作为抑癌基因在肺癌早期起到重要作用。本研究虽然验证了 ARID1A 基因在肺癌的发生发展中起到重要作用，但对于 ARID1A 基因在肺癌的发生发展中如何作用，以及作用的通路、具体机制等并无深入研究。随着基因治疗的不断发展，靶基因成为治疗恶性肿瘤的新希望，之后需要进一步深入研究 ARID1A 基因在肺癌发生发展中的具体作用机制，从而为肺癌的治疗提供参考。

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（收稿日期：2021-09-14）