T淋巴细胞、TLR4与NF-κB p65在脑卒中相关性肺炎患者血清中的表达及意义

黄钰峰，郑智慧*，杨梅林，洪卫民

（1. 福建中医药大学护理学院，福建 福州 350122 ；2. 福建省三明第一医院神经内科，福建 三明 365000）

脑卒中相关性肺炎(SAP) 是指未接受机械通气治疗的脑卒中患者在发病后7 d 内出现的肺炎[1]。此病是脑卒中患者最常见、最严重的并发症之一。有研究指出，SAP 的发病机制复杂，脑卒中引起的意识障碍、误吸及免疫抑制是诱发此病的重要因素[2]。相关的研究显示，脑卒中患者在发生脑损伤后会出现细胞免疫功能下降的情况，这会增加其发生感染（特别是肺部感染）的风险。发生感染又会反过来影响脑卒中患者的恢复，导致其预后不佳。本文主要是探讨T 淋巴细胞（CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+）、Toll 样受体4（TLR4）与核转录因子-κB P65（NF-κB p65）在SAP患者血清中的表达及意义。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选 取2019 年5 月 至2020 年5 月 福 建 省 三明第一医院收治的17 例SAP 患者和同期该院收治的20 例单纯脑卒中患者为研究对象。将17 例SAP 患者作为SAP 组，将20 例单纯脑卒中患者作为非SAP 组。SAP 组患者的纳入标准是：1）在发病后24 h 内入院；2）经头颅CT 检查或MRI检查被确诊患有急性脑卒中；3）病情符合《卒中相关性肺炎诊治中国专家共识》[1]中规定的SAP的诊断标准；4）未合并恶性肿瘤、器官功能障碍、自身免疫性疾病及中枢神经系统疾病。非SAP 组患者的纳入标准是：1）性别、年龄、NHISS 评分等临床资料与SAP 组患者相匹配（无显著差异）；2）在发病后24 h 内入院；3）经头颅CT 检查或MRI 检查被确诊患有急性脑卒中；4）未合并恶性肿瘤、器官功能障碍、自身免疫性疾病及中枢神经系统疾病。非SAP 组20 例患者中有男性13 例，女性7 例。SAP 组17 例患者中有男性11 例，女性6 例。两组患者的性别、年龄、NHISS 评分相比，差异无统计学意义（P ＞0.05），具有可比性。本研究经我院医学伦理委员会审核通过，研究对象或其家属已签署知情同意书。

1.2 方法

在两组患者入组次日清晨采集其血样。抽取其空腹静脉血10 mL（均分为2 管）。使用流式细胞仪（采用流式细胞检测法）检测血清CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+的 水 平， 采 用 荧 光 定量（PCR）法（按照说明书配制反应体系，进行扩增反应）检测血清TLR4、NF-κB p65 的水平。TLR4 在全血中的修正表达量I 的计算方法是：I=样本TLR4 Copies/样本Actin Copies；I×100 表示总RNA100 的情况下目的基因mRNA 的表达量。NF-κB p65 在全血中的修正表达量I 的计算方法是：I=样本NF-κB p65 Copies/样本Actin Copies ；I×100 表示总RNA100 的情况下目的基因mRNA 的表达量。

1.3 统计学处理

采用SPSS 22.0 软件进行数据分析。计量资料用均数± 标准差（±s）表示，采用t 检验，计数资料用百分比（%）表示，采用χ² 检验。P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者血清T 淋巴细胞水平的对比

两 组 患 者 血 清CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+的水平相比，差异无统计学意义（P ＞0.05）。详见表1。

表1 两组患者血清T 淋巴细胞水平的对比（± s）

表1 两组患者血清T 淋巴细胞水平的对比（± s）

组别 D3+(%) CD4+(%) CD8+(%) CD4+/CD8+非SAP 组（n=20） 63.92±9.94 41.36±8.83 19.81±9.56 2.60±1.38 SAP 组（n=17） 65.04±7.41 40.92±8.94 21.13±9.75 2.40±1.29

2.2 两组患者血清TLR4、NF-κBp65 基因mRNA表达量的比较

SAP 组 患 者 血 清NF-κB p65 基 因mRNA 的表达量高于非SAP 组患者，差异有统计学意义（P ＜0.05）。两 组 患 者 血 清TLR4 基 因mRNA 的表达量相比，差异无统计学意义（P ＞0.05）。详见表2。

表2 两组患者血清TLR4、NF-κB p65 基因mRNA 表达量的比较（± s）

表2 两组患者血清TLR4、NF-κB p65 基因mRNA 表达量的比较（± s）

注：*与SAP 组比较，P ＜0.05。

组别 TLR4（I×100） NF-κB p65（I×100）非SAP 组（n=20） 3.74±3.15 2.32±1.42*SAP 组（n=17） 4.30±3.15 6.64±1.97

2.3 两组患者血清T 淋巴细胞水平与其血清TLR4、NF-κBp65 基因mRNA 表达量的相关性

两组患者血清NF-κB p65 基因mRNA 的表达量与其血清CD3+、CD4+、CD4+/CD8+的水平呈正相关（r=0.144，P ＜0.05；r=0.201，P ＜0.05；r=0.071，P ＜0.05）， 与 其 血 清CD8+的 水 平呈负相关（r=-0.028，P ＜0.05）。两组患者血清TRL4 基因mRNA 的表达量与其血清CD3+、CD4+、CD4+/CD8+的 水 平 呈 正 相 关（r=0.097，P ＜0.05；r=0.260，P ＜0.05；r=0.149，P ＜0.05），与其血清CD8+的水平呈负相关（r=-0.156，P ＜0.05）。详见表3。

表3 两组患者血清T 淋巴细胞水平与其血清TLR4、NFκB p65 基因mRNA 表达量的相关性

3 讨论

T 淋巴细胞是一种重要的免疫效应细胞，可分 为CD3+、CD4+、CD8+。这 些T 淋 巴 细 胞 均 具有调节人体免疫活动、介导细胞免疫过程的功能。王冬英等[2]的研究结果显示，SAP 组患者血 清CD3+、CD4+、CD4+/CD8+的 水 平 均 明 显 高于非SAP 组患者，其血清CD8+的水平明显低于非SAP 组患者。有研究指出，SAP 患者血清CD3+、CD4+、CD4+/CD8+的 水 平 会 随 着 其 病 情危险程度的增高而显著增高。高危SAP 患者血清CD3+、CD4+、CD4+/CD8+的 水 平 均 高 于 低 危SAP 患者[3]。相关的研究显示，脑卒中患者发病早期外周血T 淋巴细胞亚群的水平与其SAP 的发生风险密切相关[4]。本研究的结果显示，两组患者 血 清CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+的 水 平相比，差异无统计学意义（P ＞0.05）。这与上述研究结果不符。这可能与本研究的样本量较小有关。NF-kB 是一种具有多向调节作用的核转录因子，可参与诸多生理、病理过程，如炎性反应、细胞凋亡等，尤其是在免疫炎性反应过程中可起到重要的作用。其可控制细胞因子的产生和细胞的凋亡，在免疫或炎性因素的诱导下其可转移至胞核。有研究指出，NF-kB 的活化及移位可加快信号通路下游多种促炎细胞因子（如TNF-α、IL-1β、IL-6）的分泌，加剧炎症反应。相关的研究显示，NF-kB 可参与神经系统疾病发生发展的全过程[5]。本次研究的结果显示，SAP 组患者血清NF-κB p65 基因mRNA 的表达量高于非SAP 组患者，差异有统计学意义（P ＜0.05）。两组患者血清NF-κB p65 基因mRNA 的表达量与其血清CD3+、CD4+、CD4+/CD8+的水平呈正相关（r=0.144，P ＜0.05；r=0.201，P ＜0.05；r=0.071，P ＜0.05），与其血清CD8+的水平呈负相关（r=-0.028，P ＜0.05）。这说明，SAP 的发生可能与NF-κB p65 信号通路被激活有关。Toll 样受体(Toll-like receptors, TLR)是一种可参与非特异性免疫的Ⅰ类重要蛋白质分子，也是“连接非特异性免疫和特异性免疫的桥梁”。TLR4 是天然免疫识别受体，被激活后可同时启动Myd88、TRIF 这两条途径，进而可活化NF-κB 及IRFs，启动炎症基因的表达。有研究显示，TLR4/NF-κB 信号通路在脑缺血后的神经炎症反应、脑缺血再灌注损伤中起到重要的作用[6-7]。本次研究的结果显示，两组患者血清TRL4 基因mRNA 的表达量与其血清CD3+、CD4+、CD4+/CD8+的水平呈正相关（r=0.097，P ＜0.05；r=0.260，P ＜0.05；r=0.149，P ＜0.05），与其血清CD8+的水平呈负相关（r=-0.156，P ＜0.05）。有研究指出，TLR2、TLR3、TLR4、TLR7、TLR9 在脑缺血的发生、发展中均起到重要的作用[8]。王娜等[9]在研究中指出，TLR4/NF-κB 信号通路是与抗炎免疫机制密切相关的一条信号传导通路，其在炎症的发生发展中起到重要的作用。相关的研究表明，通过提高脑卒中患者的免疫力，抑制其过度激活的TLR4/NF-κB信号通路，调控其体内SAP 相关炎症因子的水平可有效降低其SAP 的发生风险。有氧运动、中医药疗法在抑制炎症信号通路、调节免疫等方面具有独特的优势，值得在SAP 的防治中推广应用。

综上所述，脑卒中患者血清TLR4、NF-κB p65 的水平与其血清T 淋巴细胞的水平密切相关。SAP 的发生可能与NF-κB p65 信号通路被激活有关。临床医生应对上述情况予以关注。