细胞蜡块联合CEA、TTF-1、E-cadherin在肺腺癌胸腔积液病理诊断中的临床价值研究

2022-07-11赖丽雅廖志东赖骏威郑渝兰谢运红曹浩林

中国医药科学 2022年12期

赖丽雅廖志东赖骏威郑渝兰谢运红曹浩林

[摘要]目的探究细胞蜡块联合癌胚抗原（CEA）、甲状腺转录因子1（TTF-1）、上皮钙黏素（E-cadherin）在肺腺癌胸腔积液病理诊断中的临床价值。方法选择2020年1月至2021年7月在梅州市中医医院进行病理形态学诊断且有病理诊断结果的100例患者的胸腔积液标本作为研究对象。所有胸腔积液均行细胞涂片，剩余胸腔积液沉渣制成细胞蜡块，行CEA、TTF-1、E-cadherin免疫组织化学染色。根据病理结果将研究对象分为3组：恶性组（n=35）、可疑组（n=34）、良性组（n=31）。比较各组TTF-1、CEA、E-cadherin表达阳性率，比较各单一指标、联合指标诊断效能。结果恶性组TTF-1、CEA、E-cadherin表达阳性率较良性组高，差异有统计学意义（P<0.05）。可疑肺腺癌TTF-1、CEA、E-cadherin表达阳性率较可疑癌高，差异有统计学意义（P<0.05）。TTF-1、CEA、E-cadherin联合诊断的诊断效能较单一指标高，差异有统计学意义（P<0.05）。免疫细胞化学与细胞病理形态学联合诊断的阳性率高于单一免疫细胞学、细胞病理形态学检测（P<0.05）。结论细胞蜡块联合CEA、TTF-1、E-cadherin在肺腺癌胸腔积液病理诊断中，具有较高的诊断效能。

[关键词]细胞蜡块;CEA;TTF-1;E-cadherin;肺腺癌;胸腔积液

[中图分类号]R734.2

[文献标识码]A

[文章编号]2095-0616（2022）12-0130-04

肺癌是世界上最为常见的一种恶性肿瘤，早期临床症状较少或较轻，约75%的患者发现时已处于晚期[1-2]。胸腔积液是晚期非小细胞肺癌最常见的临床表现之一。现阶段，国内学者对胸腔积液诊断技术有诸多的研究报道，但是尚未形成统一观点，在鉴别胸腔积液性质上仍然存在诸多争议[3-4]。传统细胞学检查只能确诊肺癌，并不能明确病灶位置。然而，细胞蜡块切片可多次切片，能够融合免疫组织化学技术与细胞蜡块切片技术，而且可实现组织学活检，有利于明确肺癌病情发展分型、明确病灶位置，有助于临床制订个体化治疗。该种检查方法可应用于不易获取组织标本的肺癌患者中[5]。本研究采用细胞蜡块切片进行免疫组织化学染色，观察癌胚抗原（CEA）、甲状腺转录因子（1TTF-1）、上皮钙黏素（E-cadherin），目的在于鉴别胸腔积液的性质，现报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料

选择2020年1月至2021年7月在梅州市中医医院进行病理形态学诊断且有病理诊断结果的100例患者胸腔积液的标本。根据病理结果将研究对象分为三组：恶性组（n=35）、可疑组（n=34）、良性组（n=31）。恶性组男21例，女14例;年龄26～88岁，平均（56.53±5.75）岁;9例小细胞肺癌，26例肺腺癌。可疑组男20例，女14例;年龄27～87岁，平均（55.86±6.46）岁;26例肺腺癌，8例可疑病例（包括1例重症肺炎、2例非霍奇金淋巴瘤、5例肺腺癌）。良性组男19例，女12例;年龄28～87岁，平均（56.93±5.74）岁;11例肺结核，20例肺炎。三组患者一般资料比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。本研究经相关医学伦理委员会批准，参与研究者均知情同意。

纳入标准：通过临床症状、纤支镜等检查确诊。排除标准：1病历资料不完整者;2有乳腺癌、结肠癌、宫颈癌等恶性肿瘤病史者;3检测到的癌细胞数量较少者。全部受检者均满足上述病例选择标准，且都经我院病理医师诊断。

1.2标本来源

全部受检者的胸腔积液抽取均由经验丰富的超声科医师在B超定位引导下完成操作，经脱落细胞学检查后取剩余100ml标本，经离心、包埋、切片、免疫组织化学染色。

1.3胸腔积液细胞蜡块制备方法

1取约12ml癌性胸腔积液至离心管，置入离心机离心，弃上清;2加入4%甲醛，震荡;3静置30min，离心，弃上清，显微镜擦镜纸包埋沉渣，4%甲醛固定，取材，脱水，制成石蜡细胞块。

1.4免疫组织化学染色

采集标本，切片，免疫组织化学检查采用SP法，每例均标记癌胚抗原（CEA）、甲状腺转录因子1（TTF-1）、上皮钙黏素（E-cadherin），染色步骤严格按照试剂盒说明进行操作，实施显色、脱水、复染及封固等处理后，以PBS液作为阴性对照。

1.5结果判定

传统细胞涂片法及细胞蜡块法[6-8]：根据光学显微镜下细胞异型性、核分裂象数量、细胞质与细胞核比例等综合判断结果，有恶性肿瘤细胞、核异质、未见癌细胞。阳性：细胞膜、细胞核或细胞质可观察到明显变为黄色或者棕褐色，着色细胞数占比>20%;阴性：细胞膜、细胞核或细胞质可观察到轻微着色，或者无细胞着色，而且着色细胞占比≤20%。

1.6观察指标及评价标准

1不同组别免疫细胞化学染色情况：比较TTF-1、CEA、E-cadherin表达阳性率。2不同标志物对恶性胸腔积液的诊断效能（灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、诊断准确度）：真阳性为a，假阳性为b，假阴性为c，真阴性为d。灵敏度=a/（a+c）×100%，特异度=d/（b+d）×100%，阳性预测值=a/（a+b）×100%，陰性预测值=d/（c+d）×100%，诊断准确度=（a+d）/总例数×100%。3对100标本进行免疫细胞化学与细胞病理形态学比较。

1.7统计学方法

采用SPSS26.0统计学软件处理数据，计量资料采用均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用独立样本t检验。计数资料采用[n（%）]表示，采用χ2检验或Fisher确切概率法。以病理诊断为金标准，用受试者操作特征（ROC）曲线来进行3种免疫标志物对肺腺癌诊断效果的评价，计算灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、诊断准确度以及曲线下面积（AUC），P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1不同组别免疫细胞化学染色情况

TTF-1细胞核着色，表现为棕黄色，CEA、E-cadherin细胞质着色，表现为棕黄色。恶性组TTF-1、CEA、E-cadherin表达阳性率较良性组高，差异有统计学意义（P<0.05）。可疑组中，26例可疑肺腺癌TTF-1、CEA、E-cadherin均呈高表达，8例可疑癌仅1例表达CEA，TTF-1、E-cadherin均无表达，可疑肺腺癌TTF-1、CEA、E-cadherin表达阳性率较可疑癌高，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。

2.2不同标志物对恶性胸腔积液的诊断效能

TTF-1、CEA、E-cadherin联合诊断的诊断效能较单一指标高，差异有统计学意义（P<0.05）。其中，三者联合诊断恶性胸腔积液灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、诊断准确度分别为98.90%、100%、100%、87.50%、98.98%。见表2～3。

2.3免疫细胞化学与细胞病理形态学比较

免疫细胞化学与细胞病理形态学联合诊断的阳性率为81.00%，高于单一免疫细胞学、细胞病理形态学检测的79.00%、56.00%（P<0.05）。见表4。TTF-1、CEA在腺癌细胞中的表达（IHC×400）见图1～2。

3讨论

胸腔积液发生与癌细胞的繁殖有紧密联系，而且与新生血管形成有关。胸腔积液患者尽早诊断病变性质有助于制订个体化治疗方案，进而有助于提高其预后效果[9-10]。可见，探究有效诊治技术鉴别胸腔积液性质尤为重要[11]。

目前，临床主要采用细胞学涂片检验，其操作方便，但受到检验操作者技术的影响，不同检验操作者水平不同，涂片技术差异，导致细胞涂片厚度不一致，细胞重叠，结构比较模糊，难以遮掩癌细胞，增加临床医师诊断难度。细胞蜡块技术既能够检测出恶性肿瘤细胞，而且可以重复多次取标本。

HE染色细胞不存在变性及皱缩，能够展开免疫组织化学标记，提高诊断准确性，明确病灶原发部位，但是研究较少[12-13]。目前大部分对TTF-1、CEA和E-cadherin的研究是在肺腺癌组织蜡块中，而在肺腺癌胸腔积液细胞蜡块中研究甚少，且对三种标志物联合检测的研究目前空白。

本研究结果显示，可疑肺腺癌TTF-1、CEA、E-cadherin表达阳性率较可疑癌高（P<0.05）。其中，CEA能存在于消化系统癌及正常消化管组织中，并且人类血清中也存在微量CEA，其属于一种具有人类胚胎抗原决定簇的酸性糖蛋白[14]。由于鳞癌和间皮原性细胞含有CEA，因此，免疫组织化学染色中CEA是鉴别间皮瘤、鳞癌及转移性腺癌的常见指标。TTF-1是诊断肺癌最常用的免疫组织化学标志物之一，其在大部分甲状腺癌中都有表达，在60%～90%的肺腺癌、90%的小细胞肺癌中表达，而在其他部位肺癌中很少表达[15-16]。E-cadherin的缺失，是上皮间质转化的重要信号标识，E-cadherin分子表达水平的降低有利于恶性肿瘤细胞脱落侵入细胞间质。本研究结果显示，免疫细胞化学与细胞病理形态学联合诊断的阳性率为81.00%，较单一免疫细胞学、细胞病理形态学检测检出的阳性率高（P<0.05）。

综上所述，细胞蜡块联合CEA、TTF-1、E-cadherin在肺腺癌胸腔积液病理诊断中，具有较高的诊断效能。

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