急性加重期慢性阻塞性肺疾病患者SAA、MYD88及纤维蛋白原的水平及相关性

缪冬冬，崔芳芳，张传红 (南京市浦口区中医院,江苏 南京 211800)

慢性阻塞性肺疾病(COPD)好发于老年人群，主要原因为当身体各项功能开始下降，尤其是免疫功能使得病原感染严重，在这种情况下极易导致出现呼吸道感染类疾病[1-2]。而COPD作为一种较典型的慢性呼吸系统疾病，其主要症状表现为较长时间的咳嗽、咳痰以及气促等，极大影响着患者的生活水平[3-4]。相关统计显示，造成患者死亡的原因，COPD在全球排名中进入前3名[5-6]。由于COPD的病理表现不同，临床上将COPD分为稳定期与急性加重期，其中大部分患者处在稳定期。该时期临床表现较轻，各项指标较为稳定，而COPD急性加重期由稳定期突然加重造成，肺功能进行性降低，具有反复性，严重情况下容易导致肺心病及呼吸衰竭，严重更会威胁生命[7]。因此，通过指标观察COPD病情发展情况有着重要意义。本研究探讨COPD急性加重患者的淀粉样蛋白A(SAA)、髓系分化因子88(MYD88)及纤维蛋白原(Fbg)相关性，旨在为COPD进展诊断中提供应用价值。

1 资料与方法

1.1一般资料：选取2018年11月～2019年11月于我院收治的COPD患者104例为研究对象，其中COPD稳定期(稳定组)患者54例、COPD急性加重期(急性加重组)患者50例，年龄24～36岁，平均年龄(29.5±5.8)岁。另随机选取同期于本院接受体检的健康志愿者60例为健康对照组，年龄23～34岁，平均年龄(28.5±4.4)岁。各组一般资料比较差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究经本院医学伦理委员会同意。

纳入标准：符合中华医学会对COPD的诊断标准[8]。排除标准：①患有精神类疾病，无法配合本研究；②患有血液类疾病；③患有心血管疾病以及恶性肿瘤、高血压、糖尿病等；④患有肝肾功能障碍等。

1.2方法

1.2.1采集血液：清晨空腹抽取5 ml静脉血，对各组蛋白及分离淋巴细胞。使用乙二胺四乙酸二钠盐采取抗凝静脉血2 ml，之后放入淋巴细胞分离液，以1 500 r/min离心进行5 min处理，采集上层淋巴细胞，使用氯化氨溶液冰浴对红细胞破坏，然后锥虫蓝染色判定细胞活力，用含有10%小牛血清RPMI-1640培养液将细胞浓度调至1×106/ml。置入终浓度100 μg/ml植物血凝素，在37℃、5%CO2卵箱中进行培养24 h，采集上清液，-20℃环境下冻存待测。

1.2.2SAA、Fbg检测:使用酶联免疫吸附试验对SAA、Fbg进行检测，在聚苯乙烯的反应孔内加入使用50 mm碳酸盐包缓冲液稀释后抗原，进行加盖处理之后存放24 h在4℃冰箱内，第2天进行3次洗涤，然后抛干；将稀释液(pH值为7.4 0.02 mol/L Tris-HCl缓冲液)稀释的待测标本0.1 ml放入每个孔中，同时放入阳性和阴性对照标本，存放在42℃环境中60 min，移除液体后进行3次洗涤并抛干；在每个孔中放入SAA、Fbg蛋白抗体0.1 ml，存放60 min，移除液体后进行3次洗涤并抛干；在每个孔中放入低物液(0.1 mol/L的Na2HPO4,0.05 mol/L的枸橼酸)，混匀之后放入0.1 ml邻苯二胺，进行20 min遮光，再一次放入2 mol/L H2SO40.05 ml放置在每个孔内，终止反应。最后使用酶标仪检测A450值检测SAA、Fbg表达。

1.2.3MYD88检测:使用Western印迹法检测MYD88表达情况。将磷酸盐缓冲液(PBS)对标本冲洗之后裂解30 min，测定蛋白浓度。取20 μg/孔蛋白质，添加蛋白缓冲液后进行电泳，10 min后将电转膜置于10%的牛奶中浸泡，常温环境下封闭90 min。之后结合一抗、稀释，孵育1 d，取出后使用TBST液冲洗，结合二抗60 min后清洗、显色，对MYD88表达进行检测。

1.3统计学处理:采用SPSS21.0软件进行方差分析及t检验。相关性采用Pearson相关性进行分析。

2 结果

2.13组间SAA表达比较:COPD稳定组、COPD急性加重组SAA表达显著高于健康对照组，且COPD急性加重组SAA表达高于COPD稳定组，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 3组间SAA表达比较

2.23组间MYD88表达比较:COPD稳定组、COPD急性加重组MYD88表达高于健康对照组，且COPD急性加重组高于COPD稳定组，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 3组间MYD88表达比较

2.33组间Fbg表达比较:COPD稳定组、COPD急性加重组Fbg表达高于健康对照组，且COPD急性加重组Fbg表达高于COPD稳定组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 3组间Fbg表达比较

2.4COPD急性加重患者的SAA、MYD88、Fbg相关性:如图1所示，在COPD急性加重患者中SAA、MYD88表达呈正相关(r=0.288,P=0.042)；COPD急性加重患者中SAA、Fbg表达呈正相关(r=0.362,P=0.001)；COPD急性加重患者中MYD88、Fbg呈正相关(r=0.324，P=0.021)。

图1 COPD急性加重患者组织中SAA、MYD88、Fbg表达相关性

3 讨论

COPD急性加重患者是日常状况中超常恶化，在较短时间内出现咳嗽、咯痰及喘气加重等症状[9-10]。其中对呼吸道的感染是导致病情加重的主要原因之一，而引起感染是由于支气管感染，在气道黏膜器官腔与黏膜组织中较多藏着感染细菌，从而使炎性反应加重[11-12]。相关研究显示，在COPD急性加重期患者中气道感染与全身炎性反应较表现明显，炎性反应的严重程度导致病情的加重，尤其是当患者年龄增加，而不良症状也随着增加，且增加明显。在临床上COPD急性加重较为常见，患者大多患有感染及多脏器功能衰竭等不良症状，严重影响患者预后[13-14]。COPD作为异质性疾病的一种，本研究通过检测SAA、MYD88及纤维蛋白原表达，以期能够更好对对COPD病情进行指导治疗及对患者病情发展程度做出正确判断。

人们在继发性淀粉样变中认识到了SAA的作用，于1976年在血清中进行分离得到鉴定，确定是一类高度较保守的急性期蛋白家族成员[15-16]。SAA在各种哺乳类动物以及禽类中较为普遍存在，作为急性相蛋白的一种，其性质与CRP相似，是较为敏感的急性反应蛋白[17]。当急性感染或者出现炎症加重时，SAA浓度能够表达到正常值的1 000倍以上。在COPD中SAA水平的上升，能够加重炎性因子反应程度，从而影响支气管炎症。相关学者认为，SAA 在区分肺癌与其他癌症中有着重要作用，可能是肺癌的潜在指标。在对于多数疾病的诊断、治疗以及后期回访检查等有着重要意义，原因是均参与患者炎症防御、免疫应答及脂质代谢等方面。本研究显示，SAA在COPD急性加重患者中呈高表达，再次表明了SAA对于预估炎性反应程度及病情程度有着重要价值。

当COPD急性加重患者发生炎性反应时，TLR4/MYD88通路是诱发气道炎性反应的重要通路[18-19]。MYD88是机体内重要转导蛋白，在信号途径中起到关键的作用，还通过调控细胞因子的分泌影响适应性免疫应答。当炎性介质刺激到MYD88，从而使多种炎性因子被激活，使得肺部炎性反应加重。目前研究主要应用基因敲除技术用以观察在炎症反应中信号传导作用，有关COPD信号途径中的MYD88研究还相对较少，希望通过本研究MYD88来观察与COPD急性加重的关系，以期能够通过对COPD急性加重期MYD88的研究，做到预防，便于采取有效的治疗措施。本研究显示，在COPD急性加重患者中，MYD88呈高表达，说明通过检测MYD88表达能够预估COPD急性加重患者中肺部炎性反应程度。

病情的逐渐加重，导致一系列不良影响的出现。凝血、止血等一系列病理及生理在COPD病情发展过程中被刺激启动，造成肺动脉微小血栓，从而对肺动脉高压情况加重，一系列不良症状随之而来，例如呼吸衰竭、心力衰竭等，甚至会危及生命[20]。相关研究显示，通过检测COPD患者中的Fbg，能够有效观测出凝血情况[21]。当人们对COPD的深入研究，对Fbg在凝血功能中的作用越来越重视。Fbg由肝脏与巨核细胞共同合成，是凝血因子的一种。受到炎性因子的刺激情况下，Fbg会大量释放到血液中，不仅在凝血过程起到作用，还能够与血小板膜糖蛋白相结合，同时介导血小板聚集反应，影响到对血液黏滞度。当Fbg的水平升高不仅能为凝血过程提供酶促反应底物，还能够增加血液黏滞性、使得红细胞聚集。当血液流动性下降，血液大循环与微循环均受到影响，极易形成血栓。本研究显示，Fbg在COPD急性加重患者中表达较高，说明在COPD急性加重患者中通过检测Fbg情况能够判断凝血情况。

综上所述，通过对COPD中SAA、MYD88及Fbg表达检测，更好地对COPD患者进行指导治疗，能够有效预估炎性反应程度，正确判断凝血情况，及时应对患者病情程度发展。