鼻咽癌患者血清长链非编码RNA SNHG3表达水平及其临床意义

刘金莲,马水群,曾丽梅,郑雪慧,邵金扬,张 玲 (.广宁县中医院,广东 广宁 56300；.广州金域医学检验中心有限公司,广东 广州 50000)

鼻咽癌作为常见的头颈部恶性肿瘤，其发生率占头颈部恶性肿瘤的首位，对患者生存质量及生命健康威胁较大[1]。鼻咽癌发病部位隐蔽、位置较深，尤其是病灶位于鼻咽顶壁、咽隐窝处患者，早期无典型临床症状表现，早期诊断难度较大，多数患者确诊已处于晚期。血清肿瘤标志物已在鼻咽癌诊疗中不断应用，具有无创、简便及便于连续监测等优点。血清长链非编码RNA(lncRNA)SNHG3属于SNHGs家族成员，与多种癌症发生具有密切联系，但目前关于lncRNA SNHG3在鼻咽癌中的临床意义尚未明确[2-3]。本研究探讨鼻咽癌患者血清lncRNA SNHG3表达水平及其临床意义。

1 资料与方法

1.1一般资料：选择2019年3月～2021年3月于广宁县中医院治疗的200例鼻咽癌患者作为鼻咽癌组，同时选取同期于本院体检健康者200例作为对照组，本研究获本院医学伦理委员会批准。鼻咽癌组男128例，女72例；年龄28～74岁，平均年龄(48.91±5.68)岁；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期86例，Ⅲ～Ⅳ期114例。对照组男124例，女76例；年龄25～76岁，平均年龄(48.85±5.71)岁。两组性别、年龄相比差异无统计学意义(P>0.05)，有可比性。

1.2入选及排除标准：纳入标准： ①患者签署知情同意书；②年龄≥18岁；③鼻咽癌均经病理穿刺检查确诊；④精神状态良好。排除标准： ①鼻咽癌组接受过放、化疗或手术治疗；②合并其他恶性肿瘤；③严重肝、肾功能损伤；④鼻咽癌组患者近1个月内有药物服用史，对照组近3个月内有药物服用史。

1.3方法

1.3.1样本采集：采集两组空腹静脉血3 ml，3 000 r/min离心10 min分离血清，并置于-80℃保存备用。

1.3.2血清LncRNA SNHG3检测：①总RNA提取：总RNA采用TRIzol法提取，用紫外分光光度计检测A260和A280，计算两者比值，当A260/A280为1.8～2.0时表明RNA质量较好。②逆转录合成：逆转录合成cDNA采用二步法，冰上解冻模板RNA，反应体系：RNA模板2 μl，dNTP 1 μl，Oligo 1 μl，RNase-free ddH2O 14 μl，混匀后放入金属浴中65℃预热5 min，冰上冷却加入：5×PrimeScirpt缓冲液4 μl，反转录酶1 μl，RNase抑制剂0.5 μl，RNase-free ddH2O 0.5 μl；PCR反应条件：30℃ 10 min，42℃ 60 min，85℃ 5 min；将RNA逆转成cDNA。③实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测：GAPDH为内参基因，以逆转录合成cDNA为模板，反应体系：cDNA 2 μl，2×SYBR Green qPCR Mix 10 μl；正向引物1 μl，反向引物1 μl，DEPC水6 μl，反应总体积20 μl，每个目的基因做3个重复；反应条件：95℃ 10 min，95℃ 15 min，60℃ 1 min 40个循环；72℃ 30 s，启动qRT PCR仪进行PCR扩增，计算lncRNA SNHG3相对定量；以U6为内参。

1.4评价指标：①比较两组血清lncRNA SNHG3表达水平。②血清lncRNA SNHG3表达水平与鼻咽癌患者临床病理特征关系。③治疗后随访2年，依据患者是否复发分为复发组、未复发组，比较两组血清lncRNA SNHG3表达水平。

1.5统计学方法：采用SPSS22.0软件进行χ2及t检验。

2 结果

2.1鼻咽癌组与对照组血清lncRNA SNHG3表达水平对比：鼻咽癌组血清lncRNA SNHG3表达水平(126.58±30.16)高于对照组(19.85±5.34)，差异有统计学意义(t=49.280,P=0.000)。

2.2血清lncRNA SNHG3表达水平与鼻咽癌患者临床病理特征关系：TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、淋巴结转移、侵犯颈动脉鞘、侵犯颅底患者的lncRNA SNHG3表达水平高于TNM分期Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移、无侵犯颈动脉鞘、无侵犯颅底患者，差异有统计学意义(P<0.05)；不同性别及年龄患者lncRNA SNHG3表达水平对比差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 血清lncRNA SNHG3表达水平与鼻咽癌患者临床病理特征关系

2.3复发组与未复发组lncRNA SNHG3表达水平比较：治疗后随访2年，200例鼻咽癌患者中复发32例，复发率为16.00%(32/200)；复发组lncRNA SNHG3表达水平(137.25±26.92)高于未复发组(74.91±13.68)，差异有统计学意义(t=19.623，P=0.000)。

3 讨论

鼻咽癌是我国常见恶性肿瘤，其发生与环境、病毒及遗传等因素有关。多数鼻咽癌患者在确诊时已处于晚期且预后较差，采用已知的EBERs、p16、SPLUNC1等标志物诊断效能较低，故寻求一种准确的分子标志物对鼻咽癌进行早期诊断、病情评估、指导治疗尤为重要[4]。依据lncRNA从基因组中被转录位置的不同，可将其分为5大类，lncRNA能够于多个层面上调控表观遗传、转录及基因表达，在肿瘤发生过程中发挥重要作用[5]。SNHG3为新发现的一类lncRNA，位于人1号染色体短臂3区6号带，包含snoRNA-U17a、U17b两个内含子[6]。

罗涛等[7]研究中观察lncRNA SNHG3在神经胶质瘤中的表达及临床意义，研究结果显示，在神经胶质瘤组织中lncRNA SNHG3表达水平明显上调，且lncRNA SNHG3表达水平与患者不良临床预后具有密切联系。谷建斌等[8]研究中指出，胃癌组织中lncRNA SNHG3表达显著增高，且lncRNA SNHG3表达水平与肿瘤TNM分期、浸润深度及淋巴结转移等有关，故可见lncRNA SNHG3参与多种恶性肿瘤的发生发展，且可对肿瘤侵袭及转移进行评估。本研究中研究鼻咽癌患者血清lncRNA SNHG3表达水平及其临床意义，研究结果显示，鼻咽癌组患者血清lncRNA SNHG3表达水平高于对照组；TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、淋巴结转移、侵犯颈动脉鞘、侵犯颅底患者的lncRNA SNHG3表达水平高于TNM分期Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移、无侵犯颈动脉鞘、无侵犯颅底患者；复发组lncRNA SNHG3表达水平高于未复发组。提示出lncRNA SNHG3能够促进鼻咽癌发生及侵袭、转移，鼻咽癌患者血清lncRNA SNHG3呈高表达，且与患者临床分期、是否存在淋巴结转移等有关，且可对患者预后进行判断。

综上所述，鼻咽癌患者血清lncRNA SNHG3表达水平较高，且与TNM分级及淋巴结转移等病理特征有关，能够对鼻咽癌的诊断及治疗、预后判断提供依据。