CD38和CD138及MUM-1在慢性子宫内膜炎病理诊断中的应用

宣瑞红

(太原金域临床检验所有限公司，山西 太原 030032)

慢性子宫内膜炎分为非特异性子宫内膜炎和特异性子宫内膜炎，由急性子宫内膜炎迁延形成。传统意义的慢性子宫内膜炎即慢性浆细胞性子宫内膜炎，通常指非特异子宫内膜炎。诊断的依据是子宫内膜间质中淋巴细胞、浆细胞浸润，同时混有中性粒细胞。淋巴细胞弥漫分布或聚集成团，可形成淋巴滤泡。因正常内膜中可见少量淋巴细胞及淋巴滤泡，所以浆细胞的出现是诊断慢性子宫内膜炎的重要依据[1]。在苏木精-伊红染色法(HE)切片中，大量的浆细胞容易被识别，但炎症程度较轻时，浆细胞数量少或散在分布，难以识别，容易漏诊。另外，子宫内膜间质细胞有时会有浆细胞样外观[2]，又容易误诊。本研究通过评估免疫组化单克隆抗体CD38，CD138和MUM-1在检测子宫内膜间质中浆细胞的效能，探讨免疫组化在慢性子宫内膜炎病理诊断中的价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2018年1月—2021年8月3 712 例临床怀疑子宫内膜炎患者的活组织检查标本，患者年龄21～50 岁。临床表现为出血、盆腔炎、不孕、输卵管粘连。宫腔镜观察到子宫内膜局灶性或弥漫性充血、间质水肿和子宫内膜表面形成大于1 mm的息肉等[3]。所有标本均进行HE染色及单克隆抗体CD38，CD138和MUM-1的免疫组化染色，以观察子宫内膜间质中浆细胞的表达情况。

1.2 方法

子宫内膜活组织检查标本用10%中性甲醛固定，经脱水、石蜡包埋后切成2～3 μm的薄片，进行HE及免疫组化染色。免疫组化染色采用EnVision法，所用抗体购自北京中杉金桥生物技术有限公司。组织切片放65 ℃烤箱烤2 h，烤好的切片脱蜡至水，并进行高压锅抗原热修复，即高压修复锅内加入适量乙二胺四乙酸(EDTA)修复液，加热沸腾，至限压阀喷气转动2.5 min，冷却至室温后取出切片；在3%过氧化氢溶液中浸泡10 min，阻断内源性过氧化物酶；用磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤3次，每次3 min；滴加一抗抗体，4 ℃冰箱过夜孵育，后用PBS缓冲液洗涤3次，每次3 min，滴加通用型二抗，37 ℃恒温箱孵育40 min，再用PBS缓冲液洗涤3次，每次3 min，滴加二氨基联苯胺(DAB)工作液进行显色(5～10 min)；显微镜下控制显色效果，显色后经苏木素衬染，再脱水至透明，中性树胶封片。

1.3 诊断标准

依据2021版《妇产科病理学》对慢性子宫内膜炎的诊断标准进行评估：浆细胞、淋巴细胞为主的炎细胞浸润；子宫内膜间质充血、水肿，小血管增生，间质纤维化，局部间质崩解；子宫内膜上皮损伤性改变，表面上皮化生[1]。本研究收集3 712 例子宫内膜活组织检查标本，主要诊断依据为子宫内膜间质淋巴细胞增多，可伴有淋巴滤泡形成，间质可见浆细胞浸润，浆细胞量≥5个/HPF；次要诊断依据为间质细胞变为梭形或纤维化，可伴随子宫内膜间质充血水肿，腺体呈增殖期，表面上皮和腺上皮的反应性改变(细胞复层化和轻度细胞核增大)，嗜酸细胞化生、乳头状化生及鳞状化生，小血管的肉芽肿样增生等[1]。HE染色满足主要诊断依据，伴或不伴次要诊断依据者可直接判读为慢性子宫内膜炎；仅满足次要诊断依据，判读为可疑慢性子宫内膜炎。免疫组化：CD38以细胞膜出现棕黄色为阳性，CD138以细胞膜/细胞质出现棕黄色为阳性；MUM-1以细胞核出现棕黄色为阳性。判断标准是子宫内膜间质中每个高倍视野阳性细胞大于5个[4]。固定两名病理医师按标准进行诊断。

1.4 统计学方法

采用SPSS19.0软件包对数据进行统计学分析。计数资料以百分率(%)表示，用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

3 712 例标本中，HE染色判读为慢性子宫内膜炎447 例，阳性率为12.04%，可疑慢性子宫内膜炎572 例，阳性率为15.41%。CD38总阳性数为1 255 例，阳性率为33.81%；CD138总阳性数为897 例，阳性率为24.16%；MUM-1总阳性数为912 例，阳性率为24.57%；CD138和MUM1阳性率比较差异无统计学意义(χ2=0.164 4，P>0.05)。CD38阳性率高于CD138和MUM1，差异有统计学意义(χ2=77.203 3和76.670 9，P<0.01)。MUM-1单一阴性13 例(0.35%)，CD138单一阴性21 例(0.56%)，CD38单一阴性例数为0。MUM-1单一阴性病例与CD138单一阴性病例相比，差异无统计学意义(χ2=0.725 3，P>0.05)；MUM-1单一阴性病例与CD38单一阴性病例比较，差异有统计学意义(χ2=13.026 9，P<0.01)；CD138单一阴性病例与CD38单一阴性病例比较，差异有统计学意义(χ2=21.053 4，P<0.01)。CD38单一阳性343 例(9.24%)，CD138和MUM-1单一阳性病例数均为0。CD38单一阳性病例与CD138和MUM-1单一阳性病例相比，差异有统计学意义(χ2均为359.616 7，P<0.01)。HE判读为慢性子宫内膜炎的447 例标本中，CD138和/或MUM-1阳性者447 例，阳性率为100.00%，其中316 例患者浆细胞>20个/HPF，131 例浆细胞<20个/HPF；HE判读为可疑慢性子宫内膜炎标本472 例，CD138和/或MUM-1阳性者420 例，阳性率为88.99%，浆细胞均<20个/HPF。HE判读为阴性的2 702 例患者中，CD138和/或MUM-1阳性者51 例，阳性率为1.89%，浆细胞均<20个/HPF。最终经HE和免疫组化综合判断为慢性子宫内膜炎的病例数为918 例。慢性子宫内膜炎中浆细胞表达CD38，CD138，MUM-1及HE形态特征见图1。

(a)：CD38，EnVision法，×400；(b)：CD138，EnVision法，×400；(c)：MUM-1，EnVision法，×400；(d)：HE染色，×400图1 慢性子宫内膜炎中的浆细胞

3 讨 论

急性子宫内膜炎在临床上多伴有上行性感染，间质内大量中性粒细胞浸润，诊断标准比较明确。但慢性子宫内膜炎的诊断标准不完全统一。文献调查[4]发现，在病理学中，用于非特异性和非产科慢性子宫内膜炎的诊断标准存在很大差异。在子宫内膜活组织检查标本中，HE染色鉴定浆细胞特征比较模糊，敏感性和特异性均较差，单个散在时更加难以识别，且与子宫内膜间质细胞大小相仿，增加了识别的难度。Liu等[5]推荐子宫内膜活组织检查应进行HE染色结合CD138免疫组化。CD138免疫组化诊断标准为：高倍镜下子宫内膜间质中典型浆细胞≥5个/HPF时是浆细胞性子宫内膜炎；浆细胞<5个/HPF或未见典型浆细胞时为未见子宫内膜炎。HE染色诊断标准为子宫内膜间质中见到典型的浆细胞，核偏位，胞浆深染[4]。Rimmer等[6]认为将4～6个/HPF作为判断标准，具有最好的预测精度。免疫组化抗体CD138，MUM-1与HE染色方法相比，可以提高检测浆细胞的敏感性，提高浆细胞计数速度，减少轻症病例的漏诊，并可以降低HE染色的假阳性，避免将子宫内膜间质细胞误认为浆细胞，排除病理医生诊断的主观差异。CD38是分子量为45 kDa的跨膜糖蛋白，是淋巴细胞膜受体，表达于早期的CD34+骨髓前体细胞、胸腺细胞、活化T细胞、前B细胞、活化B细胞，包括浆细胞、单核细胞和部分外周NK细胞，免疫组化染色细胞膜呈棕黄色。CD138，又称多聚体蛋白多糖1，含有4个跨膜糖蛋白，表达于早期前体B细胞，在向浆细胞分化时重新获得表达，免疫组化染色细胞膜/细胞质呈棕黄色，比HE染色更敏感。MUM-1又称干扰素调节因子4，是淋巴细胞特异性转录因子，表达于部分生发中心B细胞、活化的T细胞、浆细胞及多种淋巴造血肿瘤，免疫组化染色细胞核呈棕黄色。Parks等[7]认为在检测子宫内膜浆细胞时MUM-1染色比CD138染色更敏感。

本研究对3 712 例临床怀疑子宫内膜炎样本进行了HE染色及免疫组化CD38，CD138，MUM-1染色，其中CD38，CD138，MUM-1任意两个抗体阳性者891 例，HE染色观察到浆细胞，可确诊为慢性子宫内膜炎；仅CD38阳性343 例，经HE染色证实CD38阳性者并非全浆细胞；2 444 例任何抗体未见阳性表达，排除了慢性子宫内膜炎，HE染色也未找到浆细胞。免疫组化CD38除浆细胞外，多种其他类型炎症细胞也可表达，提示特异性较差；免疫组化CD138浆细胞和上皮细胞虽然均可表达，但子宫内膜上皮细胞的腺样结构比较容易识别，不会对浆细胞造成干扰；MUM-1主要表达在细胞核，细胞质染色稍浅，容易识别是否为浆细胞。由此可见，CD38谱系较广，对浆细胞的特异性较差，不建议单独使用，而免疫组化CD138和MUM-1能较好地识别浆细胞，准确性较高，可作为慢性(浆细胞)性子宫内膜炎的辅助诊断。