超高效液相色谱-串联质谱法测定叔胺类药品中硫酸二甲酯基因毒性杂质

胡睿　冯笑

摘要：碘海醇（Iohexol）和碘帕醇（Iopamidol）属于第二代碘造影剂，是目前最为畅销的造影剂，通常在进行CT造影诊断前注入静脉，用于血管、泌尿系统、脊髓及股关节、淋巴系统造影，具有造影密度低，毒性低，耐受性好等优点，在发达国家已全面取代了离子型造影剂。根据Newport数据，2018年全球碘海醇制劑规模超过12亿美元。中国医药工业信息中心数据显示，2019年国内X射线造影剂市场规模约为139.45亿元，其中碘帕醇的市场规模约为15.13亿元。本文对超高效液相色谱-串联质谱法测定叔胺类药品中硫酸二甲酯基因毒性杂质进行分析，以供参考。

关键词：超高效液相色谱⁃串联质谱;衍生;硫酸二甲酯

引言

超高效液相色谱-串行光谱（UPLC-MS/MS/MS）检测分析技术具有高效分离度和超高灵敏度的优点，大大提高了数据分析和测试的可靠性和耐久性，提高了目标化合物的分析效率和准确性，是分析测试领域的综合分析手段。近年来，UPLC-MS/MS分析技术广泛应用于医药、化学工程、生物工程、保健食品、特殊材料等多个领域，特别是化学和医药产品的检测和残留分析，以UPLC-MS/MS得到了极大的提高和改进。

1概述

磺胺类抗生素是一类具有对位氨基苯磺酰胺结构的抗生素总称，是一类用于预防和治疗细菌感染性疾病的化学治疗药物。磺胺药是现代医学中常用的一类抗菌药物，具有抗菌谱广、可以口服、吸收较迅速、较为稳定、不易变质等优点，被广泛应用于预防和控制水产养殖过程中的各种动物疾病，除此之外，还被认为是一种饲料添加剂以促进水产养殖动物生长。其作用原理是通过竞争性阻抑叶酸循环过程中的对氨基苯甲酸来达到减少和杀灭细菌核蛋白的目的。此类人工合成的抗生素具有价格低、抗菌范围广、高效、不易分解等特点，但其在动物体内具有作用时间较长、较慢代谢速率等问题，一部分会在动物体内残留，另一部分会随排泄物以原型或代谢物的形式排出体外。过量使用磺胺类抗生素会对环境造成一定程度的污染，进而通过食物链在人体内蓄积从而对人体健康造成潜在威胁。磺胺类抗生素长期存在于人类体内会引起急性或慢性中毒，还会影响机体的泌尿、免疫系统，破坏人体的造血系统或产生耐药性等。针对动物组织及牛奶中的磺胺类抗生素，欧盟规定其最大残留量为100μg/kg。我国国家标准GB31650-2019制订了在动物性食品中磺胺二甲嘧啶的限量为25～100μg/kg，其他磺胺类抗生素残留总和为100μg/kg。目前，对鱼肉中磺胺类抗生素的检测多为其中一种或几种，同时对20种以上磺胺类抗生素的检测报道较少。而且与文献报道的检测鱼肉中磺胺类抗生素的液液萃取法、加速溶剂萃取法、固相萃取法等前处理技术相比，QuEChERS法具有操作简便、无需昂贵的仪器、试验成本低、应用范围广等优点。近年来，磺胺类抗生素的检测方法主要有高效液相色谱法（HPLC）、液相色谱-串联质谱法（LCMS/MS）、毛细管电泳法等。其中，液相色谱-串联质谱法具有灵敏度高、准确度好、能同时分析多种痕量物质等优点，适用于多种磺胺类抗生素的检测。如：HOFF等基于液相色谱-串联质谱技术发展了一种测定牛肝中6种磺胺类抗生素的新方法;建立了超高效液相色谱-串联质谱法分析了畜禽粪便中17种磺胺类抗生素;发展了液相色谱串联质谱法测定牛奶中11种磺胺类抗生素的检测新方法。

2 UPLC-MS/MS应用于人体化学药品的检测

2.1 UPLC-MS/MS检测抗菌药物

宝佳康蒂唑是一种三唑醇广谱抗真菌药物，具有功效、广谱和低毒性等特点。检测人体血浆中的药物浓度对于监测药物吸收情况和指导临床药物的安全性特别重要。采用高度特异性和敏感性的UPLC-MS/MS法研制了测定血浆中普拉沙唑浓度的方法。该方法为监测praxanax的药物浓度提供了参考值。诺氟沙星是一种非常有效的第三代抗菌药物，对细菌具有显着的抑制作用，是肠道痢疾等疾病的常规治疗方法。但是，其副作用是显而易见的，特别是需要推迟未成年人的骨骼形成并影响身体的正常发育，因此未成年人不得服用这种药物。测量人类血浆中的诺氟沙星浓度很重要。使用UPLC-MS/MS测定了人体血浆中的诺氟沙星浓度。使用甲醇作为沉淀剂来预处理血浆样本，结果表明诺氟沙星与峰面积比值呈现良好的线性关系。批中的精密度RSD小于或等于3.35%，批间的精密度RSD小于或等于5.12%。测试方法简单方便。

2.2 UPLC-MS/MS用于检测艾滋病毒感染

艾滋病是当今威胁全球健康的主要疾病之一，是由艾滋病病毒感染造成的，它攻击人类免疫系统中的临界CD4T淋巴细胞。研究表明，人发中的药物水平与抗逆转录病毒治疗的有效性呈正相关。一种高效检测头发中四种抗艾滋病毒药物含量的方法，采用UPLC-MS/MS法，如lopinavir、ritonavir、zidovudine和weilun法。

3实验部分

ABSCIEXTripleQuad6500+超高效液相色谱⁃三重四极杆质谱联用仪（AB公司;美国）;XSE205电子天平（MettlerToledo公司，瑞士）;KQ⁃300GDV型恒温数控超声器（昆山市超声仪器有限公司）;Vor⁃tex⁃6涡旋振荡器（海门市其林贝尔仪器制造有限公司）。甲醇、丙酮（色谱纯，美国赛默飞公司），甲酸（色谱纯，美国ACS公司），乙酸铵（色谱纯，国药集团化学试剂有限公司）。

4讨论

4.1氨基比林衍生剂的选择

吡啶是硫酸二甲酯发生甲基化反应的常用底物，是一个含有氮杂原子的六元杂环化合物，具有芳香性，而本研究发现的氨基比林为含有α，β不饱和酮结构的脂肪胺，吡啶环上的N原子相比氨基比林上的N原子因电子云轨道杂化、空间位置不同而活性较低，且硫酸二甲酯与胺的反应属于双分子亲核取代（SN2）反应，在SN2反应中，氨基比林表现出更强的亲核性，反应能够快速进行。与吡啶相比，氨基比林与硫酸二甲酯反应不需要高温，较低温度有利于硫酸二甲酯的稳定。吡啶与硫酸二甲酯反应后产物具有季铵盐的特性，但生成的季铵盐不利于其芳香性的保持，不够稳定，但是氨基比林生成的脂肪胺季铵盐稳定性好，因此本研究选取的氨基比林更适合作为甲基化试剂用于硫酸二甲酯的检测。

4.2检出限和定量限

基于空白溶液中存在本底峰，检出限和定量限采用《中国药典》2020年版四部通则9101中“基于响应值标准偏差和标准曲线斜率法”测定。取空白溶液连续进样7次。

结束语

本文建立了超高效液相色谱⁃串联质谱测定氨基比林等叔胺类药品中硫酸二甲酯基因毒杂质含量的检测方法，该方法将氨基比林作为衍生剂，与药品中残留的硫酸二甲酯发生反应生成甲基化氨基比林，通过检测甲基化氨基比林间接测得药品中硫酸二甲酯的含量，进行了方法学验证，并将方法用于实际样品的测定。与现有技术相比，该方法离子峰峰形好，无其他碎片杂峰干扰，方法灵敏度高、精密度和重复性好，结果可靠，可用于氨基比林等药品中硫酸二甲酯基因毒杂质的测定。本研究有助于药品生产企业对生产工艺中基因毒杂质的控制，同时为药品监管提供技术支撑。

参考文献

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