糖槭多糖体外抗氧化活性研究★

2022-07-06王朝兴王萧鸣王宇亮

山西化工 2022年3期

关键词：超氧苯三酚缓冲液

王朝兴，王萧鸣，赵宏，王宇亮

（黑龙江省新药创制与药效毒理评价重点实验室佳木斯大学，黑龙江佳木斯 154007）

畜禽行业禁用抗生素产品的政策已经颁发执行，研究新的畜禽饲用产品代理抗生素是目前畜禽行业发展刻不容缓的问题[1-2]。

糖槭是槭树科槭属落叶乔木植物，学者们从中提取得到了多种生物活性成分[3]，其中多糖因结构的复杂性，使得研究进展缓慢，给其多种生物活性作用机制的研究带来难度[4-5]。

本文有针对性地研究糖槭热提总多糖在体外抗氧化活性的影响[6]，筛选出糖槭多糖中调节肠道微生态菌群平衡的药效物质基础，为进一步研究其调节肠道微生态菌群平衡的作用机制及药用植物饲料在减抗、替抗的综合性开发利用领域奠定基础[7]。

1 仪器与材料

糖槭叶于2018 年9 月采于佳木斯大学校园，经药学院张宇教授鉴定为槭树科Aceraceae 槭属Acer落叶乔木植物糖槭Acer Saccharum 的干燥叶子。DPPH、维生素C、Tris-HCl 缓冲液等，购于上海源叶生物科技有限公司。

SP-756P 型紫外可见分光光度计；上海光谱仪器有限公司。

2 实验方法

2.1 体外抗氧化实验

2.1.1 对DPPH 自由基的清除实验

分别取不同质量浓度糖槭均一多糖样品（0.05、0.10、0.20、0.40 和0.80 mg/mL）2 mL 与2 mL 0.20 mmol/L DPPH，混匀，于37 ℃温度环境下避光静置30 min，用甲醇（2 mL）和蒸馏水（2 mL）调零，在波长517 nm 处记录吸光值。

配制同浓度Vc 溶液，根据上述方法开展实验。清除率公式如式（1）：式中：Ac是蒸馏水（2 mL）中加DPPH 溶液（2 mL）的吸光度；Ai是多糖（2 mL）中加DPPH 溶液（2 mL）的吸光度。

2.1.2 糖槭均一多糖对超氧阴离子自由基的清除实验

精确加入2.5 mL Tris-盐酸缓冲液（浓度50 mmol/L，pH=8.2），然后加蒸馏水（1 mL），两者混合均匀，于25 ℃水浴加热20 min。取出，快速加入100 μL邻苯三酚溶液（经25 ℃预热，浓度5 mmol/L；以pH=8.2的Tris-盐酸缓冲液为试剂的空白对照）。摇匀之后，即刻倒在比色皿中，每隔30 s 在波长为320 nm 下进行扫描测定试液的吸光度（总时间为5 min）。

精确加入2.5 mL Tris-盐酸缓冲液（浓度50 mmol/L，pH=8.2），再分别加入不同浓度的多糖溶液（体积均为1 mL，质量浓度分别为1、2、3、4、5 mg/mL），再参考邻苯三酚的测定步骤操作。配备同浓度Vc 溶液，按照上述方法开展实验，清除率公式如式（2）。

式中：ΔA0/Δt 为平行对照组中，某时间段内，邻苯三酚的自氧化速率；ΔAi/Δt 为加入样品后，在该时间段内，邻苯三酚的自氧化速率。

2.2 方法统计

实验所得数据采用“平均数±标准差”表示。以SPSS17.0 软件为工具对数据进行统计学分析，两组别之间的比较采取两样本t 检验，多组别之间的比较采取方差分析。差异有显著性以P＜0.05 表示，差异极显著以P＜0.01 表示，两种表示方法均具有统计学意义。

3 结果与分析

3.1 糖槭均一多糖对DPPH 自由基的清除作用结果

ASP-A-c、ASP-A-d 和ASP-A-e 对DPPH 作用结果，见第10 页图1-1。从图中可见，样品ASP-A-c、ASP-A-d 和ASP-A-e 均有清除作用。0 mg/mL～0.1 mg/mL 质量浓度范围时，所有实验样品的清除作用得到快速提升；0.1 mg/mL～0.8 mg/mL 质量浓度范围时，所有实验样品的清除作用变成缓缓提升，之后达到稳定；当质量浓度为0.8 mg/mL 时，Vc 清除率达94.1%，多糖样品中的ASP-A-d 最高清除率是55.3%，ASP-A-c 次之。

3.2 糖槭均一多糖对超氧阴离子的清除作用结果

ASP-A-c、ASP-A-d 和ASP-A-e 对超氧阴离子作用结果，见图1-2。从图中可见，样品ASP-A-c、ASP-A-d 和ASP-A-e 均有清除作用。当多糖浓度增加时，多糖对超氧阴离子的清除作用分别增大。多糖质量浓度为5 mg/mL 时，Vc 清除率高达96.5%，多糖样品中的ASP-A-c 最高清除率是51.3%，ASP-A-d次之。