早发性癫痫脑病患儿SCN1A CDKL5基因突变特点与临床特征

廖赵妹， 蔡思铭， 陈剑标， 吕华龙， 雷智贤

(1.海南医学院第二附属医院儿科一区， 海南 海口 5701002.海南医学院附属儿童医院儿科， 海南 海口 570100)

癫痫(epilepsy)是一种受到多种因素影响造成的脑内异常过度神经元活动所引发的短暂性放电症状疾病，由于异常放电部位不同，扩散网络堵塞息息相关，因而患者疾病发作时的表现形态、感觉知觉、精神状态和行为意识均有不同[1,2]。早发性癫痫脑病(EOEE)是在患儿出生后几个月内出现的癫痫疾病，由于患儿脑部及机体功能发育尚不完全，疾病发作时的频繁放电异常将导致脑部发育迟缓或感知觉、认知功能、运动功能障碍。癫痫类疾病大多存在多种病因，在目前已知的癫痫类疾病中，大田原综合征、早期肌阵挛脑病、婴儿痉挛症、Dravet综合征以及各类尚未命名的非特异性癫痫脑病，其发病机制除了特定状态下出现的遗传、脑损伤、感染等因素，其他较为复杂的临床症状原因尚且不明[3]。基于此，本实验选取我院2018年4月至2019年4月期间收治的40例早发性癫痫脑病患儿临床资料作为研究对象，采用基因筛选技术检查EOEE患儿出现SCN1A、CDKL5基因突变的临床特征，旨在为EOEE患儿临床诊疗提供参考依据。具体研究报告如下：

1 资料与方法

1.1一般资料:选取我院2018年4月至2019年4月期间收治的40例早发性癫痫脑病患儿临床资料作为研究对象，采集患儿父母外周血进行sanger测序排查。纳入标准：①患儿出生1年半内出现惊厥现象；②可合并有多类型癫痫发作情况，在常规癫痫疾病药物作用下疾病未好转；③表现为脑智力落后或运动功能停滞等。排除标准：①遗传性代谢障碍；②围生期内发生的脑部损伤；③孕期内出现宫内感染；④经脑部影像学诊断为脑部结构异常所引发的新生儿癫痫。本次实验已征得本院医学伦理会批准同意，所有患儿家属均对本实验目的及相关内容知情，并自愿签署知情同意书。

1.2方法:在家属积极配合下采集患儿以及父母外周血各3mL，采集完成后用二胺四乙酸(EDTA)抗凝试管保存送往基因检测中心进行癫痫基因包检测。患儿外周血采用靶向二代测序技术分析患儿癫痫基因，父母外周血采用sanger测序排查，根据现有人类基因突变数据库等数据对比分析，确定患儿存在致病可以和疑似致病可能的基因突变。此外，检测为基因突变阴性的患儿采用多重连接探针扩增技术(MLPA)行大片基因段变异检查，以此排除单核苷酸多态性存在。采用TIANGEN DNA提取试剂盒(北京天根生化科技有限公司)检测患儿外周血所提取的全基因组DNA，具体步骤按照试剂盒说明书严格执行。获取截至本实验时间的最新文献资料和数据库资料，将本实验中靶向二代测序技术分析所得的人类癫痫相关基因，转入基因测序包(京德易东方转化医学研究中心有限公司)，对所有癫痫相关基因进行文库整理和编码测序[4,5]。

1.3临床表现:对所有癫痫阳性基因突变患儿的临床表型资料进行分析，包括患儿的首次癫痫发作时间、癫痫发作类型、用药情况、智力发育和运动情况等。

2 结 果

2.1一般资料:本研究中，患儿男12例，女28例，疾病发作并接受诊疗时间为出生6d至18个月(10.11±4.29)个月。经诊断，出现婴儿痉挛症患儿23例，非特异性EOEE患儿10例，Dravet综合征4例，大田原综合征患儿3例。所有患儿父母均排除近亲婚配生育，且家族内未发现癫痫或神经疾病史。

2.2SCNIA、CDKL5基因突变特点:本研究发现32例(80.00%)SCNIA、CDKL5基因突变，有17例(42.50%)患儿SCNIA基因突变，15例(37.50%)患儿CDKL5基因突变，其中男11例(SCNIA基因突变5例，CDKL5基因突变6例)，女21例(SCNIA突变12例，CDKL5突变9例)。采用Sanger测序法检测基因突变的类型，发现17例(42.50%)错义突变，3例(7.50%)插入突变，3例(7.50%)无义突变，3例(7.50%)剪切位点突变，6例(15.00%)微小缺失突变，未发现大片基因段缺失，见表1。所有患儿父母外周血基因检测均未发现SCNIA、CDKL5基因突变，表明患儿SCNIA、CDKL5基因为新生突变。

表1 SCNIA CDKL5基因突变特点n(%)

2.3SCNIA、CDKL5基因突变患儿临床特征:32例SCNIA、CDKL5基因突变的患儿中，患儿均在10d至3个月内第一次发病，且患儿发病时可出现两种以上癫痫发作类型。有27例(84.38%)患儿首次发病出现无热惊厥，6例(18.75%)患儿伴有强直阵挛，3例(9.38%)患儿伴有全身痉挛，随着病情发展有5例(15.63%)患儿出现痉挛。在药物方面，根据患儿具体情况对患儿施以2～8种抗癫痫类药物治疗，其中疾病发作低于50%并被认定为有效药物治疗的有：托吡酯27例(67.50%)，丙戊酸钠19例(47.50%)，氯硝西泮17例(42.50%)。此外，有2例(5.00%)患儿经生酮食疗，但临床疗效不明显。32例SCNIA、CDKL5基因突变患者存在不同程度的智力发育落后情况，尚无患儿具备有意义语言和独立行走能力，21例(65.63%)患儿独坐时间明显低于同年龄正常儿童，28例(87.50%)患儿具有孤独症征兆，11例(34.38%)存在手足功能低和身体发育缓慢现象。见表2。

表2 SCNIA CDKL5基因突变患儿临床特征

3 讨 论

早发性癫痫脑病(EOEE)是一类癫痫疾病的综合，除了非特异性癫痫脑病，目前已确定的有Dravet综合征、婴儿痉挛症、大田原综合征和阵挛性脑病等癫痫疾病。临床研究发现，基因突变是导致癫痫的重要原因，EOEE疾病发作时脑部异常放电现象与脑神经元的分化迁移、神经递质的合成释放过程、突触的产生修剪以及细胞膜的结构等多种基因有关，因而检测相关基因异常尤为重要[6,7]。康庆云[8]等在研究癫痫疾病患儿SCNIA基因突变时发现，钠通道蛋白编码基因(Sodium Voltage-Gated Channel Alpha Subunit 1，SCN1A )与Dravet综合征发作有关，可通过细胞内外物质交换过程干扰基因编码钠通道α亚基，致使患儿全身癫痫发作，因而需对尚未明确基因缺陷的EOEE患儿进行SCNlA基因检测。此外，细胞周期依赖激酶样5(cyclin-dependent kinase-like 5，CDKL5)被认为与EOEE患儿早发性惊厥有关，主要表型为婴儿痉挛症、Hanefeld型不典型Rett综合征和孤独症障碍，可通过影响遗传基因表达致使患者发育阻滞和智力损伤[9]。

本实验研究已在我院确诊并接受治疗的40例早发性癫痫脑病患儿，共发现32例(80.00%)SCNIA、CDKL5基因突变，其中男12例，女28例，疾病发作并接受诊疗时间分别为出生6d至18个月(10.11±4.29)个月。在32例基因突变患儿中，婴儿痉挛症患儿有23例，非特异性EOEE患儿10例，Dravet综合征4例，大田原综合征患儿3例，在发现的突变类型中，有17例(42.50%)错义突变，3例(7.50%)插入突变，3例(7.50%)无义突变，3例(7.50%)剪切位点突变，6例(15.00%)微小缺失突变。经排查发现，所有患儿的父母均非近亲婚配生育，且家族内未发现癫痫或神经疾病史。这说明，该32例患儿的SCNIA、CDKL5基因突变均为新生突变，且EOEE患儿癫痫发作类型多样,发育落后,需及早完善基因筛查[10]。在王翠[11]等对Dravet综合征患儿SCNIA基因突变特点的研究结论中，患儿大多出现无热惊厥、肌阵挛和行为运动障碍，与梅道启[12]等研究CDKL5基因突变出现的惊厥、目光对视无神、身体生长缓慢、手足动作刻板等临床症状相似。在本实验中，32例SCNIA、CDKL5基因突变患者存在不同程度的智力发育落后情况，尚无患儿具备有意义语言和独立行走能力，21例(65.63%)患儿独坐时间明显低于同年龄正常儿童，28例(87.50%)患儿具有孤独症征兆，11例(34.38%)存在手足功能低刻板和身体发育缓慢两组基因突变类型患儿均出现不同程度的惊厥、强直阵和全身痉挛，与上述研究结果一致。该实验结果表明，患儿在发病阶段可出现两种以上癫痫发作类型，且可能由两个或两个以上基因突变造成。此外，本实验32例SCNIA、CDKL5基因突变患儿中，SCNIA基因突变17例(42.50%)，1CDKL5基因突变5例(37.50%)，其中男11例(SCNIA基因突变5例，CDKL5基因突变6例)，女21例(SCNIA突变12例，CDKL5突变9例)。从该结果中可发现，SCNIA、CDKL5基因突变中女性患儿数量要多于男性，且女性CDKL5基因突变在两种基因突变中的比例要大于男性。初步分析，女性CDKL5突变率大于男性可能是受到染色体影响，与男性的一条X染色体相比，女性具有两条。当其中一条X染色体基因突变时，另一X染色体基因起到起代偿作用，使得女性仅发生错义突变而不致病。但是，本实验主要目的是探究EOEE患儿SCN1A、CDKL5基因突变的临床特征，为获取不同性别之间的SCN1A、CDKL5基因突变差异，还需扩大样本做进一步分析。

综上所述，SCN1A、CDKL5基因突变相关的EOEE疾病在患儿群体中发病形式多样，严重影响患儿的生长发育过程，需在早期抗癫痫药物和食疗基础上探索更加针对性的治疗方法，以此对症治疗。此外，男女不同性别所导致的SCN1A、CDKL5基因突变致病机制有可能存在差异，为获取更加具体、真实的研究数据还需大样本做进一步分析。