食管鳞状细胞癌组织PTOV1，IGBP1的表达与临床病理特征和预后相关性研究

徐 超，徐 珊，窦 燕，闫玲新，孔晓明，郭改莉（邯郸市中心医院消化科，河北邯郸 056001）

食管癌是临床上常见的恶性肿瘤，据有关调查统计数据显示，2018年全球食管癌的新发病例数为57.20万人，死亡人数50.90万例，严重危害人们的健康[1]。近年来，随着治疗技术的不断发展，大量的食管癌患者均可得到有效的治疗，但由于食管癌早期临床症状隐匿，大部分患者发现时已处于中晚期，患者预后普遍较差[2]。因此，寻找食管癌早期诊断及预后判断的标志物对于提高患者生存率具有重要意义。前列腺肿瘤过表达蛋白1(prostate tumor overexpressed 1, PTOV1)是一种保守的衔接蛋白，最初在前列腺癌中发现，具有调节细胞周期，促进细胞有丝分裂的作用[3]。目前已有研究报道，在宫颈癌[4]、卵巢癌[5]、前列腺癌[6]中存在PTOV1高表达。免疫球蛋白结合蛋白1(immunoglobulin binding protein，IGBP1)是一种在多种组织中广泛存在的蛋白，具有抗凋亡、调节细胞周期的作用，鳞状细胞癌是食管癌的主要类型，占食管癌的90%以上，食管癌的发生与细胞有丝分裂异常、增殖和凋亡失衡等有密切关系[7]。PTOV1和IGBP1在食管癌的发生发展中可能起到重要的作用，但目前国内对于食管鳞状细胞癌组织中PTOV1，IGBP1表达情况及与临床病理特征和预后的关系尚未见报道。鉴于此，本研究探讨食管鳞状细胞癌组织PTOV1，IGBP1的表达及与临床病理特征和预后不良的关系，旨在为食管鳞状细胞癌的临床诊治提供依据，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选择2013年6月～2015年11月期间邯郸市中心医院收治的食管鳞状细胞癌患者70例，其中男性45例、女性25例，年龄40～79（59.82±7.69）岁；肿瘤大小：≤2cm 28例、＞2cm 42例；组织学分级：低分化38例、中分化22例、高分化10例；TNM分期：Ⅰ期12例、Ⅱ期26例、Ⅲ期32例。纳入标准：①所有患者均符合《病理学》中的食管鳞状细胞癌的有关规定[8]，经腹、右胸两切口食管鳞状细胞癌切除手术治疗，术后经病理确诊为食管鳞状细胞癌；②患者初次发病，具有肿瘤组织及对应癌旁组织（距离肿瘤边缘＞3cm），病历资料完整；③患者术前未经放疗、化疗及免疫治疗；④患者及其家属对研究知情同意且签署同意书。排除标准：①治疗时并发其他系统肿瘤者；②病情严重，预计生存期＜6个月者；③并发免疫系统疾病及血液系统疾病者。本研究经过邯郸市中心医院伦理学委员会审查同意。

1.2 仪器与试剂 兔抗人PTOV1单克隆抗体（上海邦景实业有限公司），兔抗人IGBP1单克隆抗体（上海泽叶生物科技有限公司），DAB显色液（武汉纯度生物科技有限公司），免疫组化染色试剂盒（武汉纯度生物科技有限公司），IXplore Pro倒置显微镜（日本Olympus）。

1.3 方法

1.3.1 免疫组织化学SP法：将手术切除的癌组织、癌旁组织经10g/dl中性甲醛溶液固定，石蜡包埋，制成4μm连续切片。经过梯度乙醇水化，3g/dl H2O2消化内源性过氧化物酶，PBS冲洗后高温高压抗原修复，加入山羊血清封闭抗原，并加入兔抗人PTOV1单克隆抗体、兔抗人IGBP1单克隆抗体，饱和湿度过夜，加入生物学二抗体，辣根过氧化物酶标记，DAB显色，苏木素复染，返蓝，梯度乙醇脱水，透明，树胶封片。

1.3.2 免疫组织化学结果判定：采用免疫组织化学半定量判定标准：①标本染色评分：以PBS代替生物学一抗作阴性对照，用试剂盒配套阳性样本作为阳性对照。无色0分，淡黄色1分，棕黄色2分，棕褐色3分；②阳性细胞比例评分：阳性细胞比例≤10% 1分；阳性细胞比例11%～50% 2分；阳性细胞比例51%～75% 3分；阳性细胞比例＞75% 4分。将两项积分乘积得总积分：0～3分为（－），4～5分为（+），6～7分为（++），8分以上为（+++）。+～+++判定为阳性[9]。

1.3.3 随访：所有患者出院后通过门诊复查或电话随访，随访5年，随访截止时间为2020年11月，患者生存时间为就诊日期至随访截止日期或死亡日期，记录患者生存情况。

1.4 统计学分析 采用SPSS23.0软件进行统计学分析。计数资料以率（%）表示，组间比较实施卡方检验。应用Kaplan-Meier法绘制生存曲线，实施Log-rank检验。应用COX比例风险回归模型分析食管鳞状细胞癌患者预后不良的危险因素。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 食管鳞状细胞癌组织及癌旁组织中PTOV1，IGBP1蛋白表达情况 见表1。食管鳞状细胞癌组织PTOV1，IGBP1蛋白阳性率显著高于癌旁组织，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。

表1 食管鳞状细胞癌组织及癌旁组织中PTOV1，IGBP1蛋白表达情况 [n=70，n(%)]

2.2 PTOV1，IGBP1蛋白与食管鳞状细胞癌患者临床病理特征的关系 见表2。不同年龄、性别、肿瘤大小食管鳞状细胞癌组织中PTOV1蛋白阳性率、IGBP1蛋白阳性率比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。组织学低分化，TNM分期Ⅲ期食管鳞状细胞癌组织PTOV1蛋白阳性率、IGBP1蛋白阳性率均显著高于组织学中高分化，TNM分期Ⅰ～Ⅱ期食管鳞状细胞癌组织，差异有统计学意义（均P＜0.05）。

表2 PTOV1，IGBP1蛋白与食管鳞状细胞癌患者临床病理特征的关系[n(%)]

2.3 不同 PTOV1，IGBP1蛋白表达情况食管鳞状细胞癌患者预后情况 见图1。截至2020年11月，共有66例患者完成随访，失访4例，失访率5.71%；患者存活36例，死亡30例。绘制生存曲线结果显示，PTOV1蛋白阳性表达患者5年生存率低于PTOV1蛋白阴性表达患者，IGBP1蛋白阳性表达患者5年生存率低于IGBP1蛋白阴性表达患 者（Log-rankχ2=8.122, 6.987,P=0.002, 0.007）。

图1 不同PTOV1，IGBP1蛋白表达情况食管鳞状细胞癌患者生存曲线

2.4 食管鳞状细胞癌患者预后不良影响因素的COX比例风险回归模型分析 见表3。建立COX比例风险回归模型，结果显示组织学低分化、TNM分期Ⅲ期、PTOV1蛋白阳性、IGBP1蛋白阳性是食管鳞状细胞癌患者预后不良的危险因素（P＜0.05）。

表3 食管鳞状细胞癌患者预后不良影响因素的COX比例风险回归模型分析

3 讨论

我国是食管癌的高发国家，每年因食管癌死亡的患者约为37万例，占全球的一半以上[10]。食管癌的发病具有很强的地域分布特征，我国以河北、河南、山西等地为食管癌高发地区[11]。近年来，尽管食管癌的治疗技术不断的发展，使得大量的食管癌患者得到了有效救治，但患者的临床预后并未得到根本性的改善，其主要原因在于食管癌具有较强的侵袭性，发病机制复杂，早期发病隐匿，大部分患者发现时已处于中晚期，预后通常较差[12-13]。目前，对于食管癌的发病机制仍未完全明确，相关研究表明，食管癌的发生是基于基因水平表达异常并引起细胞增殖、分化异常所致[14]。研究食管癌相关分子表达及与临床病理特征和预后不良的关系对于指导治疗、提高患者预后具有重要意义。

PTOV1基因位于染色体19q13.3，可以分别编码一个由416个氨基酸组成的蛋白及一个由374个氨基酸组成的蛋白[15]。研究表明，PTOV1启动子区域有转录因子SP1和SP2结合的保守区域及雄性激素反应原件[16]。CUI等[17]报道，在乳腺癌中PTOV1可以通过激活Wnt/β-catenin信号通路引起乳腺细胞恶性转变，促进乳腺癌的发生和发展。SANTAMARÍA 等[18]报道，PTOV1可以作用于脂茷蛋白flotillin-1，影响细胞周期，促进细胞有丝分裂。YANG等[19]报道，PTOV1可以抑制Notch信号通路下游多个靶基因，促进细胞癌变。IGBP1是一种参与细胞分化的调控蛋白[20]。以往有报道显示，IGBP1能与蛋白磷酸酶A2相结合，起到抗凋亡、调节细胞周期的作用，通过miR-3941抑制IGBP1表达后可以降低肺腺癌细胞增殖，促进肺腺癌细胞凋亡[21]。LncRNA-IGBP1-AS1可以通过下调IGBP1，降低乳腺癌的增殖和侵袭能力，提示IGBP1可以促进乳腺癌的发生和发展[22]。

我们通过对食管鳞状细胞癌组织和癌旁组织PTOV1，IGBP1蛋白表达进行了比较，分析发现食管鳞状细胞癌存在PTOV1，IGBP1蛋白的异常高表达，提示PTOV1，IGBP1蛋白表达升高可能促进食管鳞状细胞癌的发生。进一步分析发现PTOV1，IGBP1蛋白表达可能与食管鳞状细胞癌患者组织分化程度、TNM分期有密切关系。目前尚无PTOV1，IGBP1蛋白与食管鳞状细胞癌的相关报道。黄丽斯等[23]报道，在子宫内膜癌中PTOV1与患者组织分化程度、子宫内膜癌浸润密切相关。结合之前的文献研究报道，笔者推测PTOV1可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进食管鳞状细胞癌的发生和发展；PTOV1可能与flotillin-1相互作用，促进食管鳞状细胞癌变；PTOV1可能通过抑制Notch信号通路，促进食管鳞状细胞癌发生和发展；IGBP1可能与蛋白磷酸酶A2相结合，抑制凋亡，促进食管鳞状细胞癌细胞增殖。

本研究对患者进行了5年随访结果显示，PTOV1蛋白阴性表达，IGBP1蛋白阴性表达患者生存情况较好。分析其原因可能与PTOV1，IGBP1蛋白阳性表达患者组织学分化低、肿瘤恶性程度更高、可能存在淋巴转移有关。而组织学低分化、TNM分期Ⅲ期、PTOV1蛋白阳性、IGBP1蛋白阳性是食管鳞状细胞癌患者预后不良的危险因素。提示检测PTOV1，IGBP1蛋白表达情况可以为食管鳞状细胞癌患者的预后判断提供依据，或许可以为食管鳞状细胞癌新药开发提供新的研究方向。但本研究也存在样本量较少，仅通过对病例的病理标本研究，未涉及到细胞和信号通路的研究等不足，研究仍有待于今后进一步优化及丰富。

综上所述，食管鳞状细胞癌组织中存在PTOV1，IGBP1蛋白异常高表达，两者与食管鳞状细胞癌的组织分化程度、TNM分期及预后有一定关系，组织学低分化、TNM分期Ⅲ期、PTOV1蛋白阳性、IGBP1蛋白阳性是食管鳞状细胞癌患者预后不良的危险因素，可能为食管鳞状细胞癌患者的预后判断提供依据。