血清TAP、bFGF及CDCA5在老年宫颈癌患者中表达水平及其与预后的关系
2022-06-24覃小敏邢辉李琳周敏毛小刚吕华兵杨将
覃小敏 邢辉 李琳 周敏 毛小刚 吕华兵 杨将
(湖北文理学院附属医院 襄阳市中心医院妇产科,湖北 襄阳 441021)
宫颈癌是常见的女性生殖器官癌症,其发病率在所有女性恶性肿瘤中排第二位,据最新统计资料显示,我国每年新增宫颈癌患者达13万,严重威胁女性健康〔1〕。宫颈癌患者的发病率逐渐升高可能与环境污染、生活压力、饮食习惯等多方面因素有关,流行病调查研究显示,人类乳头瘤病毒(HPV)感染是造成宫颈癌变的重要原因之一,宫颈癌患者中,HPV感染率达90%以上〔2〕。肿瘤标志物在一定程度上反映了肿瘤的发展程度,绝大多数宫颈癌患者死亡的原因为肿瘤对周围组织的侵袭和肿瘤细胞的散播,但目前仍缺乏可靠的宫颈癌细胞生长、浸润、转移的抑制性指标〔3〕。肿瘤异常蛋白(TAP)是肿瘤细胞代谢过程中释放的,是由糖链结构异常的糖蛋白和钙组成的复合物,TAP水平直接反映癌变的程度和数量〔4〕;碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是一类强有力的细胞有丝分裂原和促血管新生因子,在肿瘤细胞的增殖、分化和血管形成过程中具有重要作用,可反映肿瘤复发和转移〔5〕;细胞分裂周期相关蛋白(CDCA)5是后期促进复合物的底物之一,可调控肿瘤细胞周期,但目前有关CDCA5的表达及作用机制类的研究较少〔6〕。本研究拟分析血清TAP、bFGF及CDCA5表达及其与预后的关系。
1 资料与方法
1.1一般资料 选取2017年2月至2019年1月于湖北文理学院附属医院治疗的98例宫颈癌患者为癌症组,另选取同期女性体检健康的56例为健康组,本研究经医院医学伦理委员会许可。纳入标准:①符合《宫颈病变的诊断与治疗》〔7〕中相关诊断标准,且经病理学检查确诊;②无放化疗、免疫治疗史;③年龄65~85岁;④患者及家属均对本研究知情同意。排除标准:①合并感染性疾病和免疫功能疾病者;②近3个月内有糖皮质激素类药物使用史;③合并其他部位恶性肿瘤者。癌症组年龄65~82岁,平均(75.16±2.05)岁;健康组年龄66~84岁,平均(73.12±2.41)岁。两组年龄差异无统计学意义(P>0.05)。
1.2方法 ①TAP测定:采集患者清晨空腹静脉血置于载玻片,涂抹均匀并晾干,置于水平净化操作台,将TAP凝剂充分摇匀后均匀滴到血片上,待标本干燥后放置显微镜下观察其形态。TAP正常(无明显凝聚物):未见明显类晶体凝聚物,呈颗粒状,凝聚物面积0~121 μm2;TAP弱阳性(凝聚物较小):边缘较完整的类晶体凝聚物,凝聚物面积121~225 μm2;TAP阳性(凝聚物较大):边缘较完整的类晶体凝聚物,凝聚物面积≥225 μm2。②bFGF检测:采用Western印迹法进行测定,采集患者静脉血,离心处理后取上清液,在聚苯乙烯板中加入0.1 ml上清液,置于4℃的环境中过夜孵育,加入磷酸盐缓冲液冲洗3次,3 min/次,加入bFGF抗体,37℃孵育30 min,加入磷酸盐缓冲液冲洗3次,3 min/次,后对各标本进行免疫组化染色。计算各个标本中bFGF的表达水平。③CDCA5测定:采集患者癌组织研磨取总蛋白,使用Bradford法进行蛋白质定量,将提取的总蛋白经聚丙烯酰胺凝胶电泳、转膜、加入5%脱脂牛奶后封闭处理,加入CDCA5抗体,置于4℃的环境中过夜孵育后加入2抗,37℃孵育2 h后采用电化学发光法检测,分析CDCA5表达量。
1.3统计学方法 采用SPSS19.0软件进行t检验、χ2检验或Fisher精确检验、Cox比例风险模型分析。
2 结 果
2.1两组血清TAP、bFGF及CDCA5水平比较 癌症组TAP、bFGF及CDCA5水平明显高于健康组(P<0.05),见表1。
表1 两组血清TAP、bFGF及CDCA5表达比较
2.2影响老年宫颈癌患者预后的单因素分析 98例患者中生存年限<2年15例,≥2年83例。单因素分析结果显示,初潮时间、病理类型、FIGO分期、TAP、bFGF及CDCA5的表达水平在生存年限<2年和≥2年的患者中具有统计学意义(P<0.05),而年龄、孕次、产次和病理分化程度比较无统计学差异(P>0.05),见表2。
表2 影响老年宫颈癌患者预后的单因素分析〔n(%)〕
2.3影响老年宫颈癌患者预后的多因素分析 病理类型、FIGO分期、TAP、bFGF及CDCA5的表达水平均为影响老年宫颈癌患者预后的相关因素(P<0.05),见表3。
表3 影响老年宫颈癌患者预后的多因素分析
3 讨 论
随着人口老龄化的加剧,老年宫颈癌的发病人数逐渐增多〔8〕。虽然目前多种治疗方式的综合应用明显改善了宫颈癌患者的治疗效果,但老年宫颈癌患者的死亡率仍较高,5年生存率相对较低,这主要与其临床和病理特征有关〔9,10〕。主要原因如下,①老年患者由于雌激素水平降低,发生宫颈萎缩、鳞柱交界区上移等改变,故在体检时不易发现异常〔11〕;②大多数患者在发现疾病时就已处在疾病中晚期,治疗难度大〔12〕;③腺癌对放疗不敏感,已发生转移〔13〕;④老年人体质弱,不耐受手术,放化疗不良反应多,预后差〔14〕。宫颈癌已严重影响到我国妇女的健康和生存质量,若能找到诊断宫颈高敏感性的指标,可提高宫颈癌早期诊断率,有效协助制定方案,改善患者预后。
大部分肿瘤形成时常伴有糖链的变化,TAP是多种恶性肿瘤发展过程中产生的糖链结构异常的糖蛋白和钙共同组成的蛋白化合物的总称,积累到一定程度后释放入外周血液,血清TAP水平可间接表示癌变的程度,且TAP对全身肿瘤均具有敏感性,可检测90%以上肿瘤形成的异常糖链糖蛋白,通过诊断肿瘤“蛋白异常形态”提高肿瘤检测的灵敏性,具有检测便利、多种肿瘤信号易感的特点,对筛查无临床症状肿瘤患者意义重大〔15,16〕。但关于TAP是否能作为预后指标的研究较少。有研究〔17〕提出“血管生成的开关平衡假说”,认为血管生成促进因子和血管生成抑制因子共同调控血管生成以来,临床已分离、纯化多种血管生成相关因子,bFGF为首个发现的促微血管生长因子,其特性类似于激素,微量即可促进细胞分裂增殖,体内几乎所有细胞如巨噬细胞、内皮细胞和成纤维细胞均能产生bFGF,在人体内分布广泛〔18〕。bFGF可能是通过细胞膜微小破裂或细胞死亡而释放,也可能是由自分泌或旁分泌形式发挥生物学作用,并依赖内质网-高尔基复合通路将其释放至细胞外,作用于靶细胞。bFGF对靶细胞的生物学效应主要通过高亲和力的酪氨酸激酶受体和低亲和力的肝素/硫酸乙酰肝素蛋白聚糖受体发挥作用,可促分裂、分化、促进血管生成和胚胎发育,在肿瘤发生、发展和转移过程中有重要作用〔19,20〕。肿瘤组织学检查发现,在肿瘤血管新生过程中,bFGF对内皮细胞有高度选择性〔21〕。相关文献也表明bFGF可促进癌细胞分裂增殖和血管生成,在肿瘤的发生、发展、浸润和转移过程中起重要作用〔22〕。另有研究〔23〕表明,当组织发生炎症或外伤时,受损细胞产生以bFGF为主的多种因子进入创伤部位,刺激相关细胞快速增殖,合成新的细胞间质和毛细血管增生,bFGF的高表达可促进创伤修复。CDCA5蛋白是由CDCA5基因编码的,最初是作为后期促进复合物的一个底物被发现,CDCA5是有丝分裂过程中姐妹染色单体结合和分离的关键因素之一〔24〕。研究〔25〕表明CDCA5在多种肿瘤组织中表达明显上调,如胃癌、肝细胞癌、口腔鳞状细胞癌和肺癌等。有研究〔26〕报道了CDCA5的高表达与尿路上皮癌患者晚期临床症状和不良预后联系密切,但CDCA5在肿瘤细胞中的分子作用机制和促癌的潜在机制仍有待进一步研究。最新研究〔27〕发现,CDCA5的高表达还可提示胃癌患者预后不良。本研究结果表明TAP、bFGF及CDCA5的高表达可能参与了宫颈癌的发生和发展,且可作为评估老年宫颈癌患者远期预后的有效指标。
综上,血清TAP、bFGF及CDCA5在老年宫颈癌患者中以较高水平表达,与癌症的发生和发展关系密切,可作为评估预后的有效指标。