血清miR-320、HMGB1对急性呼吸窘迫综合征患者临床预后的影响

平京娜

（河南科技大学第一附属医院呼吸科，河南洛阳 471000）

急性呼吸窘迫综合征（acute respira-tory distress syndrome，ARDS）发病迅速，可导致患者出现呼吸窘迫及难以纠正的低氧血症，病死率较高，严重威胁患者生命安全[1]。机械通气、纠正缺氧等措施虽可一定程度上改善患者症状，但仍有部分患者病情较重，治疗后病死风险高，预后不良。因此，寻求早期预测ARDS患者预后的指标十分必要。研究显示，炎症及免疫反应参与了ARDS发生发展，与患者预后存在一定联系[2]。miR-320可调控靶基因表达，参与到免疫及炎症反应过程中，其过表达可加重炎症反应，增大肺部血管通透性，造成肺损伤，加重ARDS患者病情[3]。高迁移率族蛋白B1（high mobility group protein，HMGB1）属于晚期炎症因子，其可通过刺激树突状细胞的成熟与增殖，使机体对已发生的损伤产生防御反应及炎性反应，诱发血管重构，造成动脉粥样硬化及再狭窄，增加心血管疾病风险，威胁患者生命安全[4]。由此推测，血清miR-320、HMGB1水平可能影响ARDS预后。鉴于此，本研究着重分析血清miR-320、HMGB1水平对ARDS患者临床预后的影响。现汇报如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

本研究经医院医学伦理委员会审核批准，选择2019年3月～2021年3月河南科技大学第一附属医院收治的86例ARDS患者作为研究对象。（1）纳入标准：①ARDS符合《急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征诊断和治疗指南(2006)》[5]中诊断标准，并经体格检查、胸部X线片、动脉血气分析等检查确诊；②发病至入院时间＜24h；③急性生理和慢性健康状态评分系统Ⅱ评分≥15分；④患者家属签署知情同意书。（2）排除标准：①长期应用激素、免疫抑制剂治疗者；②既往有慢性肾脏病史者；③合并血液系统疾病者；④合并恶性肿瘤者；⑤合并免疫系统疾病者。86例ARDS患者中，男性47例，女性39例；年龄45～78岁，平均年龄（61.80±5.04）岁；体重指数（body mass index，BMI）18～27kg/m2，平均BMI（22.70±1.34）kg/m2；基础疾病：高血压39例，糖尿病13例。

1.2 方法

1.2.1 ARDS患者预后评估及分组方法 患者均在本院接受治疗，且接受至少1个月随访结果，记录ARDS患者28d内病死情况，将病死患者纳入预后不良组，将存活患者纳入预后良好组。

1.2.2 血清指标检查方法 采集患者入院时空腹外周肘静脉血5ml，离心（转速3000r/min，离心15min）取血清，置于-80℃环境下保存待检。（1）miR-320：采用Trizol方法提取血清总RNA，并反转录为cDNA，上游：5´-ACTAGTAGTACTCAGTCGTG-3´，下游：5´-GTCAGCATGCTCTCGACG-3´，使用实时荧光定量聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）检测系统Gentier 32R（陕械注准20173401384，Gentier）进行荧光定量聚合酶链反应，反应体系20μl：TaqMan MicroRNA Assay 1.00μl，cDNA 1.33μl，TaqMan2×Universal PCR Master Mix 10.00μl，二次蒸馏水7.67μl，混合后离心放入仪器。扩增条件：95℃预变性10min，95℃变性15s，60℃复性60s，进行45个循环，重复3次。以U6为内参照，采用2-△△Ct法计算miR-320相对表达量，其中△Ct=Ct目的基因-CtU6。（2）使用酶联免疫吸附法检测血清HMGB1水平，试剂盒均由西门子公司提供，步骤严格按照试剂盒说明书操作。

1.2.3 统计学方法 采用SPSS 25.0软件进行数据处理，计量资料均经Shapiro-Wilk正态性检验，符合正态分布的计量资料采用（）表示，2组间比较采用独立样本t检验；计数资料用百分比表示，采用χ2检验；采用COX比例风险模型检验血清miR-320，HMGB1水平对ARDS临床预后的影响；P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 ARDS患者预后情况

86例ARDS患者经治疗，28d内病死28例（32.56%），存活58例（67.44%）。

2.2 预后良好组与预后不良组基线资料比较

预后不良组中性粒细胞百分比、miR-320、HMGB1水平高于预后良好组，差异有统计学意义（P＜0.05）；2组其他资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 预后良好组与预后不良组基线资料比较

2.3 血清miR-320、HMGB1水平对ARDS患者临床预后的影响

将血清miR-320、HMGB1水平作为自变量（均为连续变量），将ARDS患者预后情况作为因变量（“0”=预后良好，“1”=预后不良），经COX回归分析结果显示，血清miR-320、HMGB1过表达是ARDS患者预后不良的影响因素（P＜0.05）。见表2。

表2 血清miR-320、HMGB1水平对ARDS患者临床预后的影响

3 讨论

目前，对于ARDS患者治疗主要采取机械通气、原发病治疗等方式，纠正患者缺氧状态，缓解临床症状，但仍有部分患者经治疗后病死，未能挽救其生命。王玉等[6]研究显示，ARDS患者28d内病死率约32.90%。本研究中，ARDS患者28d病死率为32.56%，表明ARDS患者病死率较高，因此探寻可早期评估ARDS患者预后的指标具有重要意义。

miR为内源性非编码小分子RNA，长度为18～22个核苷酸，可互补配对靶基因形式RNA分子3´端的非编码区域，进而抑制靶mRNA反应或影响其稳定性，调控蛋白表达。miR-320属于内源性非编码小分子RNA的一种，可通过影响细胞凋亡，损伤血管内皮细胞，促进炎症细胞聚集，加重机体炎症反应[7]。HMGB1是真核细胞大量存在的一种染色体结合蛋白，HMGB1与白细胞介素-1β、肿瘤坏死因子-α等早期炎症因子互相诱生，可不断放大炎症信号，加剧机体炎症反应[8]。据相关研究显示，ARDS患者预后与炎症反应程度密切相关[9]。由此推测，血清miR-320、HMGB1水平可能影响ARDS患者预后。

本研究结果显示，预后不良好组中性粒细胞百分比、miR-320、HMGB1水平高于预后良组，且经Logistic回归分析结果显示，血清miR-320、HMGB1过表达是ARDS患者预后不良的影响因素，表明其水平与ARDS患者预后相关。分析其原因在于，miR-320参与B细胞、T细胞、巨噬细胞、单核细胞及嗜中性粒细胞的发育、分化、增殖及抗体的产生，从而参与到机体免疫反应中，促进炎症因子的释放，是炎症介质释放的中心环节。miR-320还可抑制Smad7蛋白，促进转化生长因子-β表达，从而诱导和维持内皮间质细胞转化，促进肺泡纤维化，使氧气无法顺利进入血液，加剧ARDS患者呼吸不畅、缺氧等症状，增加病死风险，造成预后不良[10]。HMGB1可刺激中性粒细胞产生多种促炎细胞因子，并可引起核因子激活的B细胞的κ-轻链增强核移位，对血管内皮功能造成损伤，刺激内皮细胞释放炎症因子。并且，HMGB1及其功能领域B-box可诱导树突细胞成熟，并分泌白细胞介素-1、白细胞介素-6，加剧ARDS患者机体炎症反应，使患者病情恶化，造成预后不良。

综上所述，血清miR-320、HMGB1与ARDS患者预后有关，二者过表达可增加患者预后不良风险，未来临床或可通过检测患者血清miR-320、HMGB1水平，评估ARDS预后不良风险。