miR-493-5p、CHE联合GP73检测在肝癌筛查、病情评估中的应用研究

李俊娜，韩晓亮，谢东文，赵根成

(安阳市第五人民医院综合科，河南安阳 455000)

原发性肝癌是源于肝细胞或肝内胆管细胞的恶性肿瘤，在中国发病率较高。尽管现代诊疗手段越来越全面，仍无法改变患者确诊时间晚、治疗后复发率高、远期疗效差的现状[1]。阐明肝癌的发生机制对于临床诊断、治疗和随访监测均具有重要意义。人类基因是目前临床研究的重点，miRNA在各种类型的肿瘤中的表达呈异常[2]。研究发现，miR-493-5p在肺癌、前列腺癌等恶性肿瘤中的表达量呈明显下调状态，但其在肝癌患者中的表达及与肝癌患者病情进展的关系仍未明确，临床尚缺乏相关研究[3]。胆碱脂酶（cholinesterase，CHE）是临床用于反映肝细胞蛋白质合成及储备功能的常用指标[4]。高尔基体糖蛋白73（golgi glycoprotein73，GP73）在临床诊断原发性肝癌中已做出极大贡献，是筛查的肝癌的常用生化标志物之一，其在健康人群中不表达或少量表达[5]。目前miR-493-5p、CHE联合GP73检测在肝癌筛查中的研究较少，本研究旨在探讨3项指标在肝癌患者癌组织中的表达情况，并分析3者在肝癌患者病情评估中的作用。现研究报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

整理2015年7月～2019年7月安阳市第五人民医院收治的肝癌患者的临床资料。纳入标准：（1）均经病理检查确诊为原发性肝癌[6]；（2）经影像学检查（CT/MRI）检查未发现肿瘤出现远处转移；（3）纳入研究前未接受过抗肿瘤治疗；（4）预计生存期在6个月以上。排除标准：（1）纳入合并其他重要器官严重疾病者；（2）因免疫系统疾病诱发的肝癌者；（3）纳入研究前1个月内服用过激素药物治疗者。本研究最终纳入98例患者作为观察组（临床分期：早期31例、中期35例、晚期32例），选取同期本院的健康体检者104例作为对照组。对照组男61例、女43例；年龄51～78岁，平均年龄（65.09±7.34）岁；观察组男57例、女41例；年龄53～79岁，平均年龄（65.33±7.11）岁；平均ECOG评分（1.51±0.31）分；平均肿瘤大小（4.95±1.41）cm，两组一般资料比较差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 miR-493-5p检测方法 聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性法对miR-493-5p进行检测。miR-493-5p引物序列TTGTACATGGTAGGCTTTCATTPCR（由上海生工生物工程有限公司合成）。循环参数：94℃预变性3min；94℃变性45s，退火（温度依次为56℃、58℃、58℃）45s，72℃延伸40s，循环40次，总延伸72℃，10min。

1.2.2 CHE、GP73检测方法 观察组于入院后次日清晨，对照组于体检当日清晨，空腹抽取肘静脉血5ml。采用丁酰基硫代胆碱法测定CHE水平，检测仪器为德国西门子公司ADVIA2400型全自动生化分析仪及配套试剂。GP73选择电化学发光法进行检验，检测仪器采用美国雅培2000发光仪，相关试剂盒来自广州阳普医疗提供的公司，严格依据试剂盒说明书进行操作。

1.3 观察指标

比较不同组别之间miR-493-5p、CHE、GP73表达情况，通过绘制受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic curve, ROC）分析3者联合检测对肝癌患者病情进展的预测价值。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 肝癌患者及健康人群miR-493-5p相对表达量及CHE、GP73水平比较

观察组miR-493-5p、CHE水平低于对照组，GP73水平高于对照组，比较差异具有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 肝癌患者及健康人群miR-493-5p相对表达量及CHE、GP73水平比较

表1 肝癌患者及健康人群miR-493-5p相对表达量及CHE、GP73水平比较

与对照组比较，*P＜0.05。

组别 miR-493-5p CHE（U/L） GP73（ng/L）对照组（n=104） 3445.23±479.53 7714.23±541.84 19.65±1.58观察组（n=98） 1677.43±355.77* 2345.65±247.46* 229.65±14.85*

2.2 不同临床分期的肝癌患者miR-493-5p相对表达量及CHE、GP73水平比较

miR-493-5p相对表达量及CHE水平比较：早期＞中期＞中晚期，差异具有统计学意义（P＜0.05）；GP73水平比较：早期＜中期＜晚期，差异具有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 不同临床分析的肝癌患者miR-493-5p相对表达量及CHE、GP73水平比较

表2 不同临床分析的肝癌患者miR-493-5p相对表达量及CHE、GP73水平比较

与早期比较，*P＜0.05；与中期比较，#P＜0.05。

组别 miR-493-5p CHE（U/L） GP73（ng/L）早期（n=31） 1914.35±374.58 2641.25±288.74 199.38±11.10中期（n=35） 1671.54±384.93* 2386.67±250.21* 232.72±14.88*晚期（n=32） 1454.36±305.65*# 2014.42±204.46*# 255.62±18.45*#

2.3 联合miR-493-5p、CHE、GP73检测对肝癌患者病情严重程度的预测价值

联合miR-493-5p、CHE、GP73检测灵敏度、特异度、AUC分别为92.10%、94.50%、0.960，均高于单一指标检测，比较差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表3，附图。

表3 联合miR-493-5p、CHE、GP73检测对肝癌患者病情严重程度的预测价值

附图 联合miR-493-5p、CHE、GP73检测对肝癌患者病情严重程度的预测价值

3 讨论

目前，原发性肝癌的病因及发病机制尚未明确，但考虑与病毒性肝炎、肝硬化、遗传因素等有关[7,8]。因原发性肝癌具有侵袭性强、易复发、转移等生物学特性，发病率及死亡率极高，严重威胁人类的生命安全。通过血清肿瘤标志物对肝癌进行筛查，并及时评估肝癌患者病情，对改善患者预后极为重要。

miR可通过调节蛋白质编码而与信使RNA的特定序列结合抑制翻译、剪切RNA转录物，实现对基因表达调控[9]。目前国内关于miR-493-5p与恶性肿瘤的研究较少，但已有学者报道miR-493-5p在肝癌患者中血清表达异常，推测正常表达量的miR-493-5p可抑制肿瘤生长、进展[10]。CHE是非特异性酯酶类，以多种同工酶形式存在于体内，CHE仅能在肝脏内被合成。若肝细胞出现损伤，会导致肝脏酶合成能力下降，对CHE的合成能力减弱，使血清CHE水平降低[11,12]。GP73高尔基体蛋白属于跨膜蛋白，已有研究指出，在肝癌患者中，GP73水平呈显著上升，为肝癌患者肝细胞坏死导致GP73从顺面膜囊游离出来，进入细胞表面，大量GP73进入血液所致[13-15]。本研究中，观察组miR-493-5p、CHE水平低于对照组，GP73水平高于对照组，与既往研究报道结果相符[16]。可见在肝癌患者中，miR-493-5p、CHE表达均处于低水平状态，GP73处于高水平状态，推测miR-493-5p、CHE低表达及GP73高表达可能与肝癌细胞生长、进展有关。

研究表明，miR-493-5p过表达可以逆转恶性肿瘤间质至上皮过渡的进程，从而抑制癌细胞的侵袭和转移[17]。相关文献报道显示，血清CHE与肝脏储备及合成功能存在明显相关性，肝癌患者均存在不同程度的CHE活性降低[18,19]。孙艳华等[20]发现，GP73与肝癌细胞的增殖及侵袭有关，GP73基因沉默能抑制肝癌细胞的迁移及侵袭。为了进一步分析miR-493-5p、CHE、GP73在评估肝癌患者病情进展中的作用，对不同肝功能分级的肝癌患3项指标表达情况进行分析。结果显示，miR-493-5p相对表达量及CHE水平比较：早期＞中期＞晚期；GP73水平比较：早期＜中期＜晚期。可见miR-493-5p、CHE及GP73与肝癌患者病情进展密切相关，进一步证实上述观点。ROC曲线示，联合miR-493-5p、CHE、GP73检测灵敏度、特异度、AUC分别为92.10%、94.50%、0.960，均高于单一指标检测。由此可见，联合3项指标灵敏度、特异度相对较高，能显著提高肝癌诊断准确率，在尚未找到更佳特异性标志物之前，3者有望成为诊断肝癌最合适的肿瘤标志物。

综上所述，肝癌患者血清miR-493-5p、CHE处于较低水平，GP73处于较高水平。临床可加强联合miR-493-5p、CHE、GP73检测，用于诊断早期肝癌，评估患者病情进展情况。