肠内生态营养对创伤后大鼠肠屏障功能的影响

蒋靖志 王 琦 张燕燕

(苏州卫生职业技术学院 江苏 苏州 215009)

1 研究资料和研究方法

1.1动物分组和试剂

本次研究的大鼠随机选取30只，大鼠需要选择健康清洁级8周龄左右，有动物质量合格证的Wistar大鼠，其中雌鼠15只，雄鼠15只，体质量180～260g。按随机数字法将大鼠分为对照组(Control)10只、肠内普通营养组(EN)10只、肠内生态营养组(EIN)10只。

1.2大鼠模型制作和处理

采用无菌手术的方式对大鼠进行胃造瘘模型的建设，这个手术一般在对大鼠进行2天适应性喂养后做，术后大鼠的居住环境要求温度22°C～26°C、湿度40%～-70%，并且要通风、安静、单独饲养。手术结束后开始给予对照组大鼠喂养正规大鼠专用饲料，给肠内普通营养组、肠内生态营养组经胃造瘘管给予肠内营养液，在等氮等热量情况下，给肠内普通营养组瑞素，给肠内生态营养组瑞能，大鼠喂养的能量需要维持在I037kJ/(kg·d)。注入量逐日递增，第1天注入1/2，在第二天时需要将注入量调整为2/3，然后在第3-7天时大鼠的注入量为完整注入量，在对大鼠喂养一周后，将大鼠处死取出大鼠的末端回肠标本，进行检测。

1.3检测方法和指标

1.3.1病理学检测

在常规光镜下对大鼠的肠粘膜形态结构进行详细的观察，这个肠粘膜是经过HE化染色后小肠组织中的肠粘膜。肠粘膜形态结构的观察方式是通过在每组研究大鼠的末端回肠标本上截取不连续性的5张切片，对于每张切片采取奇数的观察顺序，观察每张切片上的20个绒毛，测量相关形态参数。

1.3.2肠黏膜lgA+、CD3+、CD4+、CD8+细胞检测

免疫组在通过染色后的镜下观察，其棕黄色为阳性细胞，具有细胞质丰富、体积大特点。然后每张切片上需要选取5个方位的视野角，通过高倍镜进行观察，对每个视野的平均lgA+、CD3+、CD4+、CD8+细胞数量进行计算。

1.3.3肠内营养液和检测试剂

在FreseniusKabi—华瑞公司购入肠内营养液，瑞能(Supportan)和瑞素(Fresubin)。每100ml瑞能添加0.625g精氨酸，促进瑞能每100ml蛋白质由5.85g增至6.475g，热量由130kcal增至132.75keal。于Serotee公司购入小鼠抗大鼠CD3+、CD4+、CD8+抗体试剂，于Rockland公司购入山羊抗大鼠IgAot重链特异性抗体，于北京中杉生物技术公司购入SP系列试剂盒和相关二抗试剂。

1.4统计学处理

2 结果

2.1大鼠手术完成情况

参与研究的30只大鼠，实际有效实验数量为27只，其中一只普通营养组大鼠于术后6h不明原因死亡；并且在实验中有两只大鼠出现术后胃造口脱出或者堵塞导致临床实验研究出现无效，这两只大鼠分别为普通营养组和免疫营养组各占有1例。通过对比在手术结束后大鼠的皮毛的光泽程度、皮毛的颜色、毛发的密集程度以及毛发的清洁度等发现，免疫营养组大鼠各方面明显优于对照组；在手术后大鼠出现腹泻的情况，普通营养组和免疫营养组均明显的高于对照组；本次研究的并发症比较不存在差异性，究其原因是由于本次研究的大鼠样本较少，导致在手术结束后大鼠的并发症发生率较低。

2.2小肠粘膜形态参数测定

对于大鼠手术后的小肠黏膜的形态进行观察发现，在显微镜下大鼠的肠壁层次能够清晰的展现出来，且在本次研究中的大鼠上皮组织均正常，没有其他的症状。从肠黏膜绒毛高度、黏膜厚度、腺隐窝深度和绒毛表面积四个方面进行研究，将普通营养组、免疫营养组、对照组进行对比之后可以发现，普通营养组和免疫营养组数值要高一些，详情请见表1。

表1 三组大鼠小肠黏膜形态参数比较

2.3小肠黏膜中lgA+、CD3+、CD4+、CD8+细胞数量

通过小肠黏膜中T淋巴细胞数量对比小肠黏膜中lgA+、CD3+、CD4+、CD8+细胞的数量(细胞数/高倍视野)，发现免疫组化染色后，lgA+、CD3+、CD4+、CD8+细胞胞浆呈棕黄色，细胞核呈深蓝色，阳性细胞在粘膜层里面。这样结果可以看出，在阳性细胞数量对比上，对照组比两组营养组少，免疫营养组则高于对照组和普通营养组(P<0.05)，如表2。

表2 四组大鼠小肠黏膜中T淋巴细胞的数量细胞数量(个)

根据实验结果表明，要想使大鼠肠道内粘膜屏障恢复，可以在EN液中添加能够增强营养提升免疫力的营养物质，这样可使肠道局部CD3+、CD4+、CD8+T以及lgA+等细胞的数量出现显著的提升，增强机体免疫力。本次实验中采用的瑞能肠内免疫营养剂，其中有数种免疫营养成分，因此该营养剂对于大鼠的肠道以及机体的免疫力提高具有较为显著的效果。研究结果表明给术后大鼠给予的各种营养剂对小肠绒毛高度、粘膜厚度、腺隐窝深度以及绒毛表面积都比对照组要优秀。肠道内分泌物中免疫球蛋白是最为旺盛的，在免疫功能这块发挥着重要作用。ω>3PUFA对于细胞膜的流动性、细胞膜信使传递和细胞膜上的受体功能具有较大的影响性，这主要是由于其对于细胞结构的改变，而这种改变能够直接的降低炎性递质性递质前列腺素E2(PGE)的形成，并且对于降低IL-1和TNF等细胞因子的产生能够较好的对机体细胞免疫功能抑制炎症反应进行把控。中链三酰甘油(MCT)对于长链三酰甘油造成的肝脂肪堆积和胆汁淤积情况具有较好的改善性效果，因此能够有效的降低肝网状内皮系统的损害，减轻ω6脂肪酸衍生物血栓素的强烈收缩血管和促血小板聚集的作用。Kono等通过实验发现在大鼠肠道的表达中MCT对于分泌型lgA+具有较好的提升性。创伤后大鼠在给予肠内免疫营养后对肠粘膜屏障功能进行了改善和提高，体内免疫细胞和免疫体液功能增强，能有效减少炎症因子，促进术后恢复。

3 讨论

通过实验证明，当我们的肠道长时间处于饥饿状态，肠上皮就会出现菱缩，或者脱落现象。实验中采用的对照组，组内大鼠均由普通大鼠饲料喂养，缺乏维持氮平衡和蛋白质合成的相应底物，会使大鼠出现肠道障碍。而普通肠内营养组和肠内生态营养组，在进行喂养时平衡了氮，并添加了肠内营养制剂，实验结果是这两组大鼠的小肠绒毛高度、黏膜厚度、肠腺隐窝深度、绒毛表面积优于对照组(P<0.05)，这说明肠内营养能够有效减少应激反应对机体肠道粘膜的损伤。免疫营养组与普通营养组无显著差异(P>0.05)，说明肠道上皮营养可以通过肠内营养供给，无论何种营养都能保护肠上皮。实验结果中可以看到，肠内营养的供给，尤其是肠内免疫营养供给，能够提高肠道黏膜lgA+、CD3+、CD4+、CD8+细胞数量，随之大鼠肠道粘膜免疫屏障重启，大大提高了免疫力。