一株桩菇属野生真菌的分离鉴定及生物学特性研究
2022-06-16关艳丽郭玲玲
关艳丽 郭玲玲 韩 冰 李 莹
(辽宁省微生物科学研究院,辽宁朝阳122000)
大白桩菇又称雷蘑,隶属于口蘑科、白桩菇属,子实体大型,夏秋生于草原、林缘、竹林中,单生或群生,有时形成蘑菇圈。该菌主要分布在河北、内蒙古、吉林、辽宁、山西、黑龙江、青海、浙江、新疆等省区,味道鲜美、营养丰富[1]。该菌可药用,治疗小儿麻疹、烦躁不安等症,将鲜姜和雷蘑切片,水煎服,可治伤风感冒[2]。另外,该菌所含杯伞素(clito‐cybin),有抗人类致病细菌的活性,如蜡样芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌[3],1945 年已有研究表明它对结核分枝杆菌Mycobacterium tuberculosis、伤寒沙门氏菌Salmonella typh和流产布氏杆菌Brucea abortus有抑制活性[4]。从该菌中分离的clitoeine 能促进体外人宫颈癌细胞(HeLa细胞)的凋亡[5]。液体培养大白桩菇菌丝体能产生具有抗氧化活性的酚类化合物、黄酮类化合物[6]。
笔者对采自辽宁省锦州市义县的一株野生真菌进行分离培养,旨在为该菌的进一步研究与开发提供数据支撑。
1 材料与方法
1.1 试验材料
(1)供试菌株:采自锦州市义县头台乡落叶灌木林草地上的大白桩菇,菌种分离,获得纯培养物,编号YX210702。
(2)培养基:PDA 综合培养基。基础培养基为葡 萄 糖2%,蛋白胨0.3%,KH2PO40.3%,MgSO4·7H2O 0.15%,VB110 mg,琼脂2%,水1 L。
1.2 菌株鉴定
采用形态学方法鉴定该菌株。具体参照文献[1,7-10]。
1.3 菌丝培养条件试验
1.3.1 碳源对菌丝生长的影响试验
将基础培养基中的葡萄糖用相当量的供试碳源代替,供试碳源分别为果糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、淀粉。采用DPS v9.50 对菌丝日均长速进行单因素方差分析。
1.3.2 氮源对菌丝生长的影响试验
将基础培养基中的蛋白胨用相当量的供试氮源代替,供试氮源分别为酵母膏、麸皮、硫酸铵、尿素、黄豆粉。
1.3.3 pH对菌丝生长的影响试验
试验培养基为PDA 综合培养基,设置培养基pH分别为5.0、6.0、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0。
1.3.4 培养温度对菌丝生长的影响试验
试验设置培养温度分别为15 ℃、18 ℃、22 ℃、25 ℃、28 ℃、30 ℃。将供试菌种接种在PDA 综合培养基上,置于试验温度下培养。
2 结果与分析
2.1 菌株形态鉴定结果
该菌株子实体菌盖直径为7~30 cm,扁半球形至近平展,污白色,光滑,边缘内卷,菌肉为白色较厚,菌褶延生、不等长,初期为白色,后期为褐色。该菌菌柄较粗,为2~5 cm,长4~8 cm,肉质、实心、基部膨大(图1)。该野生菌夏秋季于落叶阔叶林草地上群生形成蘑菇圈,当地人称为白蘑,根据该菌的宏观形态特征、生境和分布可以确定所采标本属于口蘑科Tricholomataceae、白桩菇属Leucopaxillus、大白桩菇Leucopaxillus giganteus(Sow.Ex Fr.)Sing。
图1 大白桩菇子实体
2.2 菌丝培养条件试验结果
2.2.1 培养基的碳源对菌丝生长的影响
由表1 可知,大白桩菇(YX210702)菌丝均可利用供试碳源,其中葡萄糖、可溶性淀粉、蔗糖菌丝生长速度快,但在以葡萄糖为碳源培养基上菌丝生长最快,菌丝日均长速为5.6 mm/d,且菌丝长势最好,其次是蔗糖、可溶性淀粉,三者间菌丝日均长速差异不显著;菌丝生长较差的是果糖、乳糖,菌丝生长速度慢,且菌丝稀疏发黄。
表1 供试碳源培养基上大白桩菇(YX210702)菌丝生长情况
2.2.2 培养基氮源对菌丝生长的影响
由表2可知,大白桩菇菌丝在以酵母膏、麸皮为氮源培养基上生长快,日均长速分别为5.9 mm/d、5.6 mm/d,氮源为酵母膏培养的菌丝长势好于氮源为麸皮,菌丝浓密洁白;氮源为黄豆粉、蛋白胨培养的菌丝长速稍慢,菌丝长势较好;氮源为尿素培养的菌丝生长较差,几乎不生长。
表2 供试氮源培养基上大白桩菇(YX210702)菌丝生长情况
2.2.3 培养基pH对菌丝生长的影响
由表3 可知,菌丝生长的pH 范围较广,大白桩菇(YX210702)菌丝均能在pH5.0~9.0的培养基上生长,当培养基pH 为6.5、7.0 时,菌丝长势强,日均长速快,分别为6.1 mm/d、5.9 mm/d;pH低于6.0或高于8.0,菌丝日均长速显著下降,且稀疏。
表3 培养基pH对大白桩菇(YX210702)菌丝生长的影响
2.2.4 培养温度对菌丝生长的影响
由表4 可知,大白桩菇(YX210702)菌丝的生长适温范围较宽,培养温度为15~30 ℃菌丝均可生长,培养温度为18~28 ℃菌丝生长快,其中最适温度为25 ℃,菌丝日均长速快,且颜色浓白;培养温度低于18 ℃或高于28 ℃,菌丝生长均缓慢,且颜色发黄。
表4 培养温度对大白桩菇(YX210702)菌丝生长的影响
3 小结与讨论
经形态学鉴定,初步确定在锦州市义县头台乡地区采集的一株野生真菌隶属伞菌目、口蘑科、白桩菇属、大白桩菇Leucopaxillus giganteus。菌丝培养结果:该菌株菌丝生长的最适碳源为葡萄糖,最适氮源为酵母膏,培养基适宜的pH 为6.5~7.0;菌丝生长适宜温度为25 ℃。
大白桩菇具有较高的营养价值和药用价值,目前虽未实现人工栽培,但可以采取深层发酵培养方法加以开发。