血清Gli1 和VEGF 水平与前列腺癌转移的相关性研究

熊永高 彭丽红 张勇科 李林株

广东医科大学附属佛山高明医院，广东 佛山 528500

研究表明，超过80%的前列腺癌患者伴有转移[1］。前列腺癌患者是否发生转移，对治疗方案的选择和患者五年生存率均至关重要。长期以来，研究者对癌症转移的预测因子关注较多。研究表明，胃癌根治术后预后不良组的患者血清胶质瘤相关癌基因1（glioma-associated oncogene 1，Gli1）水平高于预后良好组，其水平高低对预测胃癌术后复发和远处转移具有重要参考价值[2］；前列腺癌转移患者血清血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）升高，其水平可作为总生存率的独立预测因子[3］。研究证实，与肿瘤转移密切相关的Hh-Gli1 信号通路中，Gli1 靶基因研究涉及与血管生成相关的VEGF[4-6］。基于上述研究，本研究通过检测前列腺癌患者血清Gli1 和VEGF 水平，分别比较低Gli1 组和高Gli1 组、低VEGF 组和高VEGF 组患者的病理特征分布差异，比较转移和未转移患者两个指标差异，并探讨两个指标与前列腺癌转移可能存在的相关性，利用ROC 曲线评估二者对前列腺癌转移的诊断价值，为诊断前列腺癌转移提供更多有价值的检测指标。

1 资料与方法

1.1 一般资料 取2015 年1 月至2020 年12 月于我院确诊为前列腺癌的患者174 例，年龄55~75 岁，平均（65.21±8.32）岁，Gleason 评分＜8 分100 例，≥8 分74 例；临床T 分期，T1/T2 期共94 例，T3/T4 期共80 例。按照有无转移分组，转移组70 例，年龄55~75 岁，平均（66.14±8.41）岁；未转移组104 例，年龄55~75 岁，平均（65.01±8.22）岁，两组年龄比较无统计学差异（P＞0.05）。

1.2 入选标准 纳入标准：①年龄55~75 岁；②所有患者均经直肠超声引导下行前列腺穿刺活检，一部分初次病理诊断为原发性局限性前列腺癌，另一部分患者初次确诊为转移性前列腺癌，可通过全身骨扫描以及X 线、CT 和MRI 检查明确诊断[7］，且在本次确诊前从未采取任何手术和药物治疗；③所有患者的临床病理资料完整，包括Gleason 评分、临床T 分期和转移情况；④依从性较好，患者愿意配合抽血检测；⑤愿意签署知情同意书。排除标准：①合并有其他肿瘤病史者；②有前列腺手术史者；③合并有严重心肺肾功能障碍者。

1.3 检测方法 所有患者抽取空腹肘静脉血5mL，置于抗凝管中，离心取上清液于-80℃保存，分批检测。采用ELISA 法，检测血清Gli1 水平采用双抗体夹心法，试剂盒购自北京中衫金桥生物技术有限公司，检测血清VEGF 水平采用双单抗夹心法，试剂盒购自上海瑶韵生物科技有限公司，均严格按照操作说明书操作。

1.4 观察指标 收集所有患者的临床病理资料，检测所有患者血清Gli1 和VEGF 水平，分析上述两个指标与临床病理特征的相关性，根据血清Gli1 水平的中位数（8.35ng/mL），将前列腺癌组分为低Gli1 组（＜8.35ng/mL）和高Gli1 组（≥8.35ng/mL），根据血清VEGF 水平的中位数（159.30ng/mL），将前列腺癌组分为低VEGF 组（＜159.30ng/mL）和高VEGF 组（≥159.30ng/mL）。比较前列腺癌转移和未转移患者血清Gli1 和VEGF 水平差异，分析前列腺癌患者血清Gli1 和VEGF 水平的相关性，分析二者是否是前列腺癌转移的危险因素，采用ROC 曲线评估血清Gli1 和VEGF 水平以及联合诊断对前列腺癌转移的诊断价值。

1.5 统计学分析 采用SPSS 24.0 进行统计分析。计量资料采用t 检验，计数资料采用χ2检验，相关性分析采用Pearson 相关分析，采用二元多因素Logistic 回归分析血清Gli1 和VEGF 水平是否是前列腺癌转移的独立危险因素，采用ROC 曲线评估血清Gli1 和VEGF水平以及联合检测对前列腺癌转移的诊断价值。

2 结果

2.1 血清Gli1 和VEGF 水平与前列腺癌患者病理特征分布差异 高Gli1 组的Gleason 分级≥8 分、T3/T4 期、前列腺癌已转移的比例显著高于低Gli1 组，高VEGF 组上述指标比例显著高于低VEGF 组（均P＜0.05）。见表1。

表1 血清Gli1 和VEGF 水平与前列腺癌患者病理特征分布差异（例）

2.2 两组血清Gli1 和VEGF 水平比较 前列腺癌转移组血清Gli1 和VEGF 水平均高于未转移组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 两组血清Gli1 和VEGF 水平比较（ng/mL，±s）

表2 两组血清Gli1 和VEGF 水平比较（ng/mL，±s）

组别 例数 Gli1 VEGF未转移组 104 6.41±0.69 135.48±20.03转移组 70 9.26±0.92 188.00±28.26 t-8.085 -7.696 P 0.000 0.000

2.3 前列腺癌患者血清Gli1 和VEGF 水平的相关性前列腺癌患者血清Gli1 和VEGF 水平呈显著正相关（r=0.811，P=0.000）。

2.4 危险因素分析 以血清Gli1 和VEGF 水平作为自变量，以前列腺癌是否转移作为因变量，进行二元多因素Logistic 回归分析，结果显示血清Gli1 和VEGF水平是前列腺癌是否转移的独立危险因素（OR=1.011，P=0.036；OR=1.931，P=0.001）。

2.5 血清Gli1 和VEGF 水平以及联合检测对前列腺癌转移的诊断价值 ROC 曲线分析结果显示，血清Gli1 和VEGF 水平诊断前列腺癌转移的临界值（cut-off值）分别为8.26ng/mL 和179.45ng/mL，灵敏度分别为100%和60.0%，特异度分别为61.5%和100%，曲线下面积（AUC）分别为0.898、0.879，二者联合检测的AUC 为0.932，灵敏度和特异度分别为88.6%和84.6%。见图1。

图1 血清Gli1 和VEGF 水平对前列腺癌转移的ROC曲线分析

3 讨论

近年来，我国前列腺癌发病率逐年上升，前列腺癌转移患者亦逐年升高[8］。前列腺癌转移包括前列腺癌原发病灶具有转移特征，突破基底膜内渗入血管，经过血液转运，再外渗出血管，远处转移并逐渐生长形成转移瘤[7］。为了适应转移过程中不断变化的周围环境，细胞要有较高的可塑性，而细胞去分化过程，如上皮细胞-间充质细胞转化，可以促进肿瘤细胞从原位分离、迁移、重新分化或者进行间质-上皮细胞转变，最终定植于转移部位[8］。研究发现，Hh-Gli1 信号通路以及下游靶基因VEGF 可能参与前列腺癌转移[9］。Gli1 可以促进肿瘤细胞发生上皮细胞间质转化，促进肿瘤细胞侵袭、转移[10］，Gli1 表达上调可促进前列腺癌细胞的增殖分化以及疾病发展进程[11］，抑制Gli1 的表达可以降低肿瘤细胞的侵袭、转移能力[5］。VEGF 通过作用相应受体来调节和促进血管内皮细胞增殖、分化和新生血管生成[12］，前列腺肿瘤细胞的生长、浸润、转移等生理学变化均依赖微血管为其供血[7］。研究表明，高表达的Gli1 与晚期原发肿瘤分期、阳性淋巴结转移、晚期临床分期显著相关，Gli1 阳性组微血管密度明显高于阴性组[13］。前列腺癌组织中VEGF 高表达，微血管密度显著增高，密度水平和血清VEGF 水平与肿瘤分级和病理分期密切相关[3，8］。

本研究结果显示，高Gli1 组的Gleason 分级≥8 分、T3/T4 期、前列腺癌已转移的比例显著高于低Gli1 组，高VEGF 组上述指标比例显著高于低VEGF 组，提示前列腺癌患者血清Gli1 和VEGF 水平越高，Gleason评分越高，T 分期越大，转移发生率越高。施雪松等[2］研究发现胃癌根治术后7 天，预后不良组的血清Gli1水平显著高于预后良好组，其水平高低是影响术后复发和转移的重要因素。Duque JL 等[3］研究发现，前列腺癌转移患者血清VEGF 浓度显著高于局限性前列腺癌患者和健康者，VEGF 浓度的高低可用于区分转移性和局限性前列腺癌。本研究结果发现前列腺癌转移患者血清Gli1 和VEGF 水平显著高于未转移者，与上述研究结论一致。

研究发现，Glil 可以促进VEGF 的表达从而提升肿瘤细胞的侵袭、转移能力[5］，阻断Hh 通路后，Gli1和VEGF 基因mRNA 和蛋白水平显著下降[4］，可抑制血管生成和肿瘤细胞侵袭。本研究结果显示，前列腺癌患者血清Gli1 和VEGF 水平呈显著正相关，二者水平的高低是前列腺癌是否转移的危险因素，说明VEGF很大可能是Gli1 的下游靶基因，通过激活Hh-Gli1 信号通路，增强Gli1 基因表达从而上调VEGF 的表达以促进血管生成和前列腺癌转移，二者是靶基因调节关系，亦提示血清Gli1 和VEGF 的高水平与前列腺癌转移存在显著相关性。谢喜等[14］研究结果亦显示前列腺癌转移患者血清VEGF 水平与骨转移的发生具有一定相关性。本研究进一步进行ROC 曲线分析，结果显示血清Gli1 和VEGF 联合检测诊断前列腺癌转移的诊断性能优于单独指标检测，提示联合检测血清Glil 和VEGF 水平对前列腺癌转移具有较好的诊断价值。

综上所述，血清Gli1 和VEGF 水平与前列腺癌转移存在相关性，二者联合检测对前列腺癌转移具有一定的诊断价值。目前国内有关血清Gli1 和VEGF 水平与前列腺癌转移的相关性研究报道较少，本研究样本量较少，需进行临床多中心大样本研究进一步验证。