感冒止咳颗粒中薄荷脑的质量分析研究

章顺，肖文涛

九江市检验检测认证中心，江西 九江 332000

感冒止咳颗粒由柴胡等九味中药材混合制成，适用于外感风热所致咳嗽［1］。方中柴胡、山银花疏散退热，共为君药；葛根解肌退热，青蒿退虚热，连翘、黄芩清热解毒，共为臣药；桔梗、苦杏仁宣降肺气以止咳化痰，薄荷脑芳香辛散，共为佐药，诸药合用，共奏清热解表、止咳化痰之功效。目前感冒止咳颗粒主要收载于《中国药典》2020 年版，其中定量测定的有效成分只有黄芩苷，且其他诸多研究也只限于感冒止咳颗粒中君方两药和臣方四药的主要有效成分［2-6］。而薄荷脑作为易挥发的佐药，具有清轻凉散，疏风解毒和提神醒脑的功效，有助于更好地治疗感冒和咳嗽，故为了更全面地保证感冒止咳颗粒的质量，本研究采用薄层色谱法和气相色谱法对12 个不同厂家生产的39 批感冒止咳颗粒中薄荷脑进行了准确的定性、定量分析。

1 仪器与材料

1.1 仪器

Agilent Technologies 7890A 气相色谱仪（Agilent公司）；YIY-UL300W-C 型超声机（上海艺源设备有限公司）；薄层加热板Ⅲ（Camag 公司）；薄层色谱数码系统（Camag 公司）；BP 211D 型电子天平（Sartorius 公司）。

1.2 对照品

薄荷脑对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110728-201707，含量100.0%）；萘对照品（国药集团化学制剂有限公司，批号：Lot.No.20160919，含量99.5%）。

1.3 材料与试剂

感冒止咳颗粒生产企业A（批号ZCB2007、ZCB2008、ZAB2114、ZAB2101、ZCB2105、ZBB1918），生产企业B（批号191101、200320、210105、201205、201210、210107），生产企业C（批号201203、201105、201206、201004、210102），生产企业D（批号1912023、2012013、2101002、2012012），生产企业E(批号W2011038、W2101004、W2101005），生产企业F（批号201110、200609、200608），生产企业G（批号201101、201203），生产企业H（批号200334、201124），生产企业I（批号201111、201112），生产企业J（批号20190602032、20190604086），生产企业K（批号210112、201116），生产企业L（批号20210108、20210107）。

薄层色谱板（德国默克公司，批号HX90656226）；超纯水；甲苯、乙酸乙酯、无水乙醇（均为分析纯）。

2 薄荷脑薄层色谱鉴别

2.1 薄层色谱条件

以甲苯-乙酸乙酯（19∶1）为展开剂，展开晾干后再喷以5%香草醛硫酸溶液，放于105 ℃的薄层加热板至斑点显色清楚［7］。

2.2 溶液配制

2.2.1 供试品溶液A、B、C、D 的制备称取A、B、C、D 不同厂家的感冒止咳颗粒各约10 g，分别置锥形瓶中，各加乙醇20 mL，超声处理30 min，滤过，取续滤液。

2.2.2 对照品溶液的制备取薄荷脑对照品适量，加乙醇制成每1 mL 含2 mg 的溶液。

2.2.3 阴性对照溶液的制备按照《中国药典》2020年版中感冒止咳颗粒的处方配比进行制备，在工艺最后不喷洒薄荷脑作为阴性对照物，取约10 g，照“2.2.1”项下制备方法制备。

2.3 鉴别试验

依次吸取对照品溶液5 μL，供试品溶液A 各5、10、15、20 μL，按照“2.1”项下薄层色谱条件进行，在白光下观察。结果表明：色谱图中，供试品与对照品在相应斑点位置上，显相同样的蓝色斑点，且当供试品点样量为20 μL 时，其色谱图中的薄荷脑斑点清晰，易于结果的判断，结果见图1。

图1 薄荷脑薄层鉴别色谱图

再依次吸取对照品溶液5 μL，供试品溶液A、B、C、D 和阴性对照溶液各20 μL，同法进行，在白光下观察。结果表明：供试品与对照品色谱在相应斑点位置上，显相同样的蓝色斑点，但不同厂家样品斑点深浅不一，同时阴性对照溶液显示无干扰，结果见图2。

图2 不同溶液的薄层鉴别色谱图

3 薄荷脑含量测定

3.1 色谱条件

安捷伦7890A 气相色谱仪（FID），色谱柱：DB-WAX（30.0 m×320 μm×0.25 μm）毛细管柱；柱温：130 ℃，保持12 min；载气：高纯N2，流速40 mL/min，空气流速400 mL/min，氢气流速30 mL/min；分流比5∶1；检测器温度：300 ℃；进样口温度：200 ℃；进样方式：直接液体进样；进样量5 μL。

3.2 溶液配制

3.2.1 萘内标溶液和对照品储备液的制备精密称取萘对照品22.59 mg 和薄荷脑对照品13.18 mg，分别置于50 mL 量瓶中，加入无水乙醇定容，即得。

3.2.2 对照品溶液的制备精密吸取4 mL 对照品储备液和1 mL 萘内标溶液于50 mL 容量瓶中，用无水乙醇定容，即得。

3.2.3 供试品溶液的制备称取“1.3”项下所有批号的感冒止咳颗粒约20 g 于锥形瓶中，精密加入50 mL 含萘的无水乙醇溶液（精密吸取“3.2.1”中萘内标溶液20 mL，置1 000 mL 量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，即得），超声30 min，滤过，取续滤液。

3.2.4 阴性对照溶液的制备称取“2.2.3”项下的阴性对照品的20 g，按“3.2.3”项下方法配制，即得。

3.3 方法学验证

3.3.1 系统适应性试验取“3.2.2，3.2.3，3.2.4”项下各溶液，按“3.1”进行GC 分析，结果显示，供试品与对照品色谱呈相同保留时间的薄荷脑色谱峰，且阴性样品无干扰，结果见图3。

图3 感冒止咳颗粒气相色谱图：A.对照品溶液；B.供试品溶液；C.阴性对照品溶液

3.3.2 线性关系考察将上述对照品储备液分别精密吸取1、2、4、10、20 mL 于50 mL 容量瓶中，精密加入1 mL 萘内标溶液，用无水乙醇定容，分别按“3.1”进样色谱分析。以薄荷脑与萘峰面积比（Y）对薄荷脑与萘质量浓度比（X）进行线性回归得到回归方程为Y=0.740 7X+0.008 3，相关系数r=0.999 8，说明在5.27×10-3～1.05×10-1mg/mL 范围内线性关系良好；用无水乙醇对对照品储备液进行逐级稀释进行色谱分析，当信噪比（S/N）分别为3 和10 时，来确定薄荷脑的检测限为8.02×10-4mg/mL，定量限为1.60×10-3mg/mL。

3.3.3 精密度考察取“3.2.2”项下对照品溶液，按上述GC 条件连续测定6 次薄荷脑与萘的峰面积比，分别为1.670，1.681，1.699，1.690，1.705 和1.703，RSD 值为0.9%。

3.3.4 重复性考察平行配制6 份同一批号的感冒止咳颗粒（企业G，批号201101）作为供试品溶液，再分别进行色谱分析，结果表明该批次薄荷脑含量的平均值为89.82 μg/g，RSD 值为1.4%。

3.3.5 稳定性考察取同一批号的感冒止咳颗粒分别在0、2、4、8、12、24 h 进行上述色谱分析，通过不同时间该样品中薄荷脑含量计算其RSD值为1.1%。

3.3.6 加样回收率考察平行称取上述供试品（企业G，批号201101）各9 份，每份约10 g，精密称定，置锥形瓶中，分别精密依次加入低、中、高3 个不同含量的薄荷脑对照品，按“3.2.3”项下方法进行制备待测溶液，再进行GC 分析，结果见表1。

表1 薄荷脑回收率结果

3.4 样品测定

取“3.2.3”项下所有供试品溶液，按上述条件进样色谱分析。以每袋10 g，通过内标法计算其每袋中薄荷脑含量，结果见表2。

表2 各厂家各批次中薄荷脑的含量测定结果（mg/袋）

3.5 包装袋吸附薄荷脑测定

感冒止咳颗粒均采用复合膜包装，而复合袋包装对薄荷脑有比较强的吸附作用。为了验证包装袋是否吸附薄荷脑，笔者选取了薄荷脑含量较低的生产企业A 的两个批号的薄荷脑包装袋，将其剪碎，加入锥形瓶中，按“3.2.3”制备包装袋溶液，再按“3.1”条件进样分析，得其薄荷脑含量分别为0.084 8 mg/袋和0.081 3 mg/袋。

4 讨论

4.1 TLC 测定的结果

当感冒止咳颗粒的取点样为20 μL 时，其TLC图中的蓝色斑点清晰，结果准确，且由此建立的TLC 法专属性强，阴性无干扰，可作为感冒止咳颗粒中薄荷脑的鉴别和质量控制。

4.2 选择萘作为内标物的原因

通过翻阅相关资料以及上述实验结果可知萘在该气相色谱条件下峰形及出峰时间较好，与薄荷脑有很好的分离，且阴性无干扰［8-10］。

4.3 样品测定的结果

根据表2 结果，39 批样品中均能检测出薄荷脑，但薄荷脑含量差异较大且整体数据普遍偏低，若根据本品配方，每1 000 g 样品中应含薄荷脑0.15 g，换算成每袋制剂应含薄荷脑1.5 mg，则只有1 批样品能达到此限度；如果用本次所有批次样品测定平均值下浮20%来拟定限度（0.220 8 mg/袋），依旧有22 个不同厂家不同批次的样品不能达到限度。

4.4 分析薄荷脑含量较低的原因

由于薄荷脑具有挥发性，其含量受温度、储存、包装材料等的影响，可能导致薄荷脑含量偏低，故本研究测定了两批包装袋中薄荷脑的含量，结果显示包装袋对薄荷脑确实有比较强的吸附作用，但从结果上看可能并不是薄荷脑含量偏低的主要原因，主要可能与生产过程中的投料多少、工艺是否存在喷洒不均匀、储存等因素有关，具体原因有待进一步研究。