食物过敏患儿牛奶、鸡蛋、花生3种食物组分蛋白特异性IgE抗体的表达水平变化

王霞，高岭，林谦，李玫，金玉（1.南京医科大学附属儿童医院a.消化科，b.检验科，南京 210008；2.南京市红十字医院检验科，南京 210008）

食物过敏是食物不良反应的一种，指一种或多种特定食物成分进入人体后使机体致敏，再次反复进入可导致机体对之产生异常免疫反应，引起生理功能紊乱和（或）组织损伤，进而引发一系列临床症状。研究数据表明，食物过敏发病率呈现逐年上升趋势，婴幼儿和儿童发病率显著高于成人［1］。60%儿童的食物过敏会累及消化系统，患儿还会因长期忌食导致营养摄入的不足或缺失［2］，如何精确诊断和管理食物过敏，对临床明确诊断、精准治疗具有重要意义。

过敏原组分诊断是利用提取天然变应原组分和重组技术在分子层次上辨别致敏的过敏原组分的诊断技术，是近年来新兴起的一种新型过敏原检测方法［3］。牛奶、鸡蛋、花生是儿童主要食物过敏原，患儿对其致敏后可产生不同的过敏症状，而过敏原组分检测能够评估产生严重过敏反应的风险。因此，分析临床确诊为食物过敏的患儿血清中的牛奶、鸡蛋、花生组分蛋白特异性免疫球蛋白E（sIgE）的变化，明确过敏原中引起过敏症状的蛋白质组分，可为食物过敏患儿预防、诊断和治疗提供临床科学依据。

1 资料与方法

1.1 研究对象 2020年1—12月南京市儿童医院消化科、食物过敏专病门诊的食物过敏患儿147例，男性98例，女性49例，年龄3月～12岁，中位年龄3岁，其中，＜1岁组28例，1～3岁组87例，＞3岁组32例。其中，累及呼吸道症状（反复咳嗽、喘息、打喷嚏）68例，消化道症状（腹痛、腹泻、呕吐）48例，皮肤症状（荨麻疹、湿疹）20例，过敏性结膜炎6例，发育迟缓5例。

单纯牛奶过敏13例，鸡蛋过敏13例，花生过敏1例；牛奶、鸡蛋混合过敏为90例，花生、鸡蛋混合过敏3例，鸡蛋、牛奶、花生混合过敏27例。其中，74例（50.34%）食物过敏儿童忌食过敏食物1月后进行食物激发试验再次出现过敏症状。

1.2 标本采集与处理 采集患儿清晨空腹静脉血3 mL，2 390×g离心10 min，分离血清，用于牛奶、鸡蛋、花生及其组分蛋白sIgE、总免疫球蛋白E（tIgE）检测。

1.3 主要仪器与试剂 EUROBlotMasterⅡ免疫印迹仪、EUROLineScan扫描系统、吸入性及食入性过敏原sIgE抗体检测试剂盒、变应原组分sIgE检测试剂盒（德国欧蒙公司）；ImmunoCAP过敏原检测仪器Phadia1000及其配套tIgE检测试剂盒（美国赛默飞公司）。

1.4 过敏原及组分蛋白sIgE检测 采用免疫印迹法检测牛奶、鸡蛋、花生sIgE。牛奶特异性组分蛋白：nBosd，乳铁蛋白；nBosd 4，α-乳白蛋白；nBosd 5，β-乳球蛋白；nBosd 6，牛血清清蛋白；nBosd 8，酪蛋白。鸡蛋特异性组分蛋白：nGald 1，累卵黏蛋白；nGald 2，卵清蛋白；nGald 3，伴清蛋白；nGald 4，溶酶菌。花生特异性组分：rArah 1，贮藏蛋白-7s球蛋白；rArah 2，贮藏蛋白-2s白蛋白；rArah 3，贮藏蛋白-11s球蛋白；rArah 9，脂质转移蛋白。

sIgE分级标准：0级，sIgE浓度＜0.35 IU/mL；Ⅰ级，sIgE浓度为0.35～0.70 IU/mL；Ⅱ级，sIgE浓度为0.70～3.5 IU/mL；Ⅲ级，sIgE浓度为3.5～17.5 IU/mL；Ⅳ级，sIgE浓度为17.5～50 IU/mL；Ⅴ级，sIgE浓度为50～100 IU/mL；Ⅵ级，sIgE浓度为＞100 IU/mL。

1.5 tIgE检测 采用荧光酶联免疫法检测tIgE水平。tIgE水平参考区间：0～60 kU/L。

1.6 统计学分析 采用SPSS24.0软件、EXCEL进行。率的比较采用卡方检验；正态分布的计量资料以±s表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用SNK-q检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同年龄组食物过敏患儿tIgE水平比较

147例食物过敏患儿中，血清tIgE阳性130例（88.44%），其中1～3岁组、3～12岁组患儿tIgE阳性率高于0～1岁组，差异有统计学意义（P＜0.01）。3～12岁组患儿tIgE水平高于1～3岁组、0～1岁组，差异有统计学意义（P＜0.01）。见表1。

表1 不同年龄组食物过敏儿童tIgE比较

2.2 各项过敏原组分阳性比例 130例牛奶sIgE阳性患儿中，各项牛奶特异性组分阳性比例依次为：nBosd 6为77.69%（101/130）、nBosd 5为75.38%（98/130）、nBosd 4为65.38%（85/130）、nBosd 8为40.00%（52/130）、nBosd为4.62%（6/130）。

133例鸡蛋sIgE阳性患者中，各项鸡蛋特异性组分阳性比例依次为：nGald 2为92.54%（124/133）、nGald 1为85.82%（115/133）、nGald 3为75.37%（101/133）、nGald 4为15.67%（21/133）。

31例花生sIgE阳性患儿中，各项花生特异性组分阳性率均较低，比例依次为：rArah 1为19.35%（6/31），rArah 2为9.68%（3%31），rArah 3为6.45%（2/31），rArah 4为3.23%（1/31）。

2.3 多种阳性（至少2种过敏原组分sIgE检测阳性）检出情况 130例牛奶sIgE阳性患儿中，106例（81.54%）患儿存在特异性组分多种阳性。其中，3种过敏原组分占比最多，为37.77%（40/130），5种牛奶组分均阳性为6.92%（9/130），5种牛奶组分均阴性为3.08%（4/130）。在牛奶多种组分过敏患儿中，nBosd 4、5、6同时阳性44.62%（58/130），nBosd 4、5、8同时阳性29.23%（38/130）。

133例鸡蛋sIgE阳性患者中，121例（90.98%）患儿存在特异性组分多种阳性。其中，3种过敏原组分占比最多，为55.64%（74/133），4种鸡蛋组分均阳性为15.04%（20/133），4种鸡蛋组分均阴性为4.51%（6/133）。在鸡蛋多种组分过敏患儿中，Gald 1、2、3同时阳性为69.92%（93/133）。

花生各组分阳性率均较低，且大部分患儿表现为单一组分阳性，多种组分阳性仅占6.45%（2/31）。

2.4 不同浓度级数鸡蛋、牛奶过敏患儿多种组分检出情况 见表2。在牛奶sIgE阳性患儿中，4例牛奶组分过敏原阴性主要见于Ⅰ级浓度患儿，5种组分牛奶过敏原阳性主要见于以Ⅲ～Ⅴ级患儿，另外，牛奶组分过敏原阳性各浓度级别患儿均出现2～4种牛奶组分过敏原阳性。

表2 不同浓度级数鸡蛋、牛奶过敏患儿多种组分检出情况

鸡蛋sIgE阳性患儿中，Ⅰ级浓度主要是单一组分蛋白过敏，中高浓度主要以多种组分为主，鸡蛋组分过敏原阴性主要见于Ⅰ级浓度患儿，4种鸡蛋过敏原组分阳性主要见于Ⅲ～Ⅴ级患儿。

3 讨论

本研究中南京地区147例食物过敏患儿过敏原主要为牛奶、鸡蛋。食物过敏儿童血清tIgE阳性88.44%，且随着年龄增加，tIgE水平也升高。虽然血清tIgE水平增高仅能提示Ⅰ型过敏反应的可能性大，但不能作为判定过敏状态的可靠指标［4］，在临床实践中尤其是食物过敏儿童中，常用tIgE水平结合患者病史以及临床症状来综合评估儿童过敏情况。

过敏原组分诊断近年来被认为在区分真正过敏和交叉反应、诊断食物过敏以及评估患者发生过敏反应的风险等方面有重要意义［5］。组分蛋白sIgE水平也可以提供诊断信息，而不仅仅是一个阳性检测结果，检测食物中特定蛋白IgE，比检测含多种蛋白质粗提液的IgE能提供更特异的诊断信息［6］。本研究中牛奶致敏儿童中的nBosd 6、5、4、8是牛奶过敏儿童的主要致敏组分；牛血清白蛋白也可能出现在牛肉过敏中，这可能与nBosd 6阳性最高有关。Ahrens等［7］研究发现，牛奶过敏的患儿中血清特异性牛奶α-乳球蛋白、β-乳球蛋白、酪蛋白IgE水平越低，患儿耐受牛奶的可能性越大。

鸡蛋清中含有23种致敏性或非致敏性的蛋白质［8］。卵黏蛋白属于耐热且耐消化组分，可引起严重过敏反应；卵白蛋白属于热敏感组分，存在于疫苗当中，是引起疫苗接种后不良反应的主要过敏原组分；伴清蛋白亦称为卵转铁蛋白和溶菌酶均属于热敏感组分。本研究中鸡蛋过敏儿童的过敏组分主要是Gald 2、Gald 1、Gald 3居多，分别为92.54%、85.82%、75.37%，这3种组分蛋白是主要致敏原，与国内外报道一致［9-10］。

花生中的致敏组分为12种，主要致敏组分为7S球蛋白、2S白蛋白、11S球蛋白、脂质转移蛋白等。我国儿童中对花生过敏发病率普遍较低，与国外一些研究结果有所差异，我国以Arah1、Arah1亚基和3条Arah3多肽过敏为主。我国花生Arah1和Arah3相对含量均低于国外花生品种，或可从某种程度上解释我国花生过敏发病率低于国外的原因［11］。

在本研究中，90.98%鸡蛋过敏、81.54%牛奶过敏患儿存在特异性组分多种阳性的情况，Gald 1、2、3同时阳性为69.92%，在鸡蛋多种组分阳性中最多；nBosd 4、5、6同时阳性为44.62%，在牛奶多价组分阳性中最多。本研究中鸡蛋、牛奶sIgE浓度越高，其致敏的组分蛋白种类也越多。研究表明，基于过敏原重组蛋白的组分检测对过敏原的标准化进程有着重要价值，并对控制脱敏治疗中的风险有重要意义［12］。