系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中lncRNA SNHG3 的表达观察

唐俊，蒋娇，唐秀生，蒋远文，赵娜，李顺波，蓝艳

1 右江民族医学院附属医院皮肤科，广西百色 533000；2 中南大学湘雅二医院皮肤科

系统性红斑狼疮（SLE）是一种累及多个系统、器官和组织的自身免疫性疾病［1-2］。全球约每10 万人中有 20～50 人患有 SLE［3］。在中国，SLE 的患病率高达70/10 万，明显高于日本或东亚其他国家［4］。SLE的性别比约为1∶9（男女之比），青少年和中年女性患病率最高［5］。研究［6］表明，SLE 可能与环境因素、遗传、先天免疫、获得性免疫或特定器官损伤有关。长链非编码RNA（lncRNAs）是一种不编码任何蛋白质，长度 超过 200 nt 的 RNA［7］。除了在获得性免疫和先天性免疫中起关键作用外，lncRNAs 还参与免疫细胞的分化和激活以及SLE 的发展调控［8-9］。小核仁RNA宿主基因3（SNHG3）的长度为2 238 bp，位于人类染色体 1p35.3 上［10］。最近研究［11-12］报道，SNHG3 在多种恶性肿瘤中异常表达，与肿瘤进展密切相关，可改变自主免疫系统，参与自身免疫性疾病的发生和发展［13］。单个核细胞中SNHG3 表达水平可预测 COPD 的发生发展［14］。SNHG3 在 SLE中的表达情况及其临床意义尚未见研究报道。2019年 2 月 1 日 —2021 年 12 月 20 日 我 们 观 察 了 SLE 患者外周血单个核细胞（PBMCs）中SNHG3 的表达变化，分析了单核细胞中SNHG3 与SLE 患者临床病理特征的关系，并探讨了其诊断SLE的效能。

1 资料与方法

1.1 临床资料 SLE 患者95 例（SLE 组），均符合2011 年美国风湿病学会的 SLE 诊断标准［15］。患者在参与研究前至少3 个月未系统使用皮质类固醇或免疫抑制药物。另择同期体检健康者95 例作为对照组。SLE 组中男 10 例、女 85 例，年龄（42.94 ±1.18）岁，BMI（21.19 ± 0.16）kg/㎡，SLE 疾病活动指 数（SLEDAI）［16］5.26 ± 1.90，24 小 时 尿 蛋 白（2.03±0.66）g，抗dsDNA抗体（46.98±15.66）IU/L；正常对照组中男 10 例、女 85 例，年龄（42.04 ±1.49）岁，BMI（21.44 ± 0.18）kg/㎡。两组性别组成、年龄以及BMI具有可比性，本研究得到右江民族医学院附属医院伦理委员会的批准，所有参与者均签署了知情同意书。

1.2 PBMCs中SNHG3的检测 ①外周血单个核细胞（单核细胞、T 细胞和B 细胞）的分离：取外周血4 mL 置于肝素钠抗凝管中1 680 g 离心5 min，然后丢弃血浆（上清液）。将血细胞颗粒再悬浮在相同体积的磷酸盐缓冲盐水中，所得悬浮液在离心管内缓慢分层到淋巴细胞分离液（北京索莱宝科技有限公司；P8900）上，然后以 800 g 离心 30 min。将白层内的PBMCs 收集到1.5 mL Eppendorf 管中，以6 720 g离心5 min，丢弃上清液。用CD3（艾博抗（上海）贸易有限公司；ab16669；标记T 细胞）、CD14（艾博抗（上海）贸易有限公司；ab221678；标记单核细胞）和CD19（艾博抗（上海）贸易有限公司；ab245235；标记B 细胞）抗体标记定义的PBMCs 亚群，在4 ℃用BD Biosciences 提供的相应抗体进行15 min 孵育后，用FACSAriaⅢ流式细胞仪（美国BD 公司；FACSAria）进行分类。②SNHG3的检测：采用定量实时聚合酶链反应（qPCR）法：从PBMCs 中提取总RNA，用紫外分光光度计（日本岛津公司；UV-1900）测定RNA 浓度，用PrimeScript RT 试剂盒（购自 TaKaRa 公司；RR014A）转录 RNA，以制备互补 DNA（cDNA）。Primer 5.0 软件设计引物，委托上海生工生物有限公司合成，以适当体积的cDNA 为模板进行PCR 扩增，SNHG3和GAPDH 的引物序列为：SNHG3正向引物：5′-cagtggtcttcctt-3′；反向引物：5′-ggcatgaaatgacctcat-3′；GAPDH 正向引物：5＇-GTCTGAGCGATGTGGTGGCT-3＇；反向引物：5＇-GGATTGGTCGTATTGGGC-3＇。 根 据 SYBR PrimeScript RT-PCR 试 剂 盒（TaKaRa，Ohtsu）的说明书进行 qPCR，用 2-ΔΔCt法计算SNHG3相对表达量。

1.3 统计学方法 采用GraphPad Prism 软件（6.0版本，美国GraphPad Software 公司）。正态分布检验采用K-S 检验，符合正态部分的计量资料以-x± s 表示，两组比较采用t 检验；多组间比较应用单因素方差分析，进一步组间比较采用LSD-t 检验；计数资料比较采用χ2检验。 SNHG3 表达与临床指标的相关性采用Pearson 相关分析。绘制受试者工作特征曲线（ROC），并用ROC 评价SNHG3对SLE 诊断的准确度。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组PBMCs 中LncRNA SNHG3 的相对表达量比较 SLE 组PBMCs 中SNHG3 的相对表达量为1.89 ± 0.52，对照组为 1.01 ± 0.30 两组比较，t=14.24，P＜0.01。SLE 组 T 细胞中 SNHG3 相对表达量为 1.00 ± 0.31，单核细胞中为 1.78 ± 0.50，B 细胞中为1.19±0.31。与SLE 患者T 细胞和B 细胞相比，单核细胞中SNHG3 表达上调（与T 细胞相比，t=13.90，P＜0.01；与 B 细胞相比，t=10.57，P＜0.01）。SLE 患者单核细胞中SNHG3 相对表达量高于对照组（t=22.45，P＜0.01）。

2.2 SLE 患者单核细胞中SNHG3 表达与SLE 疾病活动指数、24 小时尿蛋白、抗dsDNA 的关系 SLE患者单核细胞SNHG3表达与SLEDAI评分呈正相关（r=0.9493，P ＜0.01），和 24 小时尿蛋白呈正相关（r=0.6733，P＜0.01），与抗 dsDNA 抗体无相关性（r=0.1763＜0.3，P ＜0.01）。

2.3 单核细胞中SNHG3 诊断SLE 的准确度 单核细胞 SNHG3 诊断 SLE 的 ROC 见图 1，ROC 曲线下表面积（AUC）为 0.8796（P＜0.05），95% 置信区间：0.752～0.957，灵敏度88.5%，特异度77.7%。

图1 单核细胞中SNHG3诊断SLE的ROC

3 讨论

在骨肉瘤［17］、非小细胞肺癌［18］等肿瘤中发现SNHG3 特异性高表达，LncRNA-SNHG3 通过miRNA-151a-3p/RAB22A 轴调控骨肉瘤的侵袭和迁移［17］。 LncRNA-SNHG3 被 E2F1 激 活 ，通 过 激 活TGF-β IL-6/JAK2/STAT3 通路促进非小细胞肺癌细胞的增殖和迁移［18］。研究表明，长非编码RNA SNHG3 是小鼠胚胎干细胞自我更新和多能干细胞分化所必需的［19］，对缺氧缺血新生儿脑损伤起保护作用。SLE 是一种自身免疫性疾病，发病时具有高度的变异性，因此很难得到正确和及时的诊断，故SLE的早期诊断对临床治疗具有重要意义［20］。

PBMCs 亚群，包括 T 细胞、B 细胞和单核细胞，与细胞因子一起参与SLE 的发病机制，随着SLE 病理过程的进展，信号分子和模式识别受体在一定程度上表达。越来越多的证据表明，单核细胞在先天性和获得性免疫应答中起着关键作用［21］。单核细胞在SLE患者存在表型和谱系的显著变化［22］。SNHG3主要在单核细胞中表达，这表明SNHG3可能通过调节单核细胞的功能参与SLE。研究［23-24］证实，单核细胞在SLE 患者中表现出异常行为，这种异常主要因为细胞因子、免疫复合物异常或遗传的多态性。当单核细胞的增殖能力受损，发育成巨噬细胞的能力会发生改变，进而妨碍了对凋亡碎片的吸收，从而引起SLE。SNHG3 是否通过该方式影响SLE 发生发展，还需要进一步研究探讨。我们进一步分离了PBMCs 亚群，发现SNHG3在SLE 患者单核细胞中的表达高于T 细胞或B 细胞，与文献报道一致，说明单核细胞中SNHG3 的表达在SLE 的发展中起重要作用。

SLE 是一种全身性自身免疫性疾病，多系统受累。该病有多种表现形式，患者的临床表现各不相同，可能是轻微的皮肤黏膜表现，亦或是多器官或严重的中枢神经系统损伤，根据目前诊断标准，需要通过多种免疫因子与多种方式诊断才能确诊，亟须进一步提高SLE的诊断效率。SLEDAI评分、24小时尿蛋白均是公认的SLE疾病发展的关键指标。本研究结果显示，SLE 患者单核细胞SNHG3 表达与SLEDAI 评分、24 小时尿蛋白均呈正相关。提示单核细胞中SNHG3 表达可能与SLE 的发展相关。同时，我们用ROC 评估了单核细胞中SNHG3 对SLE 的诊断价值，结果显示，SNHG3诊断SLE的AUC为0.8796，95%置信区间：0.752～0.957，灵敏度88.5%，特异度77.7%，提示单核细胞SNHG3 可能是敏感的SLE备选诊断标记物。

总之，lncRNA SNHG3 在SLE 患者单核细胞中的表达显著上调，与SLE患者的病情有关，且是诊断SLE 的潜在生物学标志物。当然，本研究也有不足之处，如未进行SNHG3 在SLE 中的可能调控机制、调控的蛋白与通路等方面的探讨，有待后续研究中进一步探讨。