LncRNA-DNAJC3-AS1在宫颈鳞癌组织中的表达及意义*

吴 双 戚庭月 王成海

1 扬州大学医学院病理教研室，江苏省扬州市 225001; 2 江苏省宝应县人民医院妇产科; 3 扬州大学附属医院超声科

子宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤。近几十年宫颈细胞学筛查的普遍应用，使宫颈癌和癌前病变得以早期发现和治疗，宫颈癌的发病率和死亡率已有明显下降[1-2]。长链非编码RNA(long non-coding RNA, lncRNA)是长度>200个核苷酸且无编码蛋白功能的RNA。近年来研究发现lncRNA在宫颈癌组织和细胞中表达异常，影响宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭等过程,在宫颈癌的发生发展中起重要的调控作用[2]。lncRNA-DNAJC3-AS1是lncRNA其中的一员。本研究采用RNA原位分子杂交技术检测lncRNA-DNAJC3-AS1在宫颈鳞癌组织中的表达情况，分析lncRNA-DNAJC3-AS1的表达水平与宫颈鳞癌病理参数的相关性及探讨其临床意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 收集2017年1月—2021 年6月扬州大学附属医院妇产科手术的73例经病理科医师证实的子宫颈鳞状细胞癌癌组织标本。患者年龄29～72 岁，中位年龄为52岁。标本使用及临床资料的收集均经扬州大学医学院伦理委员会批准，并与患者签署知情同意书。

1.2 方法 RNA原位分子杂交(RISH)实验：lncRNA-DNAJC3-AS1探针和原位杂交试剂盒购买于BOSTER生物工程有限公司。主要实验步骤如下：石蜡切片脱蜡、胃蛋白酶消化；在预杂交后使用lncRNA-DNAJC3-AS1探针进行杂交，再滴加与lncRNA连接的一抗后，最后滴加二抗。使用DAB显色，胞核复染成蓝色，光镜下观察。lncRNA-DNAJC3-AS1探针序列为AGCGATTGTGGAAGACCCTG和ATTTCCCCTGGTAAGCGCAA。

1.3 观察指标 光学显微镜下观察lncRNA-DNAJC3-AS1阳性染色情况，结果判定：细胞内出现棕黄色颗粒为lncRNA-DNAJC3-AS1阳性细胞。随机选择5个高倍光镜视野，计算阳性细胞与总细胞数的比率，<10%为低表达阳性组，10%～100%为高表达阳性组。然后观察高表达阳性组和低表达阳性组与临床病理参数的相关性，与患者预后生存的关系。

2 结果

2.1 RISH检测lncRNA-DNAJC3-AS1在宫颈鳞癌中的表达 RISH实验结果表明，73例宫颈鳞癌组织中lncRNA-DNAJC3-AS1的阳性染色为棕黄(褐)色，颗粒染色深浅不一、大小不等，以细胞浆染色为主；正常宫颈组织中染色极少，主要为阴性表达，见图1。lncRNA-DNAJC3-AS1在宫颈鳞癌组织中呈阳性表达，约占83.56 % (61/73)；与癌旁正常组织阳性表达(5.48%，4/73)之间有统计学差异(χ2=90.096，P<0.05)。

a b c

2.2 宫颈鳞癌组织中lncRNA-DNAJC3-AS1阳性表达及临床意义 首先将lncRNA-DNAJC3-AS1表达水平分为两组：低表达组和高表达组，分组依据是低表达组为阳性率≤10%，高表达组为阳性率10%～100%。结果得到高表达lncRNA-DNAJC3-AS1 57例，低表达lncRNA-DNAJC3-AS1 16例。通过统计分析得出lncRNA-DNAJC3-AS1表达水平与肿瘤分化程度和淋巴结转移密切相关(P<0.05)，而与患者年龄、HPV感染、肿瘤大小和TNM分期之间的无相关性(P>0.05)。见表1。

2.3 lncRNA-DNAJC3-AS1表达与患者生存预后的关系 高表达组中位生存时间(OS)为19个月(四分位区间 4～27个月)，低表达组中位OS为49个月(四分位区间23～54个月)。低表达组OS均明显长于高表达组(χ2=33.85，P<0.05)，见图2。

3 讨论

在全球癌症中宫颈癌发病率排名第三，也是发展中国家最常见的妇科癌症[3-4]。该病主要与细菌感染、宫颈损伤及HPV持续感染等密切相关；目前认为长期宫颈炎可导致宫颈非典型增生(CIN)，进而发生癌变[5]。宫颈癌和其他癌症一样，其预后不佳与肿瘤细胞侵袭转移和复发有关，也是宫颈癌患者死亡的主要原因。因此，深入研究宫颈癌增殖和侵袭转移的分子机制，对其诊治具有重要意义。

表1 宫颈鳞癌组织中lncRNA-DNAJC3-AS1的表达及其意义

lncRNA异常表达与宫颈癌增殖、凋亡抵抗、侵袭转移等恶性转化基本特征相关，可作为宫颈癌的诊断新型标记物和治疗靶点[6-7]。研究显示lncRNA-DNAJC3-AS1高表达与结直肠癌患者预后不良相关，lncRNA-DNAJC3-AS1通过表皮生长因子受体(EGFR)通路调控脂肪酸合酶能够促进结直肠癌进展[8]。lncRNA-DNAJC3-AS1在透明肾细胞癌中表达上调，沉默lncRNA-DNAJC3-AS1可减少可抑制透明肾细胞癌细胞增殖和侵袭并诱导细胞凋亡[9]。下调lncRNA-DNAJC3-AS1表达能够抑制结肠癌细胞的EMT、迁移和侵袭[10]。在调控机制上lncRNA-DNAJC3-AS1通过与miR-144靶向结合促进乳腺癌细胞增殖和顺铂耐药[11]。

图2 lncRNA-DNAJC3-AS1表达与患者预后的生存曲线图

目前，还没有文献报道lncRNA-DNAJC3-AS1在宫颈癌中的表达情况，其生物学活性尚未明了，这也是本课题的研究所在。本文通过RISH实验得出在大多数宫颈鳞癌组织中lncRNA-DNAJC3-AS1呈阳性表达，而在癌旁正常宫颈组织里呈阴性表达，提示lncRNA-DNAJC3-AS1可能是一种新的宫颈鳞癌的癌变转化基因，其突变激活后可以促进宫颈癌的生长发育。

在分析高表达阳性的lncRNA-DNAJC3-AS1与宫颈鳞癌患者临床病理资料的关联性上，通过统计分析表明lncRNA-DNAJC3-AS1与宫颈鳞癌组织的肿瘤分化程度和淋巴结转移密切相关，说明强阳性表达lncRNA-DNAJC3-AS1的宫颈鳞癌肿瘤分级程度低，恶性程度高，提示患者的预后不良，低分化的肿瘤更容易从宫颈原发病灶向邻近的淋巴管转移，并向淋巴结转移，晚期甚至于向远处转移。虽然与患者的年龄、HPV感染、肿瘤大小和TNM分期之间无相关性，但不排除与我们的标本量较少有关。在lncRNA-DNAJC3-AS1表达水平与宫颈鳞癌患者生存预后的关系统计中，低阳性表达lncRNA-DNAJC3-AS1的宫颈鳞癌患者存活时间明显长于高阳性表达lncRNA-DNAJC3-AS1的患者，这也进一步提示了lncRNA-DNAJC3-AS1可以作为宫颈鳞癌患者预后判定的一个重要指标。至于阳性表达lncRNA-DNAJC3-AS1的宫颈鳞癌细胞有没有抗药性，目前我们还没有实验数据，有待于进一步实验证实，如有抗药性，则患者的生存时间短，死亡率高。

综上所述，本研究结果说明lncRNA-DNAJC3-AS1可能作为宫颈鳞癌发生和患者预后判断的一种新肿瘤标志物。本实验探讨lncRNA-DNAJC3-AS1在宫颈鳞癌中的表达情况及其临床病理意义，为进一步研究其相关性功能提供理论依据，也为宫颈鳞癌的诊断和治疗提供新的临床策略。