原发性肝癌患者血清miR-29a相对表达水平及影响因素分析*

原发性肝癌(HCC)多由HBV和(或)HCV感染后逐渐发展导致，HCC起病较为隐匿，部分患者确诊时已处于中晚期，临床预后较差。甲胎蛋白(AFP)是HCC的肿瘤标志物之一，但其诊断敏感度和特异度均较低

。微小RNA(miRNA)是一种长度为19～25个氨基酸的非编码小RNA，其在调节信号转导、免疫应答、细胞增殖及分化等多种重要生理过程中均扮演了重要作用

。本课题组前期研究结果显示，miRNA-29a能显著促进HBV的复制并加重肝脏损伤

。本研究在前期研究的基础上，通过RT-PCR法探讨miR-29a在HCC患者血清中相对表达水平及其临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2018年1月1日至2020年6月1日于我院就诊的30例慢性乙型肝炎(CHB)患者(CHB组)、45例乙型肝炎肝硬化(HBVRC)患者(HBVRC组)、60例HCC患者(HCC组)和来自体检中心的40例健康体检者(对照组)作为研究对象。CHB组患者男20例，女10例，平均年龄(54.75±7.93)岁；HBVRC组患者男25例，女20例，平均年龄(56.22±82.44)岁；HCC组患者男36例，女24例，平均年龄(55.43±8.96)岁；对照组人员男22例，女18例，平均年龄(55.17±7.45)岁。4组研究对象在性别和年龄上差异无统计学意义。

1.2 诊断标准 HCC及CHB诊断标准符合《原发性肝癌诊疗规范(2017年版)》和《慢性乙型肝炎防治指南(2015更新版)》

。HBVRC诊断依据为既往有乙型肝炎病史多年，通过我院B超或CT确诊肝硬化。所有患者近3个月内均未进行系统进行抗HBV、抗纤维化药物及保肝药物治疗，均没有合并其他慢性肝脏疾病、严重肾功能不全、心肺功能不全及哺乳、妊娠妇女，精神疾病者。上述所有研究对象均知情同意且签署知情同意协议书。

1.3 研究方法

1.3.1 血清miR-29a表达水平的检测 于清晨空腹抽取4组研究对象外周静脉血，按常规检测方法操作。

lncRNA是一类长度超过200nt的非编码RNA。 Ling等[23]研究发现，CCAT2 lncRNA在微卫星稳定的结直肠癌组织中呈过表达，并且能够促进肿瘤细胞的生长、转移和染色质不稳定。 最近研究[24]发现MALAT-1 lncRNA可由肿瘤细胞分泌到外周血，其在血浆中的表达不受冷热酸碱环境影响，证实了循环lncRNAs 作为标志物用于肿瘤诊断和预测的可行性和可靠性。lncRNAs在肿瘤发生发展中可能发挥着关键作用，为全面认识肿瘤和发现新标志物提供了新的视角。 但有关lncRNA作为肿瘤标志物的研究尚处于初步阶段，我们需要大规模临床探究和验证其临床应用价值。

2.4 相关性分析 HCC组患者血清AFP水平为(654.25±35.14)ng/ml。

相关分析结果显示，HCC患者血清miR-29a相对表达水平与AFP呈现显著正相关性，相关系数

=0.863，

<0.05。

2 结果

2.5 血清AFP、miR-29a单独及联合诊断HCC的临床效能 以CHB组、HBVRC组和HCC组患者血清中AFP和miR-29a表达水平作为检验变量，以HCC组患者血清中AFP和miR-29a表达水平作为状态变量，绘制ROC曲线。结果显示，AFP诊断HCC的曲线下面积为0.836(95%

：0.769～0.903)，当截断值为544.40 ng/ml时，此时敏感度和特异度分别为81.00%和66.70%；miR-29a相对表达水平诊断HCC的曲线下面积为0.913(95%

：0.866～0.959)；当截断值为0.755，此时敏感度和特异度分别为84.3%和89.3%；AFP联合miR-29a诊断HCC的曲线下面积为0.942(95%

：0.905～0.979)，敏感度和特异度分别为90.00%和92.62%。

2.2 HCC患者血清miR-29a相对表达水平的单因素分析 见表1。

对于企业这一特殊企业机构而言，想要更好的改善传统财务管理体制下财务管理状况，就必须构建完善健全的预算责任监督机制，杜绝企业发展期间的收支混乱问题出现。具体而言，主要包括以下几点：(1)在企业内部建立不同层级不同经济责任制管理体系，将不同层级管理人的责任及权责范围规划清晰，确保预算出现问题时“查有此人”。(2)建立预算监督检查制度，并在此期间完善固有的预算评估制度。在预算计划确定并执行期间，监督检查人员需要实时跟踪定位预算资金的实际应用情况，并就预算应用结果进行科学评估，一旦发现问题，需要对其进行反复查验，直至找出根源为止，最终确保预算资金能够真正应用于经营项目中。

1.3.2 HCC患者临床病理资料 通过我院住院系统收集HCC组患者的临床病理资料。

说来也怪，自有这观音阁后，村里的水渠与河流从没有干涸过，也没泛滥过。而之前，村里是发过大水的，水漫过渠道，冲破堤岸，冲毁桥梁，淤塞了河床。

2.3 HCC患者血清中miR-29a相对表达水平的Logistic回归分析 Logistic分析结果显示，存在门静脉癌栓(

=3.564)、远处转移(

=4.029)、TNM分期越高(

=5.113)均是HCC患者血清miR-29a相对表达水平升高的危险因素。见表2。

1.4 统计学方法 采用SPSS 22.0统计学软件进行数据处理，数据若符合正态分布，以均数±标准差表示，采用

检验。若不符合正态分布，以中位数和四分位数表示，两样本比较采用

-

检验。多组间比较采用方差分析。相关性分析采用

检验。影响因素采用

回归分析。诊断效能利用ROC曲线分析。以

<0.05为差异有统计学意义。

2.1 4组研究对象血清miR-29a的相对表达水平 见图1。

3 讨论

miRNA属于非编码RNA，不同miRNA在HCC的发生发展中起到促进或抑制作用

，近年来多数研究致力于探讨血液中不同miRNA相对表达水平对于HCC的早期诊断

。

三是创新优化政务环境。全面落实深化改革各项工作，创造性成立商事审批服务虚拟办公室，打破传统审批固化程序，重构审批流程，提前介入技术审查和业务指导，实行“一窗受理、集成服务”，目前在全省“施工许可50天”改革基础上，最少可为项目建设方节约12-17天时间。畅通政企沟通渠道，设立企业投诉热线，在“江苏姜堰”微信公众号开通网上投诉渠道，对企业的合理合法诉求第一时间回应、第一时间解决。

MiRNA异常表达与多种肿瘤的发病机制有关，同一个miRNA可有多个靶基因，而多个miRNA也可调节同一个基因的表达，人类miRNA-29主要由miR-29a、miR-29b1、miR-29b2和miR-29c组成，其中miR-29a和多种肿瘤的发病机制密切相关

。研究证实，结直肠癌、乳腺癌及慢性淋巴细胞白血病患者血清中miR-29a表达水平显著上调，且与肿瘤的转移、侵袭及不良预后有关，目前关于HCC患者血清中miR-29a表达水平尚不清楚

。本研究结果显示，当慢性乙型肝炎逐渐发展为肝硬化和HCC的过程中，患者血清中miR-29a表达水平呈现逐渐上升趋势，提示miR-29a在CHB过渡到HCC的过程中可能扮演了重要作用。进一步通过Logistic回归分析发现，存在门静脉癌栓、远处转移和较高TNM分期的HCC患者血清中miR-29a相对表达水平显著升高，说明miR-29a高表达与HCC患者预后不良有关。在致病机制中，本课题组前期通过对HBV感染的HepG2.2.15细胞研究后发现，miR-29a主要是通过调控SMARCE1而促进HBV病毒的复制和过表达

，考虑到肝癌多数是由于慢性乙型肝炎发展而来，因此这也从临床角度上解释了miR-29a在CHB向HCC发展过程中所扮演的重要作用；Kong等

研究证实miR-29a在p21-HBx转基因小鼠、HBx转染肝癌HepG2-X细胞和HepG2.2.15细胞中表达水平显著增加，同时在HCC患者肝癌组织中同样发现miR-29a表达水平上调，细胞实验证实过表达miR-29a能促进HepG2细胞的迁移，而特异性miR-29a抑制剂可以部分抑制HepG2-X细胞的迁移；此外，生物信息学分析结果显示，miR-29a调控的靶基因主要参与调控转录、细胞黏附、细胞增殖与凋亡等生物学过程，主要涉及到PI3K-AKT、JAK-STAT、T细胞受体信号通路等

。因此，上述结果均提示miR-29a在HCC的发生发展中扮演了重要作用。

第三种奖励把班级氛围推向了高潮，同学们个个像打地鼠游戏中的地鼠一样，接二连三地站起来，讲述感动他们的故事：

本研究结果显示，HCC患者血清miR-29a相对表达水平显著升高，且与AFP呈现显著正相关性，提示miR-29a有可能作为HCC的一项血清学标志物。HCC患者血清miR-29a相对表达水平鉴别乙型肝炎和肝硬化的AUC可达0.913，而AFP仅仅为0.836，且miR-29a在诊断HCC的敏感度和特异度均高于AFP，当miR-29a联合AFP诊断HCC具有更高的AUC、敏感度及特异度。

综上所述，HCC患者血清中miR-29a相对表达水平显著上调，可作为HCC的一种血清学标志物，与AFP联合诊断时具有更高的敏感度和特异度。但本研究的局限性在于未探讨HCC患者癌组织中miR-29a的表达水平及血清或组织中miR-29a表达水平与预后的关系，这也是本课题组下一步研究的方向。

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